微生物實驗細菌培養(yǎng)接種

1、第二次實驗課內內 容容1.細菌培養(yǎng)法（錄象）細菌培養(yǎng)法（錄象）2.基礎培養(yǎng)基制備（講解示教）基礎培養(yǎng)基制備（講解示教）3. 細菌接種法（一份細菌接種法（一份/組）講解組）講解4.人體、物品中細菌檢查（一份人體、物品中細菌檢查（一份/組）講解組）講解5.飛沫、空氣中細菌檢查（一份飛沫、空氣中細菌檢查（一份/桌）講解桌）講解6.觀察細菌代謝產物（講解）觀察細菌代謝產物（講解）7. 第一次實驗報告評講第一次實驗報告評講基礎培養(yǎng)基的制備基礎培養(yǎng)基的制備去筋膜黃牛肉絞碎去筋膜黃牛肉絞碎500g加入加入1000ml蒸餾水蒸餾水直接煮沸直接煮沸2小時小時調整酸堿度至調整酸堿度至ph 7.6過濾，補足失水過濾

2、，補足失水重新校正重新校正ph一次一次分裝，高壓滅菌，分裝，高壓滅菌，15磅（磅（121.3）1520分鐘分鐘檢菌如無細菌生長檢菌如無細菌生長（液體透明）即可應用（液體透明）即可應用脫脂紗布過濾，按比例加入脫脂紗布過濾，按比例加入1蛋白胨、蛋白胨、0.5%nacl，0.1%k2hpo4加熱溶解補足水至加熱溶解補足水至1000ml4浸泡過夜煮沸半小時浸泡過夜煮沸半小時人體、物品中細菌檢查人體、物品中細菌檢查手衣發(fā)錢材料：普通平板材料：普通平板 （1份份/組）組）蓋上，標記蓋上，標記 , , 置置 3737，18-24h18-24h后觀察后觀察。飛沫、空氣中細菌檢查飛沫、空氣中細菌檢查材料：血平板

3、材料：血平板 （1份份/組）組） 距口1520cm用力咳嗽三次置空氣中（避日光照射）30分鐘飛飛 沫沫空空 氣氣蓋上，標記蓋上，標記 , , 置置 3737，18-24h18-24h后觀察。后觀察。結果觀察結果觀察血平板血平板表皮葡萄球菌在血表皮葡萄球菌在血瓊脂平板培養(yǎng)基上瓊脂平板培養(yǎng)基上形成不溶血的菌落。形成不溶血的菌落。甲型溶血性鏈球菌形甲型溶血性鏈球菌形成的成的溶血現(xiàn)象也稱溶血現(xiàn)象也稱為甲型溶血現(xiàn)象或草為甲型溶血現(xiàn)象或草綠色溶血現(xiàn)象，屬于綠色溶血現(xiàn)象，屬于不完全溶血。不完全溶血。金黃色葡萄球菌形成金黃色葡萄球菌形成的的溶血現(xiàn)象也稱為乙溶血現(xiàn)象也稱為乙型溶血現(xiàn)象，屬于完型溶血現(xiàn)象，屬于完全

4、溶血。全溶血。細菌培養(yǎng)接種法細菌培養(yǎng)接種法平板劃線法平板劃線法菌種：混合菌液菌種：混合菌液材料：普通平板材料：普通平板用具：接種環(huán)用具：接種環(huán)方法：分區(qū)劃線方法：分區(qū)劃線1區(qū)區(qū)2區(qū)區(qū)3區(qū)區(qū)4區(qū)區(qū)原始區(qū)域半固體培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基 細菌培養(yǎng)接種法細菌培養(yǎng)接種法-斜面接種、液體接種、半固體斜面接種、液體接種、半固體菌種：大腸桿菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液體、半固體培養(yǎng)基用具：接種環(huán)、接種針液體培養(yǎng)基結果觀察結果觀察普通平板普通平板普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，大腸埃希菌形成菌苔和菌落生長現(xiàn)象。普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，大腸埃希菌形成菌苔和菌落生長現(xiàn)象。注意：大小、顏色、透明度、凸起度、表面干燥或濕潤、光滑或粗糙

5、、邊緣是否整齊及血平板上的溶血情況。結果觀察結果觀察液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基結果觀察結果觀察斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)基上大腸埃希菌形成的菌苔生長現(xiàn)象菌苔菌苔（mossy）指細菌生長繁殖后，在培養(yǎng)基 表面形成的一層培養(yǎng)物結果觀察結果觀察半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基1、 擴散生長：具有動力的細菌,可見培養(yǎng)物擴散和培養(yǎng)基變混濁。即有鞭毛的細菌：由穿刺線向外擴散生長（羽毛狀或云霧狀）2、原位生長：沒有動力的細菌，可見培養(yǎng)物沒有擴散，培養(yǎng)基仍然澄清。即即無鞭毛的細菌： 沿穿刺線生長 2 1 1 2細菌代謝產物觀察細菌代謝產物觀察 細菌的酶不一樣，對營養(yǎng)物質的分解能力不一樣，產生的代謝產物也不一樣。常見：

6、 糖發(fā)酵試驗 吲哚（indol）試驗 甲基紅（methyl red）實驗 vp（voges-proskauer）試驗 枸櫞酸鹽利用（citrate utilization）試驗 尿素酶試驗 硫化氫試驗糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗不同細菌分解糖類的能力和代謝產物不同。 甲基紅（甲基紅（methyl red）實驗）實驗m - 甲基紅（methyl red）實驗葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基紅 -葡萄糖丙酮酸 甲基紅 +吲哚（吲哚（indol）試驗）試驗i-吲哚（吲哚（indol）試驗）試驗色氨酸色氨酸吲哚吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚 對二甲基氨基苯甲醛對二甲基氨基苯甲醛 枸櫞酸鹽利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗c -枸櫞

7、酸鹽利用（citrate utilization）試驗利用枸櫞酸鹽生長 +不能利用 - 硫化氫試驗硫化氫試驗硫化氫試驗（醋酸鉛培養(yǎng)基）某些細菌分解含硫氨基酸，生成h2s，h2s遇鐵鹽（如硫化亞鐵、醋酸鉛等），則形成黑褐色硫化鐵（鉛）沉淀物，而呈黑色為（）。 尿素酶試驗尿素酶試驗 產生氨使培養(yǎng)基變堿，指示劑顯紅色，為陽性。如：變形桿菌為陽性。imvic試驗試驗i - 吲哚吲哚（indol）試驗試驗m - 甲基紅甲基紅（methyl red）試驗試驗v - vp（voges-proskauer）試驗試驗c -枸櫞酸鹽利用枸櫞酸鹽利用（citrate utilization）試驗試驗imvic試驗試

8、驗 i m vi c試驗試驗 大腸埃希菌大腸埃希菌 + + - - 產氣桿菌產氣桿菌 - - + + imvic試驗：試驗：是吲哚、甲基紅、是吲哚、甲基紅、v-p以及枸櫞酸鹽利用試驗四者的合稱。常用于以及枸櫞酸鹽利用試驗四者的合稱。常用于腸道桿菌的鑒定腸道桿菌的鑒定。實驗小結實驗小結1、三類培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基用于增菌； 均勻混濁、沉淀、表面生長 半固體培養(yǎng)基觀察動力；保存菌種（6個 月）；穿刺線，擴散生長 固體培養(yǎng)基分離純化；保存菌種（1個月） 菌落、菌苔2、imvic試驗第三次實驗課內容第三次實驗課內容1、熱力對細菌和芽胞的殺菌作用、熱力對細菌和芽胞的殺菌作用2、紫外線的殺菌作用、紫外線的殺菌作用3、常用化學消毒劑的殺菌作用和抗生素敏感試驗、常用化學消毒劑的殺菌作