蔬菜農(nóng)藥殘留的快速檢測方法原理及檢驗標準

1、蔬菜農(nóng)藥殘留的快速檢測方法原理及檢驗標準1、目前農(nóng)藥在蔬菜中殘留的問題1.1、農(nóng)藥是把“雙刃劍”，對促進農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但由于農(nóng)藥本身固有的化學屬性和對其使 用不當，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴重超標，嚴重危害到廣大人民群眾的健康。1.2、 在我國農(nóng)藥中，70%為有機磷農(nóng)藥，而在我國生產(chǎn)使用的有機磷農(nóng)藥中，70%為劇毒、高毒類，而且較 多是禁止在蔬菜作物上使用的。2、農(nóng)藥中毒事件常有報道，究其原因2.1、農(nóng)產(chǎn)品不按規(guī)定的用藥量、次數(shù)、方法或安全間隔期施藥，或施用不允許在蔬菜上使用劇毒、高毒類 農(nóng)藥；2.2、現(xiàn)在標準施行的農(nóng)藥殘留測定需要通過有機溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進行，無法對廉價的

2、蔬 菜進行隨時隨地或快速檢測而形成的監(jiān)管不到位。3、農(nóng)藥分類：3.1、礦物源農(nóng)藥3.2、生物源農(nóng)藥3.3、按作用方式分類4、目前所使用的農(nóng)藥按其化學結(jié)構(gòu)大致可以分為以下幾類：有機氯類、有機磷類、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類、雜環(huán)類化合物、其他（苯氧羧酸類、脲類化合物） 等。A、有機磷類敵敵畏、甲拌磷、樂果、對氧磷、對硫磷、喹硫磷、優(yōu)殺硫磷、敵百蟲、氧化樂果、磷胺、甲基嘧啶磷、 馬拉硫磷、辛硫磷、亞胺硫磷、甲胺磷、地亞農(nóng)、甲基毒死蜱、毒死蜱、倍硫酸、殺撲磷、乙酰甲胺磷、 巴胺磷、甲基對硫磷、殺螟硫磷、異柳磷、異柳磷等。B、有機氯類a -666、3 -666、y -666、S -666、op -DD

3、E、pp -DDE、op -DDD、pp -DDT、op -DDT、異菌月尿、 五氯硝基苯、林丹、乙烯菌核利、三氯殺螨醇、功夫、氯硝胺、百菌清、粉銹寧、甲氯菊酯、氯菊酯、氰 戊菊酯、溴氰菊酯等。C、氨基甲酸酯類涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、3-羥基呋喃丹、涕滅威、呋喃丹、甲萘威、葉蟬散、仲丁威、速滅威等。d、擬除蟲菌酯類聯(lián)苯菊酯、二氧苯醚菊酯、功夫菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，戊菊酯、甲氰菊酯、 氯氟氰菊酯、呋喃菊酯、芐呋菊酯、右旋丙烯菊等。5、最大殘留限量標準最大殘留限量（Maximum Residue Limit , MRL ）在農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的法定最高允許濃度，又稱

4、最高殘留限量，以每千克農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的毫克數(shù) （毫克/千克）表示。目的：控制食品中過量農(nóng)藥殘留以保障食用者安全，對超標的產(chǎn)品采取措施，即禁止食用。執(zhí)行和指導(dǎo)合 理用藥，農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測超標時，表明未按規(guī)定用藥。減少國際貿(mào)易糾紛，各國均制訂本國的MRL。食品中農(nóng)藥最大殘留限量標準A、GB2763-2014，規(guī)定了 387種農(nóng)藥最高殘留限量。國家標準作為一項加強農(nóng)藥管理的措施。B、其中，針對蔬菜、水果、茶葉等鮮食農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標多發(fā)、易發(fā)問題，新標準重點增了蔬菜、水果等鮮食農(nóng)產(chǎn)品的限量標準。水果農(nóng)藥殘留限量增加473 項，蔬菜（包括食用菌）農(nóng)藥最大殘留限量增加 431項。6、高毒農(nóng)藥禁限用管理措施

5、6.1 、農(nóng)業(yè)部、工業(yè)和信息化部、環(huán)境保護部、國家工商行政管理總局和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局與2011年 6 月 15 日發(fā)布第 1586 號公告，決定對高毒農(nóng)藥采取進一步禁限用管理措施。6.2 、停止受理苯線磷、地蟲硫磷、甲基硫環(huán)磷、磷化鈣、磷化鎂、磷化鋅、硫線磷、蠅毒磷、治螟磷、特 丁硫磷、殺撲磷、甲拌磷、甲基異柳磷、克百威、滅多威、滅線磷、涕滅威、磷化鋁、氧樂果、水胺硫磷、 溴甲烷、硫丹等 22 種農(nóng)藥新增田間試驗申請、登記申請及生產(chǎn)許可證申請；停止批準含有上述農(nóng)藥的新增 登記證和農(nóng)藥生產(chǎn)許可證（生產(chǎn)批準文件）。6.3、撤銷氧樂果、水胺硫磷早柑橘樹，滅多威在柑橘樹、蘋果樹、茶樹、十字花科

6、蔬菜，硫線磷在柑橘樹、 黃瓜，硫丹在蘋果樹、茶樹，溴甲烷在草莓、黃瓜上的登記。6.4、本公告發(fā)布前已生產(chǎn)產(chǎn)品的標簽可以不再更改，但不得繼續(xù)在已撤銷登記的作物上使用。6.5 、自 2011 年 10 月 31 日起，撤銷（撤回）苯線磷、地蟲硫磷、甲基硫環(huán)磷、磷化鈣、磷化鎂、磷化鋅、 硫線磷、蠅毒磷、治螟磷、特丁硫磷等 10 種農(nóng)藥的登記證、生產(chǎn)許可證（生產(chǎn)批準文件），停止生產(chǎn)。 6.6、自 2013 年 10 月 31 日起，停止銷售和使用。根據(jù)以上情況，制定出有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法，加強對農(nóng)藥殘留的快速檢測一成為十 分必要的監(jiān)管措施。7、農(nóng)藥殘留主要檢測方法有兩種：7.1、色譜

7、檢測法： 色譜檢測法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。 色譜法（包括氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用等）。優(yōu)點：靈敏度高、準確、定性定量； 缺點：成本高、操作復(fù)雜、時間較長。7.2、速測儀法： 速測儀法只能作為農(nóng)殘定性分析，易于在基層推廣等特點，是目前我國控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法， 也是目前國內(nèi)和我省應(yīng)用最廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測方法。A、速測儀法的主要優(yōu)點：1、該方法具有快速方便、 前處理簡便、 成本較低等優(yōu)點， 適用于現(xiàn)場定性測定， 特別適合在蔬菜生產(chǎn)基地、 批發(fā)市場及農(nóng)產(chǎn)品檢測部門開展快速檢測工作。2、該方法可對有農(nóng)藥殘留的蔬菜進行粗篩，將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場

8、之外，避免因農(nóng) 藥殘留發(fā)生中毒事件。B、速測儀法的主要缺點：1、酶試劑易失活， 導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定， 檢測結(jié)果誤差較大， 重復(fù)性不好， 實際應(yīng)用中的確認率大約為 60%70% 左右；2、存在檢測盲區(qū)，只能檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，不能檢測有機氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng) 藥；3、 不適合檢測蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14 種容易出現(xiàn)假陽性的農(nóng)產(chǎn)品。8、速測儀的檢測方法有兩種：1、速測卡法（紙片法）2、酶抑制率法（分光光度法）9、兩種快速檢測方法的技術(shù)原理 9.1、根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介 質(zhì)乙酰膽堿的積

9、累，影響正常傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲中毒致死的原理而設(shè)計。9.2、如果蔬菜中不含有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，乙酰膽堿酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。9.3、如果蔬菜中含有可以抑制乙酰膽堿的活性的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就不能被水解，從而 無顯色反應(yīng)。9.4、在溶液中加入乙酰膽堿酶和顯色劑，用此判斷有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。10、速測卡法（紙片法）1、試劑1.1、固有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測卡）。1.2、 pH7.5 緩沖液溶液：分別取 15.0g 磷酸氫二鈉與 1.59g 無水磷酸二氫鉀用 500mL 蒸餾水溶解。2、儀器2.1、 常量天平有條件配備37 C

10、77; 2C恒溫裝置。3 、分析步驟3.1 、整體測定法3.2、表面測定法（粗篩法）結(jié)果判定：1 、結(jié)果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。2、與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略淺藍色均為陽性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{色或與空白對照卡相 同，為陰性結(jié)果。3、對陽性結(jié)果的樣品，可用其他分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。速測卡法（紙片法）注意事項1 、有些蔬菜如生姜、蔥、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破壞酶活性或者使藍色產(chǎn)物褪色的物質(zhì)，處理這類 蔬菜時，不要讓其汁液太多釋放出來，不要剪得太碎，浸提時間不易過長，必要時可采用整枝蔬菜浸提或 采用表面測定法進行測定。對一些

11、含葉綠素較高的蔬菜，也可以采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色 素的干擾。2、試紙上的提取液不可太多而溢出試紙，亦不可太少而使反應(yīng)不完全。3 、最好將每一批樣品處理好后一起加樣，一面時間過長蒸干。4、 當溫度條件低于37C,酶反應(yīng)的速度隨之放慢， 藥片加液后放置反應(yīng)的時間相對延長，延長時間的確定, 應(yīng)以空白對照卡用（體溫）手指捏 3 分鐘時可以變藍，即可往下操作。注意樣品放置的時間應(yīng)與空白對照 卡放置的時間一致才有可比性。5、空白對照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕潤，二是溫度太 低。6、如有條件，將農(nóng)藥速測卡放在 10C以下保存效果會更好，每小包產(chǎn)品開封后

12、最好在三天內(nèi)用完，如用不 完，可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封保存，如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥測速卡的紅色藥片由鮮紅橙色變?yōu)榘档暮?紅色，說明紙片已吸潮失效。PR-3 便攜式農(nóng)藥殘毒快速檢測儀操作步驟：1 、接通電源，右側(cè)開關(guān)撥至“開”，打開上蓋按“ START ”鍵預(yù)熱；2、當預(yù)熱達到設(shè)置反應(yīng)溫度 TEMP 時，聽到“嘩”一聲，屏幕顯示“ TEMP1 ”，預(yù)熱結(jié)束，等待倒計時；3、 去試紙外模，插入試紙（白片在下端），在白片上分別加1-2 滴提取液；4、再次按 '“START ”鍵，單片電腦開始“ TEMP1 ”倒計時；5、 當聽到連續(xù)“嘩、嘩、嘩”聲，屏幕顯示“CLOS ” ，提示合上前蓋，進

13、入“ TEMP2 ”倒計時；6、當聽到六聲“嘩。嘩、嘩”音，本次操作結(jié)束，打開上蓋觀察試紙顏色變化；7、試紙顯示藍色為陰性，淺藍色為弱陽性，白色為陽性；8、測試完畢，向上取下試紙進行下一次的檢測。酶抑制率法（分光光度法）1、試劑1.1、 pH8.0緩沖溶液：分別取 11.9g無水磷酸氫二鉀與 3.2g磷酸二氫鉀，用1000mL蒸餾水溶解。1.2、顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB ）和15.6mg碳酸氫鈉，用20m 了緩沖溶液溶解， 4 C冰箱中保存。1.3、底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加 3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后置 4 C冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過 兩周。1.4

14、乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化 Ao值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后置4C冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀^四天。1.5、可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的 Ao值應(yīng)控制在0.3以上。2、儀器2.1 、分光光度計或相應(yīng)測定儀及常量天平。3 、分析步驟3.1、 樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品 1g,放入燒 杯或提取液瓶中，加入 5mL緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出提取液，靜置 35min,待用。3.2、 對照溶液測試：先于試管中加入 2。5mL緩沖溶液，再加入 0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于 3

15、7C 放置15min以上（每批樣品的控制時間應(yīng)一致）。加入0.1mL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即 放入儀器比色池中，記錄反應(yīng) 3min的吸光度變化值 Ao。3.3 、樣品溶液測試：先于試管中加入 2.5mL 樣品提取液,其他操作與對照溶液測試相同,記錄反應(yīng) 3min 的吸光度變化值 At。結(jié)果的表述計算1 、檢測結(jié)果按公式計算：2、抑制率（% = （ Ao- At） / Ao X1003、式中： Ao對照溶液反應(yīng) 3min吸光度的變化值：4、 At樣品溶液反應(yīng) 3min吸光度的變化值：結(jié)果判定1、結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率為0%時，表示蔬菜中有高

16、劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,樣品為陽性結(jié)果。陰性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2 次以上。對陽性結(jié)果的樣品,可用其他方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。酶抑制率法注意事項1、蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易 產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,可采取整株（體）蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜,也可采取整株（體）蔬菜浸提方法,減少色素的干擾。2、當溫度條件低于 37 C,酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長，延長時間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化 Ao值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時間應(yīng)與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對照溶液3min的吸光度變化 Ao值<0.3 的原因：一是酶的活性不夠,二是溫度太低。3、當吸光度大到無法