臨床微生物大講堂第五講(結核分枝桿菌檢測)之問題集錦

1、1. 【多耐】李曉英成都臭氧消毒可以殺死結核菌嗎回答：想法很好，但是我沒有查到相關的文獻支持臭氧可以殺死結核菌。 2. 【多耐】盧先雷 成都五院4%NaOH消化離心法現(xiàn)在還用嗎？回答：此法國內現(xiàn)在還在使用，課件里介紹的方法是tw使用的。 3. 【中敏】張江峰河南省醫(yī)院(58313037) 21:19:28首先感謝范老師的精彩演講，針對潛伏性結核病的早期診斷，相比較來說哪些檢測適合？對于MTB和NTM，用MPT64抗原檢測能直接區(qū)分？回答：謝謝老師的認可。目前潛伏性結核感染（LTBI）的早期診斷，比較好的方法還是IGRAs，但要結合臨床表現(xiàn)及影像學資料聯(lián)合判斷，排除有活動性結核的可能。TST也可

2、以作為LTBI的檢測手段，但是不能區(qū)分BCG接種導致的假陽性干擾。利用MPT64抗原檢測結核分枝桿菌培養(yǎng)液可以區(qū)分MTB和NTM，但要注意某些BCG型別的假陰性，不可以鑒別LTBI和活動性TB。 4. 【低耐】周曉紅 廣州請問上述培養(yǎng)方法對于NTM能培養(yǎng)出來嗎？回答：無論是固體培養(yǎng)（L-J）還是MGIT960都是可以培養(yǎng)MTB和NTM的。 5. 【高耐】李惠敏 上海 2015-8-11 21:18:502A生物安全柜不可以用于結核實驗室嗎回答：如果用來結核菌涂片檢測是完全可以的，但是做藥敏（高濃度菌液或純菌）的話建議還是使用B2級別的100%外排式BSC，同時配備負壓環(huán)境，做好生物安全防護。

3、6. 【中敏】王欣撫順第四醫(yī)院遼寧(2366658092) 21:19:58液體培養(yǎng)陽性的標本如果轉做固體培養(yǎng)基呢？除了液轉固的方法還有其他的好的方法嗎？回答：首先，液體培養(yǎng)陽性,抗酸染色證實為抗酸桿菌,即可報告臨床分枝桿菌培養(yǎng)陽性,不需要轉種固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)陽性的標本是可以轉種固體培養(yǎng)基，但是周期比較長。目前培養(yǎng)方法只有液體培養(yǎng)是最為理想的方法，能做結核培養(yǎng)的商業(yè)化系統(tǒng)主要是BD MGIT960、TREK兩種，也是FDA批準通過的兩種系統(tǒng)（僅此兩種）。其他的血培養(yǎng)系統(tǒng)也是可以進行結核血培養(yǎng)的。 7. 【高耐】陸軍?浙江衢州IGRAs陽性肯定是潛伏性結核感染嗎？回答：首先要明確一點的是，任

4、何一種方法都有其局限性，不可能敏感性和特異性都達到100%。IGRSs也不例外，只不過假陰性的比率非常的低而已。 8. 【低耐】黃金偉溫醫(yī)附五院臨床工作中發(fā)現(xiàn)T-SPOT遠沒有宣傳的好回答： IGRAs不能區(qū)別LTBI和活動性TB，此法比較適合用于發(fā)達國家，TB的發(fā)病率在發(fā)達國家要相對的低很多，使用IGRAs主要是用來篩查LTBI，進行干預治療以實現(xiàn)消滅結核的目的。我國是TB大國，按照全球1/3感染的比例算，那我國的LTBI可是個驚人的數(shù)字，所以會有很多IGRAs陽性的正常人。臨床在診斷活動性TB的時候不能單憑此檢測結果就下結論，需要結合臨床癥狀和影像學檢查綜合考慮。因此，IGRAs只能輔助性

5、的診斷活動性TB。9. 【低耐】王山梅河南省醫(yī) 2015-8-11 21:21:30非常感謝，請問NTM的生物安全要求是否等同MTB，也就是普通實驗室是否可以處理NTM回答：NTM的致病性要遠遠的低于MTB，所以一般實驗室是可以處理NTM的，但毒力低也不可以輕視，最好還是在BSC內操作。 10. 【高耐】李惠敏 上海(260141310) 21:18:502A生物安全柜不可以用于結核實驗室嗎？只做涂片和染色。回答：A2級的生物安全柜做染色和涂片足矣。 11. 【泛耐】鄺俊 廣西Y-干擾素釋放試驗能否區(qū)分NTM和結核？回答：IGRAs是可以區(qū)分NTM的，雖然在一些NTM中也有表達ESAT6和CF

6、P10的，比如堪薩斯、轉黃、海分枝、斯賽格分支桿菌等，但可以導致人體發(fā)生免疫反應的只有堪薩斯，而堪薩斯在臨床很少發(fā)生感染，所以可以認為IGRAs是高度特異的。 12. 烤片機65，30分鐘能滅活結核桿菌嗎？回答：烤片機65也可以起到殺菌作用。 13. 【多耐】曾吉-武漢T-spot假陰性有多高？有數(shù)據(jù)嗎？回答：WHO發(fā)布的指南中，IGRAs診斷活動性TB的陽性率在73%-83%，也就是說，有將近1/4的活動性TB被漏檢。 14. 【中敏】張江峰河南省醫(yī)院(58313037) 21:22:51針對MPT64抗原檢測其靈敏度如何？該檢測方法是否存在假陽性的結果？有哪些影響因素引起假陽性？回答：大多

7、數(shù)文獻報道MPT64抗原的靈敏性在95%以上，特異性在98以上。也有文獻的報道結果低于上述比率。任何一個方法都會存在假陽性或假陰性。文獻中報道的假陽性，更多的是出現(xiàn)在培養(yǎng)管污染的情況，正常培養(yǎng)陰性的管子偶爾也會出現(xiàn)假陽性，但幾率較低，具體是什么原因導致的，原因不明確。如果培養(yǎng)管中的菌量較低，亦或是遇到BCG的4個亞株（MPT64缺失）會出現(xiàn)假陰性?？傊?，盡量不要使用培養(yǎng)污染的管子進行MPT64的鑒定，會降低檢測的效力。 15. 【多耐】魯炳懷 北京pcr檢測結核如何評價？如何和痰涂片結核？回答：評價首先需要確立一個評價標準，尋找一個參比方法，通常是以培養(yǎng)結果作為標準，將PCR檢測結果和痰涂片結

8、果同培養(yǎng)結果進行比較，痰涂片也可以和PCR結果進行比較。 16. 【高耐】閆立靜 廊坊濃縮法會不會有污染回答：保證濃縮法使用的溶劑是可靠的，做好陰性和陽性對照，嚴格按照操作規(guī)程操作是沒有問題的。 17. 【多耐】彭娟-吉首 2015-8-11 21:24:35范老師你好，我們在做天騎科技夾層杯試驗，你有對夾層杯法的評價嗎？回答：抱歉，您說的這個夾層杯我沒有使用過，不好做出評價。 18. 【高耐】劉擁榮 寧鄉(xiāng)縣老師好，我想問一下，我們用的是彭氏杯檢測，平日里都在生物安全柜里操作，老師說房間也需要保持負壓，這樣的要求對基層來說有點高回答：我在課件里講的是如果操作藥敏，強烈建議有負壓環(huán)境，因為在藥敏

9、過程中，會制備高濃度的MTB菌液，會產生大量的氣溶膠，再好的BSC也不能完全保證不會有氣溶膠外泄，所以最好有負壓環(huán)境，保證氣流的定量流動。但如果只是做抗酸涂片和培養(yǎng)的話，沒有負壓是可以的，但要做好個人防護。 19. 【高耐】江鴻樂 黃山 2015-8-11 21:25:04比較高壓哪個比較方便一點？回答：高壓的效果是毋庸置疑的，高壓后操作是絕對安全的，但是需要較長的時間。次氯酸鈉濃縮法雖然可以殺死MTB，但肯定是沒有高壓的結果可靠，不能保證所有的MTB都被殺死，但已大大降低了生物風險。操作起來會比較省時方便。 20. 【低耐】余蓉 許昌謝謝老師的精彩講解，范老師在課件中提到的tw涂片的方法，是

10、現(xiàn)在用彭氏杯法的結核桿菌集菌法嗎？回答：我沒有使用過老師說的彭氏杯法，但我想最終達到的目的都是一樣的，富集菌落提高陽性率。 21. 【高耐】鄧起秀?廣西欽州 2015-8-11 21:25:27謝謝范老師精彩演講，1、請問胸水有什么好的方法固定，平時染色到一半就掉完，到最后鏡檢就什么都沒有了？2、抗酸染色方法有熱染和冷染，請問陽性率哪個高，熱染抗酸桿菌永不褪色，冷然容易褪色，平時工作我們應該用那種方法比較好？3、如果肺結核病人吃藥大概一年，臨床癥狀消失，痰涂片陰性，拍片提示還是肺結核，請問這時候是以實驗室檢驗結果為主還是以拍片結果為主，還需要繼續(xù)治療嗎？回答：1.1.首先一點是涂片不要太厚，最

11、好用NaOH消化處理，離心后再涂片，玻片要脫脂。錢雪琴老師的做法：將胸水中的凝塊絮狀物吸到另外一只離心管，剩余標本離心沉淀，去上清，將沉淀物與之前的凝塊合在一起，用2倍體積2%-4%NaOH消化半小時，用3-4倍PBS或蒸餾水中和，離心，棄上清，取一滴涂成10mm*20mm大小。消化時以絮狀物和凝塊完全消失溶解為宜，要漩渦震蕩。胸水離心后,如果不消化處理,要避免染色時脫落,涂片做到盡可能薄，最好紫外線照射2個小時，也是可以的. 2.陽性率我沒有做過比較，但效果應該是一樣的，只是放久了冷染會褪色。至于使用哪種方法，要綜合多方面的因素，如果您所在的省份需要陽性MTB涂片保存時間很久，平時標本量不多

12、，那可以使用熱染法，反之使用冷染比較好。 3.結核多數(shù)會形成空洞的鈣化灶，至于是活動性TB還是治愈后存留的空洞，這個就不好說了，要看閱片的臨床醫(yī)生的能力，抗結核治療一年已經基本可以治愈，前提是在準確藥敏結果指導下治療。涂片轉陰，沒有臨床癥狀并持續(xù)2-3個月，基本可以認為是治愈了。 22. 【敏感】李晶晶-臨汾(943759975) 21:26:04胸水結核菌圖片一定需要離心嗎？是不是根據(jù)胸水性質而定？回答：胸水結核菌涂片最好是離心消化后再涂片，因為胸水中的菌載量通常是比較低的，染色時易脫落,需要離心富集菌再進行檢測。胸水量50-100ml為宜。 23. 【低耐】黃金偉溫醫(yī)附五院(2611188

13、40) 21:26:06個人認為建議國內取消T-SPOT檢測，增加涂片檢查，加強尤其腦脊液，心包積液，腹腔積液的離心及標準化檢測回答：取消T-SPOT肯定是不可能的，只是要合理使用。涂片畢竟也有局限性，結核的診斷本就是復雜困難的，需要聯(lián)合多種方法檢測。 24. 【敏感】杜帥先武漢協(xié)和結核TSPOT檢測，有時候會碰到陽性陰性對照，以及A，B抗原斑點都有很多點，復查也一樣。尤其是風濕科和消化科的病人常見。請問老師們碰到這種情況怎么解釋？回答：T-SPOT檢測結果判讀是數(shù)細胞點數(shù)，如果遇到一些患者，特別是風濕科的患者，或者是免疫性疾病的患者，其體內T細胞釋放的干擾素-的量會偏高，即本底偏高，致使陽性

14、對照和陰性對照都出現(xiàn)較多的斑點，造成結果判讀的困難。 25. 【高耐】陳志堅-廣西(429327988) 21:26:29范老師，想問：（1）有一病人去年上半年查出結核，痰涂片也找到抗酸桿菌治療后好轉，今年8月初，又出現(xiàn)咯血，CT看到新的結節(jié)狀，但痰涂片找不到結核菌，為什么呢？（2）結核菌有沒有排菌期？謝謝回答：1.結核病治愈后是非常容易復發(fā)的，因為肺泡巨噬細胞很難將MTB完全清除。還有就是有可能該患者又被傳染而發(fā)病。有TB的癥狀但涂片陰性是常見的情況，TB涂片陽性要有一定的前提條件：首先，該患者必須是開放性TB，MTB在患者咳嗽的過程中才能隨痰液排出；菌量也是一個重要條件，涂片的敏感性或是檢

15、測下限在5000cfu/ml，如果低于此水平，涂片是檢測不出的。另外，每次咳痰也不一定都是從病灶咳出的，因為每次咳痰的力度不同，痰液有可能從不同部位的肺段排出，就會出現(xiàn)時陽時陰的情況。 26. 【泛耐】周惠娟-陜西請問胸水,有什么好的方法固定，平時染色到一半就掉完，到最后鏡檢就什么都沒有了回答：請參見問題21. 27. 【高耐】江鴻樂 黃山老師你好，我們醫(yī)院現(xiàn)在是高壓之后離心涂片，然后鏡檢，比較次氯酸鈉法離心涂片，它們的優(yōu)缺點是什么？回答：高壓后離心,標本沒有達到真正的濃縮,會有很多沉淀，耗時長,優(yōu)點是安全。次氯酸鈉法消化痰比較徹底，缺點是離心前不加水稀釋，染色時痰膜易脫落。建議：離心前用蒸餾

16、水稀釋或不稀釋，但要在沉淀中加1：15的血漿1滴。(錢雪琴老師做法) 28. 【高耐】楊樂園-上海市一寶山分院我和吳慶老師問題一樣 MPB64和MPT64是指一種東西么？我們現(xiàn)在用的結核抗原檢測培養(yǎng)物是MTB還是NTM用的就是檢測MPB64。回答：MPT64又叫MPB64，叫法不同。 29. 【MDR】盧先雷 成都五院如何看待痰涂片抗酸桿菌陽性中的NTM的問題？回答：NTM近年來的發(fā)病率程上升趨勢，但多數(shù)是肺外的NTM感染。NTM抗酸涂片很難通過鏡下就將其同MTB區(qū)分開，這需要經驗非常之豐富的閱片人員，但也不能保證結果完全正確，所以最好不要通過鏡檢來區(qū)分NTM和MTB。 30. 【MDR】盧先

17、雷 成都五院 2015-08-11 21:30:02NTM的比例大概占多少比例？回答：2000年全國第四次流調的結果是NTM總感染率為11%，2010年第五次全國流調的結果為22.9%，10年翻了一倍。31. 【R】周川平陜西 2015-08-11 21:31:48次氯酸鈉法離心涂片和氫氧化鈉處理后離心，它們的優(yōu)缺點是什么？回答：次氯酸鈉處理：1. 安全，2. 對痰的消化比較徹底3. 非特異性物質增加，對鏡檢有干擾4. 不易處理胸腹水、膿、腦脊液和明顯的血性穿刺液NAOH處理：1. 菌是活菌，存在生物危險，2. 消化痰和尿的能力不如次氯酸鈉3. 非特異性物質少，鏡檢背景干凈，4. 對常見標本均

18、能消化處理32. 【中敏】周志敏 許昌高壓滅菌與次氯酸鈉處理相比較哪個效果更好？回答： 次氯酸鈉好。參照問題27。33. 【敏感】張江峰河南省醫(yī)院謝謝老師的回答，還有問題，Xpert檢測方法，是一個盒子檢測一種耐藥嗎？對利福平耐藥檢測是針對RRDR耐藥決定區(qū)設計探針，那就檢測不出非RRDR的利福平耐藥檢測？回答：Xpert只能檢測利福平耐藥。其設計的探針也只能檢測對利福平是否耐藥。因對利福平耐藥的MTB, 95%也對INH耐藥，所以認為對利福平耐藥的MTB基本就是MDR。34. 【MDR】盧先雷 成都五院 2015-08-11 21:33:25快速生長NTM與緩慢生長NTM的藥敏結果差異？回答

19、：快生長的NTM常見有偶發(fā)分枝桿菌復合群、龜分枝桿菌/膿腫分枝桿菌、轉黃分枝桿菌、齒垢分枝桿菌，其他的基本為慢生長NTM。慢速生長的NTM藥敏通常使用MGIT 960 TBeXiST檢測，快速生長的NTM使用CLSI M24-A2中的MIC法。NTM治療通常比較困難，往往需要幾個月的治療周期，且結果不理想?？焐LNTM應該做藥敏的藥物有：阿米卡星、頭孢西丁、環(huán)丙沙星、克拉霉素、多西環(huán)素（或米諾環(huán)素）、亞胺培南、利奈唑胺、莫西沙星、復方新諾明、妥布霉素。慢生長的NTM，在CLAI M24-A2中有列出海分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌病和鳥分枝桿菌復合群的藥敏規(guī)則，都是不一樣的。有一些NTM的藥敏規(guī)則尚

20、未標準化。引自CLSI M24-A235. 【S】馬瓊 河南省醫(yī) 2015-08-11 21:33:57實驗室對NTM的藥敏試驗有什么好的方法？回答：NTM的藥敏我沒有做過，個人認為還是參照CLSI-M24-A2的要求來操作吧。36. 【高耐】陸軍?浙江衢州消化多長時間？回答：消化15分鐘，時間要嚴格控制，不可過長，否則MTB會發(fā)生菌體降解。37. 【敏感】黃曉霞 陜西 2015-8-11 21:33:295%次氯酸鈉溶液是84液嗎回答：需要看包裝上的說明，有效氯的濃度是多少，進行換算?？梢杂孟酒渲谩Ｗ詈檬乾F(xiàn)用現(xiàn)配，能夠保證有效氯的濃度。38. 【低耐】林莎 長春胸水圖片，多少視野查到多少

21、抗酸陽性菌算是陽性？胸水和痰液要求一樣嗎？回答：胸水涂片等同于痰涂片，找到3條以上?？顾崛旧?00視野，熒光染色50視野。39. 【高耐】劉擁榮 寧鄉(xiāng)縣一定要在負壓房間嗎？回答：請參見問題18.40. 【高耐】張艷山西太原錢老師消化后加水多少回答：加消化試劑不超過15ml,再加水至50ml.41. 【低耐】楊茹 秦皇島以上講的幾種方法，都不能明確的區(qū)分是潛伏期結核還是活動期結核，是嗎？回答：免疫學方法都無法區(qū)分LTBI還是活動性TB。42. 【中敏】付先鋒四川遂寧老師們請問，誰知道多重耐藥菌的耐藥趨勢圖怎么做回答：這個可以用Excel表格或是專業(yè)的繪圖軟件。43. 【敏感】柳麗娟福建傳染我們準

22、備做結核培養(yǎng)，可是沒有負壓實驗室，只配了B2安全柜和通風柜，需注意什么？回答：B2安全柜是100%外排的，培養(yǎng)和涂片其實都是差不多的，不會產生高濃度含MTB的氣溶膠，只要做好個人防護，如佩戴N95口罩，穿一次性反穿衣等，是可以實現(xiàn)自我防護的。只有在做藥敏的時候，強烈建議配有負壓環(huán)境。44. 【高耐】張艷山西太原(834935027) 21:37:43xpert如何收費回答：這個每個省的收費標準不一樣，上海目前還沒有收費標準，但計劃是申請950-1000/次。比較貴。45. 【敏感】柳麗娟福建傳染有人用過銀科的藥敏試劑嗎？回答：我沒有用過，您可以在群里面問問其他的老師。46. 【敏感】孫學慧 承

23、德市中心醫(yī)院濃縮集菌后還有必要再紫外線照射嗎回答：如果使用5%次氯酸鈉的話沒有必要。如果使用NaOH，最好要照紫外，在生物安全柜中烤片也行。47. 【低耐】楊茹 秦皇島固體培養(yǎng)基一般4周報陽，做藥敏要取2周的菌苔，怎樣做到？回答：從固體培養(yǎng)基上生長肉眼可見的菌落開始算起，14天內用于藥敏檢測，如超過這個期限菌齡較久，會影響藥敏結果，特別是吡嗪酰胺的藥敏。48. 【敏感】張江峰河南省醫(yī)院老師好，您介紹了許多針對MTB的檢測技術，針對NTM菌株的鑒定，是否也有相對應的檢測方法呢？回答：針對NTM的檢測也有很多檢測手段，比如HAIN GenoType Mycobacterium CM/AS，北京博奧

24、公司的診斷芯片等。49. 【低耐】梁莉 宿州我們是用84浸泡再離心取沉渣圖片！84對結果有影響么？回答：84消毒液的有效氯濃度大概在5.5%-6.5%，濃度有點偏高，如果不稀釋的話作用時間要相應的縮短，但殺菌的效果需要做實驗來驗證。50. 【低耐】侯辰蕊-山西請問現(xiàn)在市面國產結核PCR試劑所測序列都一樣嗎?我們結核PCR陽性與涂片不是很一致，？回答：目前國產PCR試劑盒我沒有使用過，但都應是MTB的保守序列，比如rpoB，熱休克蛋白65基因等。PCR結果與涂片結果不一致是正常的，因為痰液里存在一些PCR反應酶抑制劑，有時會導致假陰性。有時因為閱片的原因（漏檢）涂片會假陰性，等等，都會導致兩種方法的結果不一致。51. 【敏感】孫學慧 承德市中心醫(yī)院胸腹水、腦脊液，可以也用次氯酸鈉處理嗎回答：不