分子生物學(xué)常用技術(shù)(簡(jiǎn)化版)ppt課件

1、1；.2；.3；.4；.5；.6；.7；.8；.9；.10；.11；.12；.13；.同位素半衰期比活性用途特點(diǎn)32P14. 3 天9120D N A放射性強(qiáng)35S87. 1 天1490D N A / 蛋白3H12. 1 年29D N A / 蛋白分辨率高125I60 天2400蛋白標(biāo)記簡(jiǎn)單14；.15；.16；.17；.18；.標(biāo)記方法標(biāo)記物探針缺口平移同位素或半抗原DNA 探針隨機(jī)引物標(biāo)記同位素或半抗原DNA 探針5或3末端標(biāo)記同位素寡核苷酸探針PCR標(biāo)記同位素或半抗原DNA 探針體外轉(zhuǎn)錄同位素或半抗原單鏈 RNA 探針化學(xué)標(biāo)記半抗原均可19；.20；.21；.22；.23；.24；.25

2、；.26；.轉(zhuǎn)膜轉(zhuǎn)膜27；.28；.29；.30；.31；.32；.33；.DNADNA的體內(nèi)復(fù)制的體內(nèi)復(fù)制ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35解旋酶解鏈酶DNADNA解解旋解鏈旋解鏈34；.ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5引物酶引物酶RNA引物RNA引物DNADNA解解旋解鏈旋解鏈引物引物合成合成DNADNA的體內(nèi)復(fù)制的體內(nèi)復(fù)制35；.ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCG

3、CTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5TAGCGCTATCGCATCGACGCT3ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3DNA聚合酶DNA聚合酶DNA解解旋解鏈旋解鏈引物引物合成合成新鏈新鏈延伸延伸DNA的體內(nèi)復(fù)制的體內(nèi)復(fù)制36；.ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35變性復(fù)性加熱退火DNA加熱解鏈37；.模板DNA9438；.55引物1引物2DNA引物39；.引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶40；.第1輪結(jié)束94第2輪開(kāi)始41；.72TaqTaqTaqTaq55

4、42；.第2輪結(jié)束43；.重復(fù)30輪后230=1,073,741,824模板DNA第1輪擴(kuò)增第2輪擴(kuò)增第3輪擴(kuò)增第4輪擴(kuò)增 第5輪擴(kuò)增第6輪擴(kuò)增理想拷貝數(shù)=2n n 循環(huán)次數(shù)實(shí)際拷貝數(shù)=(1+x)n X 平均效率,約為0.85 n 循環(huán)次數(shù) 44；.1234522557294時(shí)間（min）溫度（）適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)1-3步25-30輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬(wàn)倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性新鏈延伸DNA的體外擴(kuò)增的體外擴(kuò)增熱循環(huán)DNA解鏈45；.PCR反應(yīng)體系反應(yīng)體系4種dNTP混合物 各200 mol/L引物 各0.1-0.5 mol/L模板DNA 0.12 gTaq DNA聚合酶 2.5 UMg2+ 1.5mmol/LDNA的體外擴(kuò)增的體外擴(kuò)增46；.47；.48；.DNA聚合酶催化的聚合反應(yīng)dNTP49；.50；.51；.52；.53；.54；.55；.5356；.57；.58；.59；.60；.61；.62；.63；.64；.65；.66；.67；.68；.69；.70；.71；.72；.73；.74；.75；.76；.77；.78；.79；