骨鈣素作業(yè)指導書

1、文件編號：LAB OP- MY020第4頁，共1頁版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導書Elecsys E 170/E 411骨鈣素1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程18分鐘完成。第1步：20ml標本、生物素化的抗N-MID骨鈣素單克隆抗體和釘(Ru)標記的抗N-MID骨鈣素單克隆抗體混勻，形成夾 心復合物。第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化 學發(fā)光，通過光電倍增管進行測

2、定。檢測結(jié)果由機器自動從標準曲線上查出。此曲線由儀器通過2點定標校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標準曲線而得。2. 標本要求血清：按標準常規(guī)方法采集。血漿：Li-肝素、EDTA-K3抗凝。注意：避免溶血，因為血細胞含有的蛋白酶可分解骨鈣素。建議立即離心血標本。3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M:鏈霉親和素包被的微粒(透明瓶蓋)，1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力：470ng生物素/mg粒子。 含防腐劑。R1:生物素化的抗N-MID骨鈣素單克隆抗體(灰蓋)，1瓶，10ml。濃度1.5mg/l，磷酸緩沖液0.01mol/l , pH

3、6.0。含防 腐劑。R2: Ru(bpy)32 +化的抗N-MID骨鈣素單克隆抗體(黑蓋)，1瓶,10ml，濃度1.3mg/l，磷酸緩沖液0.1mol/l ，pH6.0。 含防腐劑。校準品：Elecsys N-MID 骨鈣素定標液(N-MID osteocalcin CalSet )貨號質(zhì)控品：Elecsys 骨標志物質(zhì)控品(PreciControl Bone ) 1，2和3貨號 1972227其他所需材料： Elecsys通用稀釋液貨號1732277 Elecsys1010 或2010分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液(ProCell )貨號 1662988 Elecsys 測量池清洗液(C

4、leanCell )貨號 1662970 Elecsys 清洗添加劑液(SysWash貨號1930346 Elecsys 系統(tǒng)清洗液(SysClean)貨號 1298500 Elecsys 系統(tǒng)清洗液支架(Adapter for SysClean) )貨號 11933159 Elecsys 1010 反應(yīng)杯(Assay Cup)貨號 11706829Elecsys 2010 反應(yīng)杯(Assay Cup)貨號 11706802 Elecsys 2010 吸樣頭(Assay Tip) 貨號 117067994. 儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn) Elecsys 2010/E 170/E 4

5、11全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準：每批N-MIDt鈣素試劑有一條形碼標簽，含有該批試劑定標所需的特殊信息。應(yīng)用N-MID骨鈣素CalSet定標液定標。文件編號：LAB OP- MY020第3頁，共5頁版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院Elecsys E 170/E 411檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導書Elecsys E 170/E 411定標頻率：每批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊 24小時以內(nèi)）標定一次，如再次標定即根據(jù)下列要求：Elecsys2010 : 一個月（同一批號試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）Elecsys1010 :每一試劑盒做一次

6、 7天（室溫20- 25度） 3天（室溫25-32度）各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時。5. 操作方法按儀器操作說明進行操作。檢查試劑與消耗品是否充足。使用前需混勻微粒。儀器通過掃描試劑盒條形碼自動輸入測試 所需的特異性參數(shù)，不需手工輸入。如果特殊情況下儀器無法閱讀條形碼，可以手工輸入15位數(shù)字。Elecsys2010 :將冷藏試劑預溫到20度后放置于儀器的試劑盤上，避免產(chǎn)生泡沫。儀器自動控制試劑溫度和開/關(guān)試劑瓶蓋。Elecsys1010 :將冷藏試劑預溫到2025度后放置于儀器的樣品/試劑盤上（室溫20-25度），避免產(chǎn)生泡沫。使用前手工打開試劑瓶蓋，使用后手

7、工關(guān)閉試劑瓶蓋并放回28度。6. 質(zhì)量控制各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實驗室的具體要求。檢測值應(yīng)落在確 定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計算方法對每一個標本，儀器會自動計算N-MID骨鈣素含量，單位是ng/ml。8. 參考范圍正常弁昔值:mX-lftP骨怦姦 第冗鬥分怕A1?】口并位2i1I-4J樂滂期泊02nn-46ft覽時札患出12 D2?13-2-：=34024-70加-刃步1792514-425J-T0?1351414-6如B必要"各實輕空應(yīng)自己測址一亍正割值范圉.9. 分析性能準確性：以下列出了此試劑

8、盒在Elecsys儀器上的表現(xiàn)。每個實驗室結(jié)果會不同。重復性測定采用的是美國臨床化學實驗室標準委員會修訂稿EP5-A標準方法進行評估，使用了 Elecsys試劑及人血清池、質(zhì)控進行測定：連續(xù)測定10天，每天測定6次（ n = 60次）；E170勺批內(nèi)重復性共測定了 21次。結(jié)果如下甲訥i" rm piwvsiDiiTotfll precistofiSampleMeanngnfilSOnun'llCV%SD 巾城iMHCV %Hunian senim 115.S0.614 JO11.01良5Huriun serunn 213.70.453.3n.sa備EHunun seiunn

9、 3Gfl.30.921.41.22l.BreclCofYlnH1Q.54鮎01.78PrfcConrlrgJ Bq 噲 21.2倔1.7PreciCtHYiroi Hone 3205當2.4&1-23.5417E17HpretitisflSampltMean ngymlSD ng/mlCV %Mammg/mlSOngj*mlCV %Human seruni 1風95©時Q.77134Oil1-6HuriUri224JS0.130.52S.50.3&1.4Human serum 376.4何.S7&.11.141.5PreciCOTlrol Bofle 122

10、20.1022.50胡1JPriKiCcmliibl Bone 294.91.061.19S71j081.1Pf 胡 Om&al Bone 31361.400.7嗽1.2分析靈敏度（最低檢測限）： 0.5ng/ml分析靈敏度代表了能與零區(qū)別的最低的骨鈣素值分析特異性由于使用了單克隆抗體，以下物質(zhì)無交叉反應(yīng)：骨特異ALP方法對比：將Elecsys骨鈣素（y）標本測定總數(shù)達：185與另一種骨鈣素測定方法（x ）使用臨床標本進行相關(guān)測試：Passing/Bablok線性回收Y= -2.79 + 1.29xy=-6.24 + 1.43xR=0.987r=0.987SD=1.54Sy.x= 3.

11、28標本濃度在10至210ng/ml之間。10. 干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素65mg/dl）、脂血（脂質(zhì)1500mg/dl ）和生物素100ng/ml干擾。受溶血干擾，血細胞含有的蛋 白酶可分解骨鈣素。接受高劑量生物素（5mg慶）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時后才能采血。不受類風濕因子干擾（2200U/ml）。16種常用藥物經(jīng)試驗對本測定無干擾。N-MIDt鈣素濃度高達4200ng/ml也不出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。接受過小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人會出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。Elecsys N-MID骨鈣素測定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進行診斷。11. 結(jié)果解釋12. 臨床意義

12、骨鈣素是骨基質(zhì)中最重要的一種特異性非膠原蛋白，其與骨鈣的結(jié)合作用依賴于維生素K。骨鈣素分子含49個氨基酸，分子量約5800D在骨合成中，成骨細胞產(chǎn)生骨鈣素，此過程依賴于維生素 K,同時維生素D3有促進產(chǎn)生骨鈣素的作用。 骨鈣素產(chǎn)生后一部分吸收進入骨基質(zhì)，另一部分釋放進入外周血。因此，血清（或血漿）中骨鈣素的含量與各種骨Elecsys E 170/E 411代謝紊亂中的骨轉(zhuǎn)換率有關(guān)。骨鈣素含量異常多見于骨質(zhì)疏松、原發(fā)性或繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進以及Paget病等疾病中。目前，骨鈣素已被視為骨轉(zhuǎn)換標志物，用于對上述疾病進行抗再吸收治療效果的監(jiān)測。完整的骨鈣素（氨基酸1-49）及大的N MID片斷（氨基酸1 43）均存在于血液中。完整的骨鈣素在外周血中不穩(wěn)定，羧基端43-44