2019年成品及原輔料的微生物檢驗(yàn)方法

1、成品及原輔料的微生物檢驗(yàn)方法一.樣品的采集和處理：1 .采樣方法1.1 采樣必須在無(wú)菌操作下進(jìn)行1.2 根據(jù)樣品種類(lèi)： 袋裝、瓶裝和罐裝食品，應(yīng)采取完整的未開(kāi)封的樣品； 如果樣品很大，則需用無(wú)菌取樣器取樣；固體粉末樣品，應(yīng)邊取邊混合；液體樣品通過(guò)振搖混勻；冷凍食品應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)，非冷凍食品需在0-5 中保存。2 . 樣品的處理：塑料或紙盒裝樣品，用 75 酒精棉球消毒盒蓋或袋口。二.菌落總數(shù)的測(cè)定1 .檢驗(yàn)?zāi)康暮头秶簩?duì)無(wú)菌操作條件下獲得的樣品原液配制的樣品稀釋液進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)測(cè)定。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。2 . 操作程序：2.1

2、 培養(yǎng)基制備： 1 ）檢查預(yù)先經(jīng)過(guò)滅菌處理的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基是否處于正常、可用狀態(tài)。 2 ）將滅菌培養(yǎng)基用電爐加熱2 分鐘，或用水浴融化后，在40-45 水浴中保溫待用。2.2 以無(wú)菌操作將檢樣10ml（或g）入于含有90ml滅菌生理鹽水的滅菌三角瓶中，經(jīng)充分振搖后做成1 ： 10 的稀釋液2.3 用 1ml 滅菌吸管吸取1 ： 10 稀釋液 1ml ，沒(méi)管壁徐徐注入含有9ml 滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管，混合均勻，做成1 ： 100 的稀釋液2.4 另取 1ml 滅菌吸管，按上條操作順序，做10 倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用 1 支 1ml 滅菌吸管2.5 選擇 2-3 個(gè)適宜

3、的稀釋度， 分別在做 10 倍遞增稀釋的同時(shí)， 即以吸取該稀釋度的吸管移 1ml 稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。2.6 稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至46 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約 15ml ，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻， 同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入加有1ml 稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照2.7 待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1 溫箱內(nèi)培養(yǎng)48± 2h2.8 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告2.8.1 平板菌落數(shù)的選擇：1 ）選取菌落數(shù)在30-300 之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。2 ）一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以

4、無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)。3 ）若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落又分布很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘 2 以代表全皿菌落數(shù)。4 ）平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)（菌落之間無(wú)明顯界線(xiàn)），若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落，如果有幾條來(lái)源不同的鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。5 .8.2 稀釋度的選擇1 ）應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30-300 之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。2 ）若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30-300 之間，則視兩者之比來(lái)決定， 若其比值小于或等于 2 ，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于 2 則報(bào)告其中較小的數(shù)字。3 ） 若所有的稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300 ， 則應(yīng)按

5、稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘 以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。4 ）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30 ，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。5 ）若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。6 ）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300 之間，其中一部分大于 300 或小于 30 時(shí)，則以最接近30 或 300 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。三.大腸菌群（一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌）的測(cè)定：1. 以無(wú)菌操作將檢樣10ml（或g）入于含有90ml 滅菌生理鹽水的滅菌三角瓶中，經(jīng)充分振搖后做成1 ： 1 的稀釋液2. 用 1ml 滅菌吸管吸

6、取1 ： 10 稀釋液 1ml ， 沒(méi)管壁徐徐注入含有9ml 滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管，混合均勻，做成1 ： 100 的稀釋液3. 另取1ml 滅菌吸管，按上條操作順序，做10 倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用 1 支 1ml 滅菌吸管4. 選擇 3 個(gè)適宜的稀釋度，每個(gè)稀釋度接種 3 管。5. 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1ml 以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管， 1ml 及 1ml 以下者，用單料乳糖發(fā)酵管，每一稀釋度接種3管，置36 ±1c溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 ± 2h,如所有的乳糖發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則

7、按下列程序進(jìn)行6. 分離培養(yǎng)： 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上， 置 36±1 溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18-24h ，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)7. 證實(shí)試驗(yàn)：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1-2 個(gè)進(jìn)行革蘭染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管， 置 36 ±1 溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 ± 2h， 觀察產(chǎn)氣情況， 凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性8. 根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查mpn 檢索表，報(bào)告每100ml（g） 大腸菌群的 mpn 值 （mpn 檢索表略 ）四 . 霉菌和酵母的測(cè)定1. 以無(wú)菌操作將檢樣10ml（

8、或g）入于含有90ml 滅菌生理鹽水的滅菌三角瓶中，經(jīng)充分振搖后做成1 ： 10 的稀釋液2. 用 1ml 滅菌吸管吸取1 ： 10 稀釋液 1ml ，注入含有9ml 滅菌水的試管內(nèi)，另?yè)Q一支 1ml 滅菌吸管吹吸5 次，此液為 1 ： 100 的稀釋液3. 另取 1ml 滅菌吸管， 按上條操作順序， 做 10 倍遞增稀釋液， 每遞增稀釋一次，即換用 1 支 1ml 滅菌吸管。選擇3 個(gè)適宜的稀釋度，分別在做10 倍稀釋的同時(shí)，吸取 1ml 稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做2 個(gè)平皿，然后將涼至45 左右的高鹽察氏培養(yǎng)基注入平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于 25-28 溫箱內(nèi)， 3天開(kāi)始觀察，共培

9、養(yǎng)觀察5 天。4. 計(jì)算方法：通常選擇菌落數(shù)在10-150 之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，同稀釋度的 2 個(gè)平皿的菌落平 成品及原輔料的微生物檢驗(yàn)方法均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每 ml（g） 檢樣中所含霉菌和酵母數(shù)。五.乳酸菌（一群能分解葡萄糖和乳糖產(chǎn)生乳酸，需氧和兼性厭氧，多數(shù)無(wú)動(dòng)力，過(guò)氧化氫酶陰性，革蘭氏陽(yáng)性的五芽孢桿菌和球菌）的測(cè)定：1. 以無(wú)菌操作將檢樣10ml（或g）入于含有90ml 滅菌生理鹽水的滅菌三角瓶中，經(jīng)充分振搖后做成1 ： 10 的稀釋液2. 用 1ml 滅菌吸管吸取1 ： 10 稀釋液 1ml ， 沒(méi)管壁徐徐注入含有9ml 滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管，混合均勻，做成1 ： 100 的稀釋液3. 另取1ml 滅菌吸管，按上條操作順序，做10 倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用 1 支 1ml 滅菌吸管4. 選擇 2-3 個(gè)適宜的稀釋度，分別在做10 倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移 1ml 稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。5. 稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至50 的改良 mc 培養(yǎng)基注入平皿約 15ml ，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻，同時(shí)將改良mc 培養(yǎng)基注入加有1ml 稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照， 以上整個(gè)操作自培養(yǎng)物加入培養(yǎng)皿開(kāi)始至接種結(jié)束須在 20 分鐘內(nèi)完成。6. 待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1 溫箱內(nèi)培養(yǎng)7