菌種與種子擴大培養(yǎng)(2)課件

1、決定發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)水平三要素：生產(chǎn)菌種性能；發(fā)酵過程的工藝及設(shè)備；產(chǎn)物提取過程的工藝及設(shè)備q 誘變育種：誘變是工業(yè)發(fā)酵穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)的重要保證；q 從自然界分離：目前土壤中已分離的微生物約為自然界總數(shù)的1-5%，微生物的多樣性仍然是以后若干年的研究重點；q 基因重組：基因定向改造技術(shù)大大加快了生物產(chǎn)品開 發(fā)的進程。分離思路分離思路v新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產(chǎn)的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準(zhǔn)確地把所需要的菌種挑選出來。v實驗室或生產(chǎn)用菌種若不慎污染了雜菌，也必須重新進行分離純化。 從自然界中分離菌種的一般過程新種分離與篩選的步驟新種分離與篩選的步驟v定方案：定方案：首先要

2、查閱資料，了解所需菌種的生長培養(yǎng)特性。v采樣：采樣：有針對性地采集樣品。v增殖：增殖：人為地通過控制養(yǎng)分或培養(yǎng)條件，使所需菌種增殖培養(yǎng)后，在數(shù)量上占優(yōu)勢。v分離：分離：利用分離技術(shù)得到純種。v發(fā)酵性能測定：發(fā)酵性能測定：進行生產(chǎn)性能測定。這些特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營養(yǎng)要求、生理生化特性、發(fā)酵周期、產(chǎn)品品種和產(chǎn)量、耐受最高溫度、生長和發(fā)酵最適溫度、最適pH值、提取工藝等。 采樣采樣1、采樣對象 以采集土壤為主。一般園田土和耕作過的沼澤土中，以細菌和放線菌為主；富含碳水化合物的土壤（如一些野果生長區(qū)和果園內(nèi)）和沼澤地中，酵母和霉菌較多；采樣的對象也可以是植物或動植物殘體，腐敗物品，霉菌較多；某些

3、水域厭氧菌含量較多。v2、采樣季節(jié)：以溫度適中，雨量不多的秋初為好。v3、采土方式：在選好適當(dāng)?shù)攸c后，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，扎好，標(biāo)記，記錄采樣時間、地點、環(huán)境條件等，以備查考。采好的樣應(yīng)及時處理，暫不能處理的也應(yīng)貯存于4下，但貯存時間不宜過長。 增殖培養(yǎng)增殖培養(yǎng)v 就是給混合菌群提供一些有利于所需菌株生長或不利于其他菌型生長的條件，以促使目標(biāo)菌株大量繁殖，從而有利于分離它們。v 例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能死亡或淘汰

4、。這樣對下階段的純種分離就會順利得多。 純種分離純種分離v盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)。因此還必須分離，純化。v純種分離的方法有劃線分離法、稀釋分離法。性能測定性能測定v 這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進行小型發(fā)酵試驗，以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。v這種直接從自然界分離得到的菌株稱為野生型菌株野生型菌株，以區(qū)別于用人工育種方法得到的變異菌株。工業(yè)生產(chǎn)常用菌種v細菌細菌 (Bacteria)v放線菌放線菌(Actinomycetes)v單細胞真菌單細胞真菌 - 酵母酵母(Yeast)v多細胞真菌多細胞真菌 - 霉菌霉菌(Molds)1 細菌

5、細菌 (Bacteria) v形狀和大小形狀和大?。簡渭毎⑸铮唬簡渭毎⑸?； 有球型、桿型和螺旋型；典有球型、桿型和螺旋型；典型直徑型直徑0.51微米，長度微米，長度10微米；微米； v繁殖方式繁殖方式：裂殖，倍增時間：裂殖，倍增時間25 45分鐘。分鐘。v工業(yè)上重要的細菌工業(yè)上重要的細菌： G+：枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、北京：枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、北京棒桿菌等。棒桿菌等。G-： 醋酸桿菌、大腸桿菌。醋酸桿菌、大腸桿菌。v產(chǎn)品產(chǎn)品：淀粉酶制劑，乳酸，乙酸，氨基酸等：淀粉酶制劑，乳酸，乙酸，氨基酸等2 放線菌放線菌(Actinomycetes)v形狀和大?。盒螤詈痛笮。杭毎书L絲狀，菌落

6、呈放線狀細胞呈長絲狀，菌落呈放線狀，介于細菌和真菌之間，菌絲直徑，介于細菌和真菌之間，菌絲直徑0.21.2微微米，與桿菌接近；米，與桿菌接近；v生長和繁殖：生長和繁殖： 低等的低等的(如諾卡氏菌如諾卡氏菌)通過菌絲通過菌絲斷裂繁殖；斷裂繁殖； 高等的高等的(如鏈霉菌如鏈霉菌)在孢子絲成熟在孢子絲成熟后分化成許多孢子，孢子在適宜的環(huán)境中吸后分化成許多孢子，孢子在適宜的環(huán)境中吸收水分，膨脹、萌發(fā)，成為新的放線菌。收水分，膨脹、萌發(fā)，成為新的放線菌。 2 放線菌放線菌(Actinomycetes)v工業(yè)上重要的放線菌工業(yè)上重要的放線菌v 龜裂鏈霉菌（土霉素）龜裂鏈霉菌（土霉素）v 金黃色鏈霉菌（金霉

7、素）金黃色鏈霉菌（金霉素）v 灰色鏈霉素（鏈霉素）灰色鏈霉素（鏈霉素）v 紅鏈霉菌（紅霉素）紅鏈霉菌（紅霉素）v 紅小單胞菌（慶大霉素）紅小單胞菌（慶大霉素）v 委內(nèi)瑞拉鏈霉菌（氯霉素）委內(nèi)瑞拉鏈霉菌（氯霉素）v 卡那鏈霉菌（卡那霉素）卡那鏈霉菌（卡那霉素） 3 單細胞真菌單細胞真菌 - 酵母酵母(Yeast)v形狀和大小形狀和大?。簡渭毎?，卵圓形，圓形或圓柱形；比細菌大，：單細胞，卵圓形，圓形或圓柱形；比細菌大，直徑約直徑約15微米，長約微米，長約530微米。微米。 v生長與繁殖生長與繁殖：酵母分有性和無性繁殖，以無性繁殖為主。無：酵母分有性和無性繁殖，以無性繁殖為主。無性繁殖分為芽殖和裂殖

8、，以芽殖為主。性繁殖分為芽殖和裂殖，以芽殖為主。v工業(yè)上重要的酵母菌工業(yè)上重要的酵母菌v 啤酒酵母啤酒酵母(酒精、啤酒等酒精、啤酒等)v 假絲酵母假絲酵母(單細胞蛋白、檸檬酸、脂肪酸、石油脫蠟單細胞蛋白、檸檬酸、脂肪酸、石油脫蠟)。4 多細胞真菌多細胞真菌 - 霉菌霉菌(Molds)v形狀和大?。盒螤詈痛笮。悍种?，菌絲體盤結(jié)交錯，形成濃密菌落，使分支狀，菌絲體盤結(jié)交錯，形成濃密菌落，使發(fā)酵液粘稠。比放線菌大，直徑發(fā)酵液粘稠。比放線菌大，直徑310mv生長與繁殖：生長與繁殖：v 片段菌絲可以生長成新的菌絲體；片段菌絲可以生長成新的菌絲體；v 有性和無性方式，產(chǎn)生孢子進行繁殖；有性和無性方式，產(chǎn)

9、生孢子進行繁殖；v 無性繁殖是主要方式，生長中，菌絲伸長和分支，從菌無性繁殖是主要方式，生長中，菌絲伸長和分支，從菌絲體頂端形成新的孢子，繼而形成細胞。絲體頂端形成新的孢子，繼而形成細胞。 新細胞具有菌齡，新細胞具有菌齡，典型的倍增時間為典型的倍增時間為48小時；小時； 4 多細胞真菌多細胞真菌 - 霉菌霉菌(Molds)v工業(yè)上重要的霉菌工業(yè)上重要的霉菌v 曲霉屬曲霉屬: 黑曲霉黑曲霉淀粉酶、蛋白酶、檸檬酸淀粉酶、蛋白酶、檸檬酸v 和葡萄糖酸和葡萄糖酸 v 米曲霉米曲霉醬油醬油v 青霉屬青霉屬: 產(chǎn)黃青霉產(chǎn)黃青霉青霉素青霉素v 展開青霉展開青霉灰黃霉素灰黃霉素v 根霉屬根霉屬: 米根霉米根霉

10、 制曲、乳酸制曲、乳酸抗生素生產(chǎn)有關(guān)的微生物放線菌（鏈霉素四環(huán)素；紅霉素等） 真菌（青霉素、頭孢等）一些產(chǎn)芽孢的細菌植物或動物來源氨基酸生產(chǎn)菌的要求：代謝途徑比較清楚，代謝途徑比較簡單谷氨酸發(fā)酵的菌種：其它氨基酸生產(chǎn)菌：棒桿菌屬，短桿菌屬、節(jié)桿菌屬或小桿菌屬的棒型細菌常規(guī)菌種一般也是以谷氨酸生產(chǎn)菌選育而成；工程菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌氨基酸生產(chǎn)有關(guān)的微生物食品工業(yè)微生物 包括：釀造業(yè)，酶制劑等 食品用的微生物需經(jīng)過嚴(yán)格的毒理試驗，目前已同意使用的僅僅少數(shù)微生物能用于生產(chǎn)食品用酶。淀粉酶：黑曲霉、米曲霉、米根酶、枯草芽孢桿菌 和地衣芽孢桿菌誘變育種誘變育種v以微生物的自然變異作為基礎(chǔ)的生產(chǎn)選種

11、的機率并不很高，一個基因的自然突變頻率僅10-610-10左右。v誘變育種： 利用各種物理因素和化學(xué)試劑處理微生物細胞，提高基因突變頻率，再通過適當(dāng)?shù)暮Y選方法獲得所需要的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種的育種方法。v誘發(fā)突變的育種，是迄今為止國內(nèi)外提高菌種產(chǎn)量、性能的主要手段。誘變劑 物理誘變劑：射線如紫外線、X-射線、-射線，快中子；生物誘變劑：噬菌體、轉(zhuǎn)座子化學(xué)誘變劑：化學(xué)因子如堿基類似物、5-氟尿嘧啶、烷化劑等。誘變育種步驟出發(fā)菌株的選擇菌懸液的制備前培養(yǎng)誘變處理變異菌株的分離和篩選紫外線的誘變育種紫外線的誘變育種v 紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈，波長為2537A燈與處理物的距離為1530cm，照射

12、時間依菌種而異，一般為幾秒至幾十分鐘。一般我們常以細胞的死亡率表示，希望照射的劑量死亡率控制在7080%為宜。例例v 被照射的菌懸液細胞數(shù)，細菌為106個ml左右，霉菌孢子和酵母細胞為106107個ml。由于紫外線穿透力不強，要求照射液不要太深，約0.51.0cm厚，同時要用電磁攪拌器或手工進行攪拌，使照射均勻。v由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng)，所以照射時和照射后的處理應(yīng)在紅燈下進行。 操作步驟操作步驟 1將細菌培養(yǎng)液以3000rmin離心5min，傾去上清液，將菌體打散加入無菌生理鹽水再離心洗滌。 2將菌懸液放入一巳滅菌的，裝有玻璃珠的三角瓶內(nèi)用手搖動，以打散菌體。將菌液倒入有定性濾紙的漏斗內(nèi)

13、過濾，單細胞濾液裝入試管內(nèi)，一般處于渾濁態(tài)的細胞液含細胞數(shù)可達107 -108個ml左右，作為待處理菌懸液。3取24m1制備的菌液加到直徑9cm培養(yǎng)皿內(nèi)，放入一無菌磁力攪拌子，然后置磁力攪拌器上、15W紫外線下30cm處。在正式照射前，應(yīng)先開紫外線10min，讓紫外燈預(yù)熱，然后開啟皿蓋正式在攪拌下照射1050s。操作均應(yīng)在紅燈下進行，或用黑紙包住，避免白熾光。 4取未照射的制備菌液和照射菌液各0.1ml進行稀釋分離，計數(shù)活菌細胞數(shù)。 5取照射菌液2ml于液體培養(yǎng)基中(300ml三角瓶內(nèi)裝30ml培養(yǎng)液)，120rmin振蕩培養(yǎng)46h。 6取中間培養(yǎng)液稀釋分離、培養(yǎng)。 7挑取菌落進行檢測?；虻?/p>

14、直接進化育種基因的直接進化育種q 突變 基因突變庫的建立基因突變庫的建立q 篩選 基因突變庫的篩選基因突變庫的篩選q 基因復(fù)制與遺傳步驟： 在分子水平上，對目標(biāo)基因直接處理，然后通過高通量的篩選方法，提高目標(biāo)蛋白的性能。q 能夠利用廉價的原料，簡單的培養(yǎng)基，大量高效地合成 產(chǎn)物q有關(guān)合成產(chǎn)物的途徑盡可能地簡單，或者說菌種改造的 可操作性要強q 遺傳性能要相對穩(wěn)定q 不易感染它種微生物或噬菌體q不是病原菌，產(chǎn)生菌及其產(chǎn)物的毒性必須考慮（在分類學(xué)上最好與致病菌無關(guān)） 生產(chǎn)特性要符合工藝要求，培養(yǎng)條件易于控制，生長迅速、發(fā)酵周期短純菌種純菌種自發(fā)突變自發(fā)突變不純菌種不純菌種突變個體突變個體傳代增殖傳

15、代增殖原始個體原始個體幾種常用菌種保藏方法的比較方法名稱方法名稱主要措施主要措施適宜菌種適宜菌種保藏期保藏期評價評價冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法石蠟油封藏法*沙土保藏法沙土保藏法冷凍干燥法冷凍干燥法低溫低溫低溫低溫低溫、缺氧低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低干燥、無氧、低溫、有保護劑溫、有保護劑各大類各大類細菌、酵母菌細菌、酵母菌各大類各大類*產(chǎn)孢子微生物產(chǎn)孢子微生物各大類各大類36月月612月月12年年110年年515年年以上以上簡便簡便簡便簡便簡便簡便簡便簡便簡便簡便、有、有效效種子：種子：將保存在砂土管、冷凍干燥管

16、中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養(yǎng),最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。這些純種培養(yǎng)物稱為種子。種子液質(zhì)量的優(yōu)劣對發(fā)酵生產(chǎn)起著關(guān)鍵性的作用。種子液質(zhì)量的優(yōu)劣對發(fā)酵生產(chǎn)起著關(guān)鍵性的作用。NoImage種子擴培的目的種子擴培的目的q 接種量的需要接種量的需要q 菌種的馴化菌種的馴化q 縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平種子的要求：種子的要求：q 總量及濃度能滿足要求總量及濃度能滿足要求q 生理狀況穩(wěn)定，保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力生理狀況穩(wěn)定，保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力q 活力強，移種至發(fā)酵后，能夠迅速生長活力強，移種至發(fā)酵后，能夠迅速生長q 無雜菌污染無

17、雜菌污染二，種子制備的過程二，種子制備的過程：實驗室種子制備階段：不用種子罐，所用的設(shè)備為培養(yǎng)箱、搖床等實驗室常見設(shè)備，在工廠這些培養(yǎng)過程一般都在菌種室完成，因此將其稱為實驗室階段的種子培養(yǎng)。 生產(chǎn)車間種子制備階段 ：種子培養(yǎng)在種子罐里面進行，一般在工廠歸發(fā)酵車間管理，因此稱這些培養(yǎng)過程為生產(chǎn)車間階段。 實驗室種子的制備對于產(chǎn)孢子能力強的及孢子發(fā)芽、生長繁殖快的菌種可以采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)孢子，孢子可直接作為種子罐的種子，這樣操作簡便，不易污染雜菌。對于產(chǎn)孢子能力不強或孢子發(fā)芽慢的菌種，可以用液體培養(yǎng)法。試管三角瓶搖床種子罐 生產(chǎn)車間種子制備 v實驗室制備的孢子斜面或搖瓶種子移接到種子罐進行擴大

18、培養(yǎng)v種子罐培養(yǎng)一方面使菌種獲得足夠的數(shù)量，另一方面種子罐中的培養(yǎng)基更接近發(fā)酵罐培養(yǎng)的醪液成分和培養(yǎng)條件，譬如通無菌空氣，攪拌形式等等，以使菌體適應(yīng)發(fā)酵環(huán)境 （1）表面培養(yǎng)）表面培養(yǎng)v表面培養(yǎng)是一種好氧靜置培養(yǎng)方法。針對容器內(nèi)培養(yǎng)基物態(tài)又分為液態(tài)表面培養(yǎng)和固態(tài)表面培養(yǎng)。v相對于容器內(nèi)培養(yǎng)基體積而言，表面積越大，越易促進氧氣由氣液/氣固界面向培養(yǎng)基內(nèi)傳遞。這種培養(yǎng)方法菌的生長速度與培養(yǎng)基深度有關(guān)，單位體積的表面積越大，生長速度也越快。v氧的供給常成為發(fā)酵的限速因素，所以發(fā)酵周期長，占地面積大。v優(yōu)點是不需要深層培養(yǎng)時的攪拌和通氣，節(jié)省動力。如醋酸、檸檬酸發(fā)酵和曲盤制曲。種子培養(yǎng)的方法v固體培養(yǎng)又

19、分為淺盤固體培養(yǎng)和深層固體培養(yǎng)，統(tǒng)稱曲法培養(yǎng)。它起源于我國釀造生產(chǎn)特有的傳統(tǒng)制曲技術(shù)。其最大特點是固體曲的酶活力高。 （2）固體培養(yǎng)v固體培養(yǎng)具有以下優(yōu)點：原料：以谷物和農(nóng)業(yè)廢物為主要原料，只需外加適量水分、無機鹽等。培養(yǎng)基組成簡單。防止污染：利用霉菌能在水分較低的基質(zhì)表面進行增殖的特性，在這種條件下，細菌生長不好，因此不易引起細菌污染。通氣：無論淺盤或深層固體通風(fēng)制曲，可以在曲房周圍使用循環(huán)的冷卻增濕的無菌空氣來控制溫濕度，并且能根據(jù)菌種在不同生理時期的需要，靈活加以調(diào)節(jié)。在固體培養(yǎng)中，氧氣是由基質(zhì)粒子間空隙的空氣直接供給微生物，比液體培養(yǎng)時的用通氣攪拌供給氧氣節(jié)能。 （3）液體深層培養(yǎng)液體

20、深層培養(yǎng) v用液體深層發(fā)酵罐從罐底部通氣，送入的空氣由攪拌槳葉分散成微小氣泡以促進氧的溶解。這種由罐底部通氣攪拌的培養(yǎng)方法，相對于由氣液界面靠自然擴散使氧溶解的表面培養(yǎng)法來講，稱為深層培養(yǎng)法。v特點是容易按照生產(chǎn)菌種對于代謝的營養(yǎng)要求以及不同生理時期的通氣、攪拌、溫度、與培養(yǎng)基中氫離子濃度等條件，選擇最佳培養(yǎng)條件。（4 4）載體培養(yǎng)法）載體培養(yǎng)法 v載體培養(yǎng)脫胎于曲法培養(yǎng)，同時又吸收了液體培養(yǎng)的優(yōu)點，是近年來新發(fā)展的一種培養(yǎng)方法。v特征是以天然或人工合成的多孔材料代替麩皮之類的固態(tài)基質(zhì)作為微生物的載體，營養(yǎng)成分可以嚴(yán)格控制，發(fā)酵結(jié)束，只需將菌體和培養(yǎng)液擠壓出來進行抽提，載體又可以重新使用。v載

21、體的取材必須耐蒸汽加熱或藥物滅菌，多孔結(jié)構(gòu)既有足夠的表面積，又能允許空氣流通。 影響種子質(zhì)量的因素及控制v1，種子質(zhì)量的判斷，種子質(zhì)量的判斷v 種子質(zhì)量的最終指標(biāo)是考察其在發(fā)酵罐中所表現(xiàn)出來的生產(chǎn)能力。在培養(yǎng)過程中定期取樣測定一些參數(shù)以觀察基質(zhì)的代謝變化及菌絲形態(tài)是否正常。v1）pH；v2）培養(yǎng)基滅菌后磷、糖、氨基氮的含量；v3）菌絲形態(tài)、菌絲濃度和培養(yǎng)液外觀（色素、顆粒等）；v4）其他參數(shù)，如接前抗生素含量、某種酶活力等v5）無任何雜菌污染2，影響種子質(zhì)量的主要因素，影響種子質(zhì)量的主要因素 （1）培養(yǎng)基 主要是碳源、氮源、無機鹽、生長素和水等。 （2）培養(yǎng)條件 溫度：溫度直接影響生長和酶的合

22、成； pH值：對微生物有明顯的影響。 通氣攪拌：（溶解氧的作用：參與菌體呼吸作用） 泡沫(危害：影響微生物對氧的吸收；妨礙CO2的排除；減少設(shè)備利用率) （3）染菌的控制 染菌原因：設(shè)備、管道、閥門漏損、發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)“死角”、滅菌不徹底、空氣凈化不好、無菌操作不嚴(yán)、菌種不純； （4）種齡及接種量v種齡：是指種子罐中培養(yǎng)的菌絲體開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間。v通常種齡是以處于生命力極旺盛的對數(shù)生長期，菌體量還未達到最大值時的培養(yǎng)時間較為合適。時間太長，菌種趨于老化，生產(chǎn)能力下降，菌體自溶；種齡太短，造成發(fā)酵前期生長緩慢。接種齡與接種量接種齡與接種量v接種量：是指移入的種子液體積和接種后

23、培養(yǎng)液體積的比例。v接種量的大小決定于生產(chǎn)菌種在發(fā)酵罐中生長繁殖的速度，采用較大的接種量可以縮短發(fā)酵罐中菌絲繁殖達到高峰的時間，使產(chǎn)物的形成提前到來，并可減少雜菌的生長機會。但接種量過大或者過小，均會影響發(fā)酵。過大會引起溶氧不足，影響產(chǎn)物合成；而且會過多移入代謝廢物，也不經(jīng)濟；過小會延長培養(yǎng)時間，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率。v通常接種量，細菌通常接種量，細菌15%，酵，酵母菌母菌510%，霉菌，霉菌715%，接種齡與接種量接種齡與接種量移種：防止染菌 孢子懸浮液種子、搖瓶菌絲體種子采用火罐法或壓差法接入。 種子罐之間或發(fā)酵罐間的移種方式，主要采用差壓法。由種子接種管道進行移種，移種過程中要防止接受罐表

24、壓降至零，否則會引起染菌。從實驗室搖瓶或孢子懸浮液容器接種從種子罐接種種子罐級數(shù)的確定孢子或搖瓶菌絲一級種子罐二級發(fā)酵發(fā)酵罐二級種子罐三級發(fā)酵發(fā)酵罐四級發(fā)酵發(fā)酵罐三級種子罐種子罐級數(shù)：是指制備種子需逐級擴大培養(yǎng)的次數(shù)：1、接種量2、孢子發(fā)芽能力、菌體生長特性3、發(fā)酵規(guī)模級數(shù)大，難控制、易染菌、易變異，難管理，一般2-4級種子進入發(fā)酵罐：能迅速生長，達到一定的量，利于產(chǎn)物合成。3、種子異常分析、種子異常分析 A、菌種生長發(fā)育緩慢或過快：通入的空氣溫度低、滅菌質(zhì)量差B、菌絲結(jié)團：接種量、攪拌不好。C、菌絲粘壁：攪拌不好、泡沫多、裝料少。種子制備過程舉例種子制備過程舉例一、谷氨酸生產(chǎn)的種子制備一、谷

25、氨酸生產(chǎn)的種子制備制備過程制備過程斜面菌種斜面菌種一級種子培養(yǎng)一級種子培養(yǎng)二級種子培養(yǎng)二級種子培養(yǎng)發(fā)酵發(fā)酵1、斜面、斜面 (AS1.299)培養(yǎng)基：蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨 1%，牛肉膏，牛肉膏1%，氯化鈉，氯化鈉 0.5 瓊脂瓊脂 2%， pH 7.0-7.2培養(yǎng)基特點：培養(yǎng)基特點：有利于菌體的生長，原料比較精細有利于菌體的生長，原料比較精細培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：32，生長，生長18-24小時小時生長斜面要求：生長斜面要求：生長良好，所使用斜面連續(xù)傳代不超過生長良好，所使用斜面連續(xù)傳代不超過 3次次2. 一級一級種子（搖瓶）種子（搖瓶）培養(yǎng)條件：于培養(yǎng)條件：于1000ml三角瓶中，裝液三角瓶中，裝液200-250ml,32培培 養(yǎng)養(yǎng)12小時。小時。培養(yǎng)基：葡萄糖培養(yǎng)基：葡萄糖2%，尿素，尿素0.5%，玉米漿，玉米漿 2.5%， K2HPO4 0.1%培養(yǎng)基特點：培養(yǎng)基特點：有利于菌體的生長，所使用的原料已經(jīng)基有利于菌體的生長，所使用的原料已經(jīng)基 本接近于發(fā)酵培養(yǎng)基本接近于發(fā)酵培養(yǎng)基3. 二級