基因工程試題4doc-基因工程試題

1、基因工程試題、選擇題（每題 1分，共 15分）1、下列有關(guān)基因的敘述，錯(cuò)誤的是【 】 A蛋白質(zhì)是基因表達(dá)的唯一產(chǎn)物B 基因是 DNA 鏈上具有編碼功能的片段C 基因也可以是 RNAD 基因突變不一定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)B 切，接，轉(zhuǎn)，增，檢D 切，接，增，轉(zhuǎn)，檢基因工程及發(fā)酵工程 基因工程及細(xì)胞工程2、基因工程的單元操作順序是【 】A 增，轉(zhuǎn)，檢，切，接C 接，轉(zhuǎn)，增，檢，切3、生物工程的上游技術(shù)是【 】A 基因工程及分離工程 BC 基因工程及酶工程 D4、下列各組專業(yè)術(shù)語(yǔ)中， 含義最為接近的是【 】A 終止子與終止密碼子 B 基因表達(dá)與基因轉(zhuǎn)譯C DNA 退火與 DNA 復(fù)性D 重組子與轉(zhuǎn)

2、化子5、根據(jù)酶切活性對(duì)鹽濃度的要求，限制性核酸內(nèi)切酶可分成【】A 2 大類 B 3 大類 C 4 大類 D 5 大類DNA 片段連接在一起，其和 3' -P和 3' -P6、T 4 -DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 底物的關(guān)鍵基團(tuán)是【 】A 2' -OH 和 5' PB 2' -OHC 3' -OH 和 2' PD 5' -OH7、下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是【 】A 連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 B 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD 連接酶通常應(yīng)過量 2-

3、5 倍8、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法不大適用于 【 】A 大腸桿菌 B 枯草桿菌 C 酵母菌 D 鏈霉菌9、下列各常用載體的裝載量排列順序，正確的是【 】A Cosmid >-DNA > PlasmidB -DNA > Cosmid > Plasmid> Plasmid > -DNAC Plasmid > -DNA > CosmidD Cosmid10、若某質(zhì)粒帶有 lacZ 標(biāo)記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培 養(yǎng)基中加入 【 】A 半乳糖 B 異丙基巰基 - - 半乳糖苷（ IPTG ）C 蔗糖 D 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - -

4、D- 半乳糖苷X-gal ）11、下列各組用于外源基因表達(dá)的受體細(xì)胞及其特點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系中，錯(cuò)誤的 是【】枯草桿菌分泌機(jī)制健全 酵母菌表達(dá)產(chǎn)物具有真核性疏水鍵 D 氫鍵A 大腸桿菌繁殖迅速 BC 鏈霉菌遺傳穩(wěn)定 D12、分子雜交的化學(xué)原理是形成 【 】 A 共價(jià)鍵 B 離子鍵 C13、某一重組 DNA（ 6.2 kb ） 的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)。用 SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子，其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合， 該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點(diǎn)共有 【 】C 2 個(gè) D 至少 2 個(gè) 【】B GGGCAD CGGACTTGACCATC】C 操作簡(jiǎn)便 D 表達(dá)

5、產(chǎn)物可以分泌A 4 個(gè) B 3 個(gè)14、下列設(shè)計(jì)的探針中，最佳的是 A ACATTAAATTATT C ACCTTGATAAGGT15、cDNA 法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是【 A 成功率高 B 不含內(nèi)含子 、名詞解釋（每題 2 分，共 20分）1、Southern blotting:2、Cosmid vector:3、cDNA library:4、RACE:5、Probe:6、RT-PCR7、Insert inactivation:8、S-D Sequence:9、Shuttle plasmid vector:10、MCS:、簡(jiǎn)答題（每題 5分，共 25分）1、理想質(zhì)粒載體的必備條件？2、核酸操作

6、的基本技術(shù)有哪些？3、影響核酸保存的關(guān)鍵因素是什么？怎樣保存核酸制品？4、合成 cDNA第二鏈的主要策略有哪些？5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？ 四、問答題（每題 10分，共 40分）1 PCR 技術(shù)主要應(yīng)用在哪些領(lǐng)域？2 細(xì)菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義？大腸桿菌 K12 限制與修飾系統(tǒng)的遺 傳分析揭示的 4 種表型是什么？3 試述 5 RACE技術(shù)原理和方法4 大腸桿菌作為基因工程受體菌具有哪些特點(diǎn)？真核基因在大腸桿菌中表 達(dá)存在哪些障礙？基因工程試題標(biāo)準(zhǔn)答案及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)一、選擇題（每題 1分，共 15 分）1、A 2 、 B 3 、 A 4 、 C 5 、 B 6 、 D 7 、 A 8

7、、A 9 、 A 10 、 D11 、C 12 、 D 13 、 D 14 、D 15 、 A二、名詞解釋（每題 2 分，共 20 分）1、限制修飾系統(tǒng)：限制修飾系統(tǒng)是大多數(shù)細(xì)菌體內(nèi)存在的類似動(dòng)物免疫系統(tǒng)的同限制性內(nèi) 切酶和甲基化酶組成的保護(hù)系統(tǒng)。 即通限制性內(nèi)切酶破壞噬菌體的DNA而導(dǎo)致噬菌體的寄主范圍受到限制， 同時(shí)通過甲基化酶的作用，將細(xì)菌自身的DNA甲基化， 使 DNA得以修飾，從而免遭自身限制性酶的破壞。2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn) 定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA文庫(kù)：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的

8、克隆的集合。4、RACE：是一種通過 PCR進(jìn)行 cDNA末端快速克隆的技術(shù)，是以 mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成 cDNA 第一鏈后用 PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到 3，或 5，端之間未知序列的方法。5、T-A clonging:又名 PCR克隆。 TaqDNA聚合酶具末端轉(zhuǎn)移酶活性，故用 TaqDNA聚合酶進(jìn)行 PCR反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物在其 3'末端往往習(xí)慣性的帶上一個(gè)腺嘌呤粘性末端（-A）, 從而難以將該產(chǎn)物以平末端連接的方式直接克隆到載體上；針對(duì) PCR產(chǎn)物的這一特點(diǎn)， 將普通的質(zhì)粒載體在其多克隆位點(diǎn)上用一種限制性內(nèi)切酶處理，獲得線形的平末端載體， 再在該載體的基礎(chǔ)上用末端轉(zhuǎn)移酶給其 3

9、'末端加上一個(gè)胸腺嘧啶粘性末端（-T ），由此獲得的新型載體稱之為 T 載體；用 T載體的 3 'T與含 PCR產(chǎn)物的 3'A進(jìn)行配對(duì)，而將 PCR產(chǎn)物以粘末 端連接的方式直接高效的克隆到 T 載體上的過程稱之為 T-A cloning 。6、RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRN，A 以寡聚 dT 為引物合成 cDNA第一鏈，然后用已知一 對(duì)引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄 PCR7、Insert inaction:即插入失活，基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)， 在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理， 并將外源 DNA片

10、段 插入該位點(diǎn)， 則插入的外源 DNA片段將破壞原有基因的讀碼框， 往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基 因無法翻譯表達(dá)， 或即使翻譯表達(dá)， 形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì)， 這一現(xiàn)象稱 為插入失活。 。8、S-D 序列：在大腸桿菌 mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S 核糖體 RNA3 ，末端堿基互補(bǔ)的序列， 該序列最初由 Shine 、Dalgarno 發(fā)現(xiàn)，故后來命名為 Shine Dalgarno 序列，簡(jiǎn)稱 S-D 序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種 不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS：指載體上人工合

11、成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片段。三、簡(jiǎn)答題（共 25分，每題 5 分）1、理想質(zhì)粒載體的必備條件？ 具有較小的分子質(zhì)量和較高的拷貝數(shù)。 具有若干限制性核酸內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)。具有兩種以上的選擇標(biāo)記基因。缺失 mob基因。插入外源基因的重組質(zhì)粒較易導(dǎo)入宿主細(xì)胞并自制和表達(dá)。2、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？核酸提取與純化核酸的檢測(cè)與保存核酸的凝膠電泳核酸分子雜交3、影響核酸保存的關(guān)鍵因素是什么？怎樣保存核酸制品？關(guān)鍵因素：保存液的酸堿度保存溫度保存方法：一般保存可用濃鹽液， NaCL-檸檬酸緩沖液或 0.1mol/L 醋酸緩沖液。對(duì) DNA來說， 在 pH4 11 的范

12、圍分子的堿基較穩(wěn)定，超出此范圍DNA 易變性或降解，低溫、 稀堿下保存 DNA及低溫下保存 RNA均較穩(wěn)定。固態(tài)核酸通常在 0以上低溫干燥保存即可。4、合成 cDNA第二鏈的主要策略有哪些？自身引導(dǎo)合成法置換合成法 PCR合成法快速擴(kuò)增 cDNA末端法雙鏈 cDNA末端 的處理 cDNA與載體的連接5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？ 是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)：證實(shí)了 DNA是遺傳物質(zhì)揭示了 DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA切割 DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與

13、DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問答題（每題 10分，共 40 分） 1 PCR 技術(shù)主要應(yīng)用于哪些領(lǐng)域？核酸基礎(chǔ)研究序列分析檢測(cè)基因表達(dá)從cDNA文庫(kù)中放大特定序列研究已知片段鄰近基因或未知 DNA 片段進(jìn)化分析醫(yī)學(xué)應(yīng)用分析生物學(xué)證據(jù)性別控制轉(zhuǎn)基 因檢測(cè)。2 細(xì)菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義？大腸桿菌 K12 限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示的 4 種表型是什么？宿主控制的限制與修飾現(xiàn)象廣泛存在于原核細(xì)菌中，它有兩方面的作用，一是保護(hù)自 身 DNA不受限制； 二是破壞入侵外源 DNA使之降解。 細(xì)菌正是利用限制與修飾系統(tǒng)來區(qū)分自 身 DNA與外源 DNA的。外源 DNA可以通過多種方

14、式進(jìn)入某一生物體內(nèi)， 但是它必須被修飾成 受體細(xì)胞的限制內(nèi)切酶無法辯認(rèn)的結(jié)構(gòu)形式， 才能在寄主細(xì)胞內(nèi)得以生存， 否則會(huì)很快被破 壞。因此， 在基因工程中， 常采用缺少限制作用的菌株作為受體，以保證基因操作的順利完 成。大腸桿菌 K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示，它有以下 4 種表型：r k+mk+ 野生型 r k-mk+ 限制缺陷型 r k-mk- 限制和修飾缺陷型 r k+mk- 修飾缺陷型3 試述 5 RACE技術(shù)原理和方法PCR用于擴(kuò)增代表 mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點(diǎn)與其 3或 5末端之間區(qū)域的部分 cDNA稱 為快速擴(kuò)增 cDNA末端技術(shù)（ RACE）。如果已知 mRNA的一片段鏈內(nèi)短

15、序列，據(jù)此或設(shè)計(jì)基因 特異引物，用原先存在的 poly（A） 尾（ 3末端）或附加的同聚尾（ 5末端）互補(bǔ)的序列做 末端引物，就可以獲得從未知末端直到已知區(qū)域的部分cDNA序列。為獲得 5末端部分 cDNA克隆需用基因特異引物，產(chǎn)物第一鏈產(chǎn)物，可用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶及 dATP 加 poly（A） 尾。通過 QT引物和反轉(zhuǎn)錄使用的上游基因特異引物生成第二鏈cDNA。4 大腸桿菌作為基因工程受體菌具有哪些特點(diǎn)？真核基因在大腸桿菌中表達(dá)存在哪些障礙？特點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背 景知識(shí)清楚，對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實(shí)踐， 大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系， 有多種適用的寄主菌株和載體系列， 大