診斷臨床病原體檢查

1、感染性疾病實(shí)驗(yàn)診斷程序正確、規(guī)范采集和運(yùn)送標(biāo)本通過(guò)直接顯微鏡查見(jiàn)病原體，或檢出病原體抗原成分，或通過(guò)分子生物學(xué)方法檢測(cè)到病原體核酸，結(jié)合病人病史、癥狀、體征，可作出初步診斷同時(shí)，進(jìn)一步對(duì)病原體進(jìn)行分離和鑒定，確定感染病原體的類型對(duì)細(xì)菌和真菌感染要進(jìn)行抗生素敏感試驗(yàn)標(biāo)本的采集、運(yùn)送和檢查方法一標(biāo)本的采集和運(yùn)送所有采集標(biāo)本均置于無(wú)菌或清潔容器中，不能接觸消毒劑和抗菌藥物。血液：一般在發(fā)熱初期和高峰期采集，如已用抗生素，則在下次用藥之前采集。成人采血量為每次10-20毫升，兒童和嬰兒為1.5-5毫升。專用血培養(yǎng)瓶。血標(biāo)本采集次數(shù) 根據(jù)研究，僅采血一次分離率約占80%，培養(yǎng)2次分離率約占90%，而培養(yǎng)

2、三次的分離率約占99%。多瓶接種 厭氧菌菌血癥占菌血癥5-15%, 有10%菌血癥不是單一微生物引起, 長(zhǎng)期使用抗生素患者可呈現(xiàn)l型菌. 免疫低下患者易發(fā)生真菌感染；根據(jù)情況做二種血培養(yǎng)瓶的培養(yǎng),需氧和厭氧或需氧和l型培養(yǎng)。標(biāo)本采集操作 應(yīng)注意嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免污染雜菌。標(biāo)本送檢 接種血液樣本的培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送檢，如因某種原因不能立即送檢時(shí)，勿放冰箱存放。尿液 常用清潔中段尿。對(duì)于厭氧菌采用膀胱穿刺法收集、無(wú)菌厭氧小瓶運(yùn)送。糞便 取膿、血、粘液送檢，排便困難及嬰幼兒可用直腸拭子采集，根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x用不同的運(yùn)送培養(yǎng)基及分離培養(yǎng)基提高檢出率。呼吸道標(biāo)本 鼻咽拭子、痰、纖支鏡采集物，經(jīng)氣管采集分泌物可

3、避免正常菌群污染，是確定下呼吸道感染的理想標(biāo)本。腦脊液及其它體液 對(duì)于腦脊液常見(jiàn)病原菌如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，抵抗力弱，采集后應(yīng)立即接種。對(duì)于胸、腹水和心包積液由于含菌量少宜接種量大或按血培養(yǎng)處理。眼、耳標(biāo)本 用無(wú)菌拭子采樣，可用角膜刮屑。泌尿生殖道標(biāo)本 可用尿道口分泌物、外陰糜爛面分泌物、宮頸口分泌物和前列腺液等。創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本 首先清創(chuàng)，用無(wú)菌拭子取材。二.檢查方法.顯微鏡檢查懸滴法用于病原體的動(dòng)力觀察，暗視野或相差顯微鏡用于病原體的生長(zhǎng)、形態(tài)、運(yùn)動(dòng)方式。染色檢查：革蘭氏染色用于細(xì)菌和真菌的檢查；抗酸染色用于結(jié)核菌及放線菌的檢查；墨汁染色用于新型隱球菌的檢查。2.病

4、原體特異性抗原檢測(cè) 主要用于不易培養(yǎng)的微生物的快速診斷，用已知抗體，利用免疫熒光、酶聯(lián)免疫技術(shù)等檢測(cè)標(biāo)本中的抗原。3.病原體核酸的檢測(cè) 主要是抗菌藥物的作用機(jī)制干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，使細(xì)菌不能生長(zhǎng)繁殖。影響細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)菌喪失生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。破壞核酸的代謝，阻礙遺傳信息的復(fù)制?？股氐膹V泛使用所造成的抗生素的選擇性壓力使醫(yī)院感染控制面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，因此對(duì)細(xì)菌耐藥性的發(fā)生機(jī)制和耐藥監(jiān)測(cè)便成為臨床微生物檢測(cè)中的一項(xiàng)重要工作?？咕幬锏倪x擇性壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為耐藥菌株為主主抗生素暴露抗生素暴露xxxxxxxxxx細(xì)菌的耐藥性及其發(fā)生機(jī)制1.遺傳學(xué)機(jī)制染色體介導(dǎo)的耐藥為細(xì)菌本

5、身所固有的耐藥，一般具有種屬特異性,如腸球菌耐頭孢菌素，一些革蘭陰性桿菌耐萬(wàn)古霉素等。質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥耐藥基因易于傳播,目前該類耐藥在臨床上占有重要地位。如由質(zhì)粒介導(dǎo)的產(chǎn)超廣譜-內(nèi)酰胺酶（esbl）的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。2.生物化學(xué)機(jī)制產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶這些酶可使抗生素失活。如產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、氯霉素乙酰基轉(zhuǎn)移酶等。作用靶位的改變作用靶位改變后使抗生素失去作用位點(diǎn)。如甲氧西林耐藥的葡萄球菌可以產(chǎn)生一種新的青霉素結(jié)合蛋白，使細(xì)菌與-內(nèi)酰胺類抗生素的親和力降低而導(dǎo)致耐藥。主動(dòng)外排機(jī)制如銅綠假單胞菌對(duì)多種常用的抗生素耐藥,主要是由于其外膜存在著獨(dú)特的藥物泵出系統(tǒng)。藥物敏感試驗(yàn)1.

6、紙片擴(kuò)散法（k-b法）菌液濃度：0.5麥?zhǔn)蠞岫龋?.5“敏感”即表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”即表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無(wú)效。“中介”者提示該細(xì)菌對(duì)常規(guī)用量體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)性低，使用高于正常給藥量有療效2.液體稀釋法104 cfu/ml4210.50.250.1250mg/ml耐藥菌監(jiān)測(cè)試驗(yàn)1.耐甲氧西林葡萄球菌(mrs)檢測(cè)包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(mrsa)和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(mrscon)。不能使用青霉素和頭孢菌素類抗生素治療。2.青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（prsp）青霉素是治

7、療肺炎鏈球菌的首選藥物，耐藥菌株對(duì)青霉素治療無(wú)效。應(yīng)用苯唑西林紙片檢測(cè)。3. 超廣譜-內(nèi)酰胺酶（esbl）的檢測(cè)主要由革蘭陰性桿菌產(chǎn)生，質(zhì)粒介導(dǎo)的對(duì)青霉素和三代頭孢菌素以下類抗生素廣泛耐藥。產(chǎn)酶株不能單獨(dú)采用青霉素類和三代頭孢治療。臨床感染常見(jiàn)病原體的檢查1.流行病學(xué)特點(diǎn)新現(xiàn)和再現(xiàn)傳染病多重耐藥的細(xì)菌的出現(xiàn)醫(yī)院感染和條件致病菌的增加2.臨床類型細(xì)菌感染是臨床常見(jiàn)的感染類型病毒感染發(fā)病率最高真菌感染的發(fā)病率明顯上升細(xì)菌感染 細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法病毒感染 細(xì)胞培養(yǎng)是最常用的病毒分離方法，抗原和血清學(xué)檢測(cè)臨床應(yīng)用最廣泛真菌感染 真菌培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)檢測(cè)最常用寄生蟲(chóng)感染 從病人血液、體液、排泄物中檢

8、查出寄生蟲(chóng)的某一發(fā)育蟲(chóng)期，是目前最可靠的診斷方法細(xì)菌感染免疫檢測(cè)1.血清鏈球菌溶血素“”2抗體性傳播性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查性傳播性疾?。╯exual transmitted disease std）是一組主要通過(guò)性行為為傳播途徑的侵犯皮膚、性器官和全身多臟器損害的疾病。病原學(xué)和臨床類型細(xì)菌-淋病奈瑟菌，杜克雷嗜血桿菌螺旋體-梅毒螺旋體病毒-hiv、hsv、hpv支原體、衣原體真菌、原蟲(chóng)1.aids檢測(cè)分為hiv-1和hiv-2兩型，主要通過(guò)檢測(cè)血液中相應(yīng)抗體診斷，elisa用于篩選，2.梅毒的檢測(cè)暗視野顯微鏡檢查：在皮損處，用玻片刮取組織滲出液或淋巴結(jié)穿刺液，見(jiàn)有活動(dòng)的梅毒螺旋體。主要依靠血清學(xué)試

9、驗(yàn)，根據(jù)所用抗原不同，梅毒血清試驗(yàn)分為以下兩大類：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 用心磷脂作抗原，測(cè)定血清中抗心磷脂抗體，亦稱反應(yīng)素。本試驗(yàn)敏感性高而特異性較低，目前一般作為梅毒的篩選試驗(yàn)。性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（venereal disease research laboratory test，vdrl）用心磷脂、卵磷脂及膽固醇為抗原，需用顯微鏡讀取結(jié)果。不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（unheated serum reagin usr）也是vdrl抗原的改良，敏感性及特異性與vdrl相似?？焖傺獫{反應(yīng)素試驗(yàn)（rapid plasma reagin test，rpr）：是vdrl抗原的改良，優(yōu)點(diǎn)是肉眼可讀出結(jié)果。梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 用梅毒螺旋體或其成分來(lái)作抗原，測(cè)定抗梅毒螺旋體igg抗體。梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)（tpha） 敏感性和特異性均高，常作為梅毒感染的確證試驗(yàn)。3.淋病檢測(cè)涂片檢查取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，革蘭氏染色，在多形核白細(xì)胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對(duì)男性急性淋病，陽(yáng)性率在95%左右，可初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽(yáng)性率僅為50-60%，且有假陽(yáng)性，應(yīng)以培養(yǎng)為主。培養(yǎng)檢查培養(yǎng)法對(duì)癥狀很輕或無(wú)癥狀的男性、女性患者或慢性患者都是較敏感的方法，培養(yǎng)后需進(jìn)行菌落形態(tài)，革蘭染色，氧化酶試驗(yàn)和糖發(fā)酵試驗(yàn)。淋病的確診試