食品中脂肪酸的測定

1、食品中脂肪酸的測定基礎(chǔ)知識：油脂是食品的重要組分和營養(yǎng)成分。油脂中脂肪酸組分的測定最常用的方法是氣相色譜法。樣品前處理采用酯交換法（甲酯化法），圖譜解析采用歸一化法。氣相色譜(gc) 是一種把混合物分離成單個組分的實驗技術(shù)它被用來對樣品組分進行鑒定和定量測定。一個氣相色譜系統(tǒng)包括： 可控而純凈的載氣源能將樣品帶入gc系統(tǒng) 進樣口同時還作為液體樣品的氣化室 色譜柱實現(xiàn)隨時間的分離 檢測器當(dāng)組分通過時檢測器電信號的輸出值改變從而對組分做出響應(yīng) 某種數(shù)據(jù)處理裝置氫火焰離子化檢測器(fid) ：氫氣和空氣燃燒所生成的火焰產(chǎn)生很少的離子。在氫火焰中，含碳有機物燃燒產(chǎn)生cho+離子，該離子強度與含量成正比

2、。該檢測器檢出的是有機化合物，無機氣體及氧化物在該檢測器無響應(yīng)。當(dāng)純凈的載氣（沒有待分離組分）流經(jīng)檢測器時產(chǎn)生穩(wěn)定的電信號就是基線。1載氣(氮氣)；2氫氣；3壓縮空氣；4減壓閥(若采用氣體發(fā)生器就可不用減壓閥)；5氣體凈化器(若采用鋼瓶高純氣體也可不用凈化器)；6穩(wěn)壓閥及壓力表；7三通連接頭；8分流不分流進樣口柱前壓調(diào)節(jié)閥及壓力表；10尾吹氣調(diào)節(jié)閥；11氫氣調(diào)節(jié)閥；12空氣調(diào)節(jié)閥；13流量計(有些儀器不安裝流量計)；14分流不分流進樣口；15分流器；16隔墊吹掃氣調(diào)節(jié)閥；17隔墊吹掃放空口；18分流流量控制閥；19分流氣放空口；20毛細管柱；21fid檢測器；22檢測器放空出口；方法來源：gb

3、 5009.168-2016 食品安全國家標準 食品中脂肪酸的測定1、范圍本方法規(guī)定了食品中脂肪酸含量的測定方法。本方法適用于游離脂肪酸含量不大于2%的油脂樣品的脂肪酸含量測定。2、原理樣品中的脂肪酸經(jīng)過適當(dāng)?shù)那疤幚恚柞セ┖?，進樣，樣品在汽化室被汽化，在一定的溫度和壓力下，汽化的樣品隨載氣通過色譜柱，由于樣品中組分與固定相間相互作用的強弱不同而被逐一分離，分離后的組分到達檢測器（detceter）時經(jīng)檢測口的相應(yīng)處理（如fid的火焰離子化），產(chǎn)生可檢測的信號。根據(jù)色譜峰的保留時間定性，歸一化法確定不同脂肪酸的百分含量。3、試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為gb/t668

4、2規(guī)定的一級水。3.1石油醚：沸程3060。3.2甲醇(ch3oh)：色譜純。3.3正庚烷ch3(ch2)5ch3：色譜純。3.4無水硫酸鈉(na2so4)。3.5異辛烷(ch3)2chch2c(ch3)3：色譜純。3.6硫酸氫鈉(nahso4)。3.7氫氧化鉀(koh)。3.8氫氧化鉀甲醇溶液(2mol/l)：將13.1g氫氧化鉀溶于100ml無水甲醇中，可輕微加熱，加入無水硫酸鈉干燥，過濾，即得澄清溶液，有效期3個月。3.9混合脂肪酸甲酯標準溶液：取出適量脂肪酸甲酯混合標準移至到10ml容量瓶中，用正庚烷稀釋定容，貯存于-10以下冰箱，有效期3個月。3.10單個脂肪酸甲酯標準溶液：將單個脂

5、肪酸甲酯分別從安瓿瓶中取出轉(zhuǎn)移到10ml容量瓶中，用正庚烷沖洗安瓿瓶，再用正庚烷定容，分別得到不同脂肪酸甲酯的單標溶液，貯存于-10 以下冰箱，有效期3個月。3.11丙酮：色譜純。5、儀器和設(shè)備5.1實驗室用組織粉碎機或研磨機。5.2氣相色譜儀：具有氫火焰離子檢測器(fid)。5.3毛細管色譜柱：聚二氰丙基硅氧烷強極性固定相，柱長100m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.2m。5.4恒溫水?。嚎販胤秶?0100，控溫±1。5.5分析天平：感量0.1mg。5.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.7渦旋儀。5.8離心機。6、分析步驟6.1試樣的制備6.1.1固體試樣用組織粉碎機或研磨機粉碎，稱取2g樣品置于離心

6、管中，加入20ml石油醚渦旋混勻1min，靜置浸提30min60min，離心機4000r/min離心5min（注意離心配重問題），上層清液倒入蒸發(fā)瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40濃縮至干，殘留物為脂肪提取物。6.1.2稱取油脂試樣60.0mg至離心管中，精確至0.1mg，加入4ml異辛烷溶解試樣，必要時可以微熱使試樣溶解后加入200l氫氧化鉀甲醇溶液，渦旋混勻1min，靜置至澄清。加入約1g硫酸氫鈉，渦旋混勻1min，中和氫氧化鉀。待鹽沉淀后，取上層溶液1ml用有機針式濾膜移至上機瓶中，待測。6.2測定色譜條件：a) 毛細管色譜柱：聚二氰丙基硅氧烷強極性固定相，柱長100m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.2m

7、。b) 進樣器溫度：270。c) 檢測器溫度：280。d) 程序升溫：初始溫度100，持續(xù)13min；100180，升溫速率10/min，保持6min；180200，升溫速率1/min，保持20min；200230，升溫速率4/min，保持10.5min。e) 載氣：氮氣。f) 分流比：1001。g) 進樣體積：1.0l。h) 檢測條件應(yīng)滿足理論塔板數(shù)(n)至少2000/m，分離度(r)至少1.25。在上述色譜條件下將單個脂肪酸甲酯標準溶液、脂肪酸甲酯混合標準溶液、試樣測定液分別注入氣相色譜儀，對色譜峰進行定性，以色譜峰峰面積定量。6.3結(jié)果計算試樣中某個脂肪酸占總脂肪酸的百分比yi按下式計算，通過測定相應(yīng)峰面積對所有成分峰面積總和的百分數(shù)來計算給定組分i 的含量：yi=asi×ffamei-faiasi×ffamei-fai式中：yi 試樣中某個脂肪酸占總脂肪酸的百分比，%；asi 試樣測定液中各脂肪酸甲酯的峰面積；ffamei-fai 脂肪酸甲酯i 轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)；asi 試樣測定液中各