不同提取條件對川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯含量影響的研究

1、不同提取條件對川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯含量影響的研究成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥劑科四川成都610072【中圖分類號】r285【文獻標識碼】c 【文章編號】1550-1868(2016) 6摘要：目的：在采用共水蒸餾法提取川芎揮發(fā)油的前提下，對川芎藥材 的粉碎度、加水量、浸泡情況、提取時間、加熱程度,5個影響因素進行動態(tài)考察， 研宄在不同提取條件下川芎揮發(fā)油中藁木內(nèi)酯含量變化規(guī)律。方法：采用單因素 實驗法以不同提取條件下川芎揮發(fā)油得率和藁木內(nèi)酯含量作為評價指標，并進行 3個水平實驗取平均值，采用高效液相色譜儀進行藁木內(nèi)酯含量測定，同時與含量 測定所得hplc色譜圖進行綜合分析。結果：以上5因素對得油率

2、以及揮發(fā)油中 藁木內(nèi)酯的含量均有一定程度的影響。結論：木研宄對川芎揮發(fā)油有效成分的提 取有積極意義。關鍵詞:川芎；揮發(fā)油；共水蒸餾；藁木內(nèi)酯；含量測定分類號:r285文 獻標識碼:c川芎是著名的傳統(tǒng)中藥之一，為傘形科藁木屬多年生植物川芎ligusticm chuanxionghort.的干燥根莖。有關川芎化學成分已有許多研究報道，據(jù)科學檢驗 測定川芎中含有揮發(fā)油，生物堿，內(nèi)酯類，有機酸等多種成分。藁木內(nèi)酯(ligustilide) 是川芎揮發(fā)油中含量最高的有效成分，且只有重要的生理活性.目前關于川芎揮發(fā) 油的提取方法有很多，但經(jīng)比較：共水蒸餾法是傳統(tǒng)川芎揮發(fā)油提取方法，此法 設備簡單，易操作，

3、投資少，適合在試驗室進行，并且提取后藥濟可以再提取酚 酸類及生物堿類物質(zhì)，從而實現(xiàn)川芎藥材的分別提取，分部利用，故選擇共水蒸 餾法進行提取。但此法提取川芎揮發(fā)油的影響因素較多，而現(xiàn)有的文獻報道中少 有對此法提取條件的改變產(chǎn)生的對揮發(fā)油有效成分含量的影響進行系統(tǒng)研究，因 此為了對這一問題進行初步的探討，我們對川芎揮發(fā)油中藁木內(nèi)酯含量變化情況 進行了考察研究。1. 不同條件下川芎揮發(fā)油的提取1.1儀器揮發(fā)汕提取器及冋流冷凝裝置（四川大學華西醫(yī)學中心玻璃儀 器廠）;sartorius bp211d電子天平（北京賽多利斯天平有限公司h but25-12超聲 波清洗器（上海必能信超聲奮限公司）；xmtb

4、型恒溫水浴鍋（北京國華醫(yī)療器械廠）。1.2材料傘形科植物川3 ligusticm chuanxiong hort.的干燥根莖。產(chǎn)地 為四川，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學藥學院中藥鑒定教研室鑒定，符合中國藥典2015 版一部川芎項下有關規(guī)定。試劑均為分析純。1.3方法稱取川3藥材500g于10000ml圓底燒瓶中，加入藥材一定倍 量的蒸餾水未浸泡或浸泡一定時間后,連接揮發(fā)油測定器與冋流冷凝管，自冷凝 管上端加水至充滿揮發(fā)汕測定器刻度，并溢流入燒瓶中為止。加熱至沸騰后，保 持微沸，提取8小時后，停止加熱，并放置片刻，幵啟測定器下端的活塞，接取 下端的揮發(fā)油后關閉活塞。稍置片刻再將浮于芳香水上層的揮發(fā)油照上法接

5、取。 為純化揮發(fā)汕，將所得揮發(fā)汕與等體積的乙醚，同時加入分液漏斗中充分搖勻， 放置，萃取。將分離出的乙醚層經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，裝于干燥至恒重的蒸發(fā)皿 中，置于50°c水浴中揮至無乙醚味，將盛冇淺黃色油狀物的蒸發(fā)皿再次干燥至恒 重，記錄揮發(fā)汕得量。平行實驗三次，取其平均值。收集揮發(fā)汕，將其裝入錐底 塑料瓶中密閉，編號，冰箱保存?zhèn)溆谩?.4結果采用單因素實驗法對藥材的粉碎度、藥材的加水量、是否浸泡、 蒸餾吋間、加熱功率各因素進行考察。由“揮發(fā)汕得率=揮發(fā)汕質(zhì)量/藥材質(zhì)量 ×100%”可得出在不同提取條件下川芎揮發(fā)油得率。 對藥材粉碎度的考察均在藥材加8倍水，浸泡12h

6、，加熱功率800w 吋連續(xù)提取8h,加熱程度均同等的條件下進行的。其中粗顆粒直徑為6 mm,薄飲 片厚度為34 mm,厚飲片厚度為67 mm。結果如下：粗顆粒得汕率0.4796%，重 油 2.2189g，輕油 0.1789g,總油 2.3978g薄飲片得汕率0.3122%，重油:1.4118g，輕汕0.1494g,總油1.5612g 厚飲片得油率0.1632%,重油0.7071g,輕汕0.1091g,總油0.8162g 對加水量的考察均在藥材飲片浸泡12h，加熱功率為400w連續(xù)提取8h的條件下進行的。結果如下：6倍加水量得汕率0.0920%,重汕0.2916g,輕 汕 0.1685g,總油

7、0.4601g8倍加水量得油率0.1226%，重油0.5099g,輕油0.1044g,總油0.6143g 10倍加水量得油率0.0840%,重汕0.2544g,輕油0.1656g,總油0.4200g 對浸泡情況的考察均是在藥材飲片加8倍水，加熱功率為800w連續(xù) 提取8h的條件下進行的。結果如下：浸泡12h得油率0.3968%,重油:1.8101g, 輕汕 0.1738g,總油 1.9839g未浸泡得油率0.3620%,重油:1.5166g，輕油0.2935g,總油1.8101g 對蒸餾吋間的考察均是在藥材飲片加8倍水，浸泡12h，加熱功率為 1200w吋，8h內(nèi)每2h分段提取一次共4次。結果

8、如下：蒸餾吋間02h得油率0.1525%,總油0.7627g 蒸餾吋間24h得油率0.1161%,總汕0.5806g 蒸餾吋間46h得汕率0.1030%,總汕0.5149g 蒸餾吋間68h得油率0.0820%,總油0.4098g 對加熱程度的考察均是在藥材飲片加8倍水，浸泡12h,連續(xù)提取8h 的條件下進行的。結果如下:功率400得汕率0.1229%，重汕0.5099g，輕油0.1044g, 總油 0.6143g功率 800 得油率 0.3968%,重油 1.8101g,輕油 0.1738g,總汕 1.9839g功率 1200 得油率=,0.4691%,重油 2.1895g,輕油 0.1559

9、g,總油 0.4691g2. 川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量測定2.1儀器shimadzu lc-10at高效液相色譜儀（日本島津）,spd-m10avp 檢測器，浙江智達n2000色譜工作站；sartorius bp211d電子天平（北京賽多利斯 天平有限公司）2.2材料川芎揮發(fā)油（自制）、藁本內(nèi)酯對照品（批號：12180-5,chroma-dex公司）、甲醇（色譜純fisher），其它試劑均為分析純。2.3色譜條件色譜柱：kromasil c18柱（4.6醐×250 mm）;流動相：甲醇冰(65:35)；流速：l.oml/min；檢測波長：280nm；柱溫：35°

10、c;進樣量：10µl2.4樣品的含量測定精密量取不同提取條件下所得揮發(fā)油適量，置 25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度后搖勻。再用移液管精密量取各量瓶中溶液1ml 于25ml量瓶中，加甲醇稀釋搖勻，定容。吸取10µl進樣，照高效液相色 譜法(中國藥典2015年版)冇關項下規(guī)定測定。記錄色譜圖，測定峰面積， 計算藁本內(nèi)酯含量。結果如下：粗顆粒：重汕中含52.3%輕汕含40.9% 薄飲片：重油中含42.1%輕 油含51.3%厚飲片：重汕中含35.5%輕油含21.4%6倍水量：重汕中含38.7%輕汕含37.8%8倍水量：重汕中含49.0%輕油含45.5%10倍水量

11、：重油中含45.2%輕汕含43.9%浸泡12h：重油中含47.7% 輕油含52.0% 未浸泡:重汕中含46.2% 輕油含46.6%蒸餾02h總汕含50.1% 蒸餾24h總油含49.9%蒸餾46h總油含45.5%蒸餾68h總汕含42.8%加熱400w:重油中含49.0% 輕油含45.0% 加熱800w:重油中含47.7% 輕汕含52.1%加熱1200w：重油中含53.1%輕汕含52.5%3結論與討論3.1影響共水蒸餾法得油率的因素與川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量分析不同粉碎度情況所得揮發(fā)汕得率粗顆粒最高，說明粉碎度與成分的浸出、擴散的關系很人。將hplc測得藁本內(nèi)酯含量結果結合其色譜圖分析發(fā)現(xiàn)：粗顆

12、 粒所提汕中藁本內(nèi)酯含量也較高，重輕汕中主要化學成分峰的比例較穩(wěn)定。不 同加水量的揮發(fā)汕得率8倍水最高，這可能是與加水量多少會影響到產(chǎn)氣量奮關， 所提油中藁本內(nèi)酯含量也最高，其中重油及輕油中各化學成分的色譜峰比例較穩(wěn) 定和相似。浸泡12h的川芎藥材的得油率比未浸泡的藥材得油率稍高，其中藁本 內(nèi)酯的含量也稍高，但色譜圖表明浸泡過的藥材所提輕汕及重汕中的化學成分的 比例差異較大，說明浸泡對藥材內(nèi)的化學成分有一定的影響。共水蒸餾法提取 川芎揮發(fā)汕8h,在最初的4h內(nèi)得油率達到最高，汕中藁本內(nèi)酯含量也較高，但其 化學成分比例較不穩(wěn)定，而4h后得油率逐漸降低，汕中藁本內(nèi)酯含量逐漸減少， 但其揮發(fā)油中的化學成分比例已趨于平衡。加熱功率為400w吋所提油中重輕油 中化學成分的比例差異較小，較相似。而800w及1200w吋所提重輕油的化學成 分差異就較明顯。加熱程度對得汕率影響很大，不僅影響提油速度，冋吋因劇烈 的沸騰，使水蒸汽與揮發(fā)油之間的相互作用加劇，易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。3.2關于收油方法據(jù)文獻報道川芎揮發(fā)汕密度大于1,屬于重汕，但是在提取揮發(fā)油吋發(fā)現(xiàn) 除了沉于水層底部的重油外，還有一層油浮于水面上，大大影響了得油率。因此本 實驗初次將重汕、輕汕分別收集并加以研宄，但此種收集方法仍需更多的試驗驗 證。參考文獻【1】中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編中華人