生化分離技術(shù)試題及答案

1、浙江理工成教院期終考試生化分離技術(shù)試卷A試卷教學(xué)站 年級 班級 學(xué)號 姓名一、填空題（每空 1 分，共 21 分）。1、生化分離是從生物材料、微生物的發(fā)酵液或動植物細(xì)胞的培養(yǎng)液中分離并純化有關(guān)生化 產(chǎn)品的過程，一般采用如下工藝流程：發(fā)酵液 （） 細(xì)胞分離 （細(xì)胞破碎 細(xì)胞碎片分離） （ ） （） 成品加工。2、提取的產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)， 選用 細(xì)胞破碎法； 在細(xì)胞膜附近則可用 細(xì)胞破碎 法；提取的產(chǎn)物與細(xì)胞壁或膜相結(jié)合時(shí)，可選用機(jī)械法和化學(xué)法相結(jié)合的細(xì)胞破碎法。3、發(fā)酵液的預(yù)處理目的主要包括改變和 。4、典型的工業(yè)過濾設(shè)備有和 。5、反萃取是將目標(biāo)產(chǎn)物從轉(zhuǎn)入 的過程。6、超臨界流體萃取的溶劑可分為非

2、極性和極性溶劑兩種，常用的極性溶劑有和、非極性有 。7、按膜的孔徑的大小分類，可將膜分為、 、和 等。8、凍干操作過程包括：、 和 。二、判斷題（每題 1 分，共 15 分）1、鹽析是指向蛋白質(zhì)溶液中加入某些濃的中性鹽后，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出，以達(dá) 到分離、提純生物大分子的目的。（）2、常用的鹽析劑有葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺、明膠等。（）3、萃取是利用化合物在兩種互不相容的溶劑中溶解度或分配系數(shù)的不同，使化合物 從一種溶劑內(nèi)轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過反復(fù)多次的萃取，將絕大部分化合物提取出來的方法。（）4、雙水相萃取的體系的兩相是不含有水分的。（）5、膜分離操作中，所有溶質(zhì)均被透過液傳送到

3、膜表面上，不能完全透過膜的溶質(zhì)受到膜的 截留作用，在膜表面附近濃度升高，這種現(xiàn)象叫做濃差極化。（）6、凝膠色譜是利用不同生物分子的電離能力不同而達(dá)到物質(zhì)分離目的的。（）7、離子交換色譜是利用不同分子的大小不同而達(dá)到物質(zhì)分離目的的。（）8、親和色譜是利用生物分子之間的親和力的不同而達(dá)到物質(zhì)分離目的的。（）9、要增加目的物的溶解度，往往要在目的物的等電點(diǎn)附近進(jìn)行提取。（）10、蛋白質(zhì)類的生物大分子在鹽析過程中， 最好在高溫下進(jìn)行， 因?yàn)闇囟雀邥黾悠淙芙舛?。（?1、蛋白質(zhì)為兩性電解質(zhì)，改變pH 可以改變其電荷性質(zhì)， pH 大于 pI ，蛋白質(zhì)帶正電荷。12、丙酮沉析作用小于丙酮。（）13、真空冷

4、凍干燥的操作條件是高溫低壓，所以適合于干燥熱敏性物質(zhì)。（）14、生產(chǎn)氨基酸類藥物主要的生產(chǎn)方法有蛋白質(zhì)水解法、微生物發(fā)酵法、 酶工程法和化學(xué)合成法。（）15、DNA 、RNA 是核苷酸類物質(zhì)，胱氨酸和谷氨酸屬于蛋白質(zhì)類物質(zhì)。（）三、選擇題（ 18 為單選，每題 2分， 913 為多選，每題 3分，共 31分）1、發(fā)酵液的預(yù)處理方法不包括（）A、加熱B、絮凝C、離心D 、調(diào)節(jié) pH）D、高速球磨法2、下列細(xì)胞破碎的方法中，屬于非機(jī)械破碎法的是（ A 、化學(xué)法B、高壓勻漿法C、超聲波破碎法3、在萃取操作中，下列哪項(xiàng)不是選擇溶劑的原則（）A 、較高的選擇性B、較高的沸點(diǎn)C、較強(qiáng)的溶解能力D、易于回收

5、D、硫酸銨4、使蛋白質(zhì)鹽析，可加入試劑（）A 、鹽酸B、硫酸C、硝酸汞5、在一個(gè)完整的萃取過程中， 常常在萃取和反萃取的過程中增加洗滌操作， 目的是（ ）。 A 、除去與目標(biāo)產(chǎn)物同時(shí)萃取到有機(jī)相的雜質(zhì)C、增大目標(biāo)產(chǎn)物在水相中的分配系數(shù)B、增大目標(biāo)產(chǎn)物在有機(jī)相中的溶解度D 、增大選擇性系數(shù)。6、萃取中利用相似相溶的原理進(jìn)行萃取的過程稱為（）A 、反萃取B、物理萃取 C、化學(xué)萃取D、有機(jī)溶劑萃取 7、鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的原理是（C、與蛋白質(zhì)結(jié)合形成不溶性蛋白A、降低蛋白質(zhì)的介電常數(shù)B、中和電荷，破壞水膜8、膜分離是利用具有一定的（A 、選擇透過性B、吸附D、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液 pH 至等電點(diǎn)）性的過濾介

6、質(zhì)進(jìn)行物質(zhì)的分離過程。C、溶解D 、擴(kuò)散9、利用鹽析法進(jìn)行初步純化后都需要進(jìn)行脫鹽處理，常用的脫鹽方法有（）A、透析B 、超濾C、凝膠過濾D、離子交換10、常用于生物大分子沉淀的有機(jī)溶劑有（）A、乙醇B、丙酮C、異丙酮D 、甲醇11、晶體質(zhì)量主要是指（）A、純度B、粒度C、晶體形狀D 、晶體大小12、在結(jié)晶操作中，工業(yè)上常用的起晶方法有（）A 、重結(jié)晶B 、自然起晶法C、刺激起晶法D、晶種起晶法13、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，可分為（）A 、紙色譜B 、薄層色譜C、柱色譜D、吸附色譜四、簡答題（每題 5 分，共 20 分）。1、在生化分離與純化的過程中，要綜合運(yùn)用多種現(xiàn)代分離與純化的技術(shù)，才能

7、保證產(chǎn)品的有效性、穩(wěn)定性、均一性和純凈度。生化分離操作存在哪五個(gè)方面的特點(diǎn)？2、結(jié)晶的前提是什么？過飽和溶液的形成方法有哪些？3、萃取時(shí)根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物以及與其共存雜質(zhì)的性質(zhì)選擇合適的有機(jī)溶劑，可使目標(biāo)產(chǎn)物有較大的分配系數(shù)和較高的選擇性，萃取溶劑選擇的原則主要有哪些？4、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)流動相的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)分離原理的不同，色譜主要分為哪幾類？五、綜合應(yīng)用題（共 13 分，）4 分）1、臨床上治療尿毒癥采用的膜分離方法是什么？簡述該種分離方法的原理。（2、下面是關(guān)于胸腺肽提取分離的操作流程圖，回答下列問題。（共9 分）胸腺肽由兩種肽組成，其分子量分

8、別為9600 和 7000，含 15 種氨基酸，其中人體必需氨基酸的含量比較高。胸腺肽對熱穩(wěn)定，能耐80高溫不變性；對蛋白酶敏感，易降解失活。小牛胸腺原料處理 絞碎胸腺 制勻漿、提取 胸腺勻漿絞碎10000r/min 1min,-20 48h 超濾、提純 注射用 分裝、凍干 胸腺肽3%甘露醇精致液分子量 <10000超濾膜部分熱變性、離心、過濾 濾液80 5min,5000r/min 40min1 ）為什么以小牛胸腺作為原材料？（ 3 分）2）采用部分熱變形、離心、過濾操作的目的是什么？（3 分）3）為什么選用截留分子量小于 10000 的超濾膜？（ 3 分）浙江理工成教院期終考試生化分

9、離技術(shù)試卷A答案一、填空題（每空 1 分，共 21 分）。1、預(yù)處理、初步純化、高度純化2、機(jī)械、非機(jī)械3、發(fā)酵液過濾特性、雜質(zhì)的去除4、板框壓濾機(jī)、轉(zhuǎn)筒真空過濾機(jī)5、有機(jī)相、水相6、甲醇、乙醇、二氧化碳（注：甲醇、乙醇的位置可互換）7、超濾、微濾、納濾、反滲透8、預(yù)凍、升華干燥、解析干燥二、判斷題（每題1 分，共 15 分）1、2、×3、4、×5、6、×9、×10、×11、×12、×13、×7、×8、14、15、×三、選擇題（ 18 為單選，每題 2分，913 為多選，每題 3分，共 31 分

10、）1、 C2、A3、 B4、 D5、A6、 D7、 B8、A9、AC10、ABCD11、 ACD12 、 BCD13、 ABC四、簡答題（每題 5 分，共 20 分）1、特點(diǎn)：目的產(chǎn)物在初始物料（發(fā)酵液）中的含量低；培養(yǎng)液是多組分的混合物，除 少量產(chǎn)物外， 還有大量的細(xì)胞及碎片、 其他代謝物 （幾百上千種） 、培養(yǎng)基成分、 無機(jī)鹽等， 給過程設(shè)計(jì)造成困難；生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性低，易變質(zhì)、易失活、易變性，對溫度、pH值、重金屬離子、有機(jī)溶劑、剪切力、表面張力等非常敏感；發(fā)酵和培養(yǎng)很多是分批操作，生 物變異性大， 各批發(fā)酵液不盡相同， 要求所用加工設(shè)備有一定操作彈性； 對最終產(chǎn)品的質(zhì) 量要求高。2、結(jié)

11、晶的前提是過飽和溶液的形成。過飽和溶液的形成方法有：蒸發(fā)法；溫度誘導(dǎo)法；鹽析結(jié)晶法；透析結(jié)晶法；有機(jī)溶劑結(jié)晶法；等電點(diǎn)法；化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶法。3、價(jià)廉易得；與水相不互溶； 與水相有較大的密度差，并且黏度小，表面張力適中， 相分散和相分離較容易；容易回收和再利用；毒性低、腐蝕性小、閃點(diǎn)低、使用安全； 不與目標(biāo)產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)。4、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，色譜可分為紙色譜、柱色譜、薄層色譜。根據(jù)流動相的形 式分類，色譜可分為液相色譜、氣象色譜。根據(jù)分離原理的不同，色譜主要分為吸附色譜、 分配色譜、凝膠過濾色譜、離子交換色譜、親和色譜等五、綜合應(yīng)用題1、臨床上治療尿毒癥采用的膜分離方法透析。其原理是：透析

12、時(shí)，小于截留分子量（MWC）O的分子在透析膜兩邊溶液濃度差產(chǎn)生的擴(kuò)散壓作用下滲過透析膜， 高分子溶液中的小分子溶 質(zhì)（如無機(jī)鹽）透向水側(cè)，水則向高分子一側(cè)透過。2、（ 1）胚胎后期及初生時(shí)胸腺重量相對最大，隨年齡增長，胸腺逐漸退化，所以選用小 牛的胸腺作為原料。（2 ）胸腺肽對熱穩(wěn)定，在 80高溫不變性，但其他的雜蛋白會受熱變性，生成沉淀析出， 而胸腺肽在清液中，所以需要離心過濾，將胸腺肽與雜蛋白分離開。（3 ）胸腺肽由兩種肽組成，其分子量分別為9600 和 7000，截留分子量小于 10000 的超濾膜剛好可以讓胸腺肽透過，而分子量大于 10000 的雜蛋白被截留下來。浙江理工成教院期終考試

13、生化分離技術(shù)試卷B試卷教學(xué)站 年級 班級學(xué)號 姓名一、填空題(每空 1分，共 21 分)。1、發(fā)酵產(chǎn)物的初步純化方法有很多，常用的有法、吸附法、 法、 法、法、溶劑萃取法、雙水相萃取和超臨界流體萃取等。2、降低發(fā)酵液粘度的主要方法是和 。3、極性化合物易溶于的溶劑中，而非極性化合物易溶于 的溶劑中，這一規(guī)律稱為“ ”。4、在超速離心中，離心方法可分為、和。5、固相析出技術(shù)是通過加入某種試劑或改變?nèi)芤旱臈l件，使生化物質(zhì)以固體形式從溶液中 沉淀析出，若析出的是無定型物，則稱為 ，若析出的是晶體，則稱為 。6、凍干操作過程中，預(yù)凍的處理方法主要主要有和 。7、親和色譜的洗脫方法可分為洗脫和 洗脫。8

14、、凝膠粒度的大小對分離效果有直接影響。一般說來，細(xì)粒凝膠柱流速低，洗脫峰窄，分 辨率 ，多用于分離 等。粗粒凝膠柱流速快，洗脫峰寬，分辨 率 ，多用于分離 等。、判斷題(每題 1分，共 15 分)1、萃取是利用化合物在兩種互不相容的溶劑中溶解度或分配系數(shù)的不同，使化合物從一種 溶劑內(nèi)轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過反復(fù)多次的萃取，將絕大部分化合物提取出來的方法。( )2、在沉淀的過程中，溶液的 pH 值、溫度、離子濃度等因素對沉淀沒有影響。 ( ) 3、鹽析是指向蛋白質(zhì)溶液中加入某些濃的中性鹽后，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出，以達(dá)到分離、提純生物大分子的目的。4、提取細(xì)胞外的物質(zhì)，常常采用機(jī)械法破碎細(xì)胞

15、。5、丙酮的介電常數(shù)要低一些，相對而言沉析操作大于乙醇，所以在沉析時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選用丙 酮，在考慮乙醇。 ( )6、蛋白質(zhì)類物質(zhì)應(yīng)該在遠(yuǎn)離等電點(diǎn)的條件下進(jìn)行沉析操作。( )7、硫酸銨在堿性條件中也以應(yīng)用。( )8、在處理對溫度敏感的蛋白質(zhì)或者酶時(shí)，應(yīng)該在較低溫度下進(jìn)行操作，以保證物質(zhì)不會受 人而變性。 ( )9、氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽、酶、核酸等兩性物質(zhì)可以用等電點(diǎn)沉析。( )10、膜分離操作中， 所有溶質(zhì)均被透過液傳送到膜表面上，不能完全透過膜的溶質(zhì)受到膜的截留作用， 在膜表面附近濃度升高， 這種現(xiàn)象叫做濃差極化， 濃差極化無法通過任何手段來 減輕。 ( )11、平衡離子帶正電荷的離子交換劑可以與

16、帶正電荷的離子發(fā)生離子交換作用， 叫做陰離子 交換劑； 平衡離子帶負(fù)電荷的離子交換劑可以與帶負(fù)電荷的離子發(fā)生離子交換作用， 叫做陽 離子交換劑。 ( )12、親和色譜可以應(yīng)用于生物素和親和素、抗原與抗體、凝聚唐與糖蛋白的分離， 還能運(yùn)用于各種氨基酸的分離。 ( )13、干燥技術(shù)按熱量供給方式可分為傳導(dǎo)干燥、對流干燥、輻射干燥、介電加熱干燥。( )14、丙酮沉析作用小于乙醇。( )15、真空冷凍干燥的操作條件是高溫低壓，所以適合于干燥熱敏性物質(zhì)。( )三、選擇題( 18 為單選，每題 2分， 913為多選，每題 3分，共 31分)1、常用于生物大分子沉淀的有機(jī)溶劑，最為常用的是(A、乙醇B 、丙

17、酮 C 、異丙酮 D 、甲醇2、蛋白質(zhì)具有兩性性質(zhì)的主要原因是(A、蛋白質(zhì)分子有一個(gè)羧基和一個(gè)氨基B、蛋白質(zhì)分子有多個(gè)羧基和多個(gè)氨基)、蛋白質(zhì)分子有苯環(huán)和羥基、以上都對電點(diǎn)3、大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)都在()范圍內(nèi)A、酸性 B 、堿性 C 、中性D 、緩沖液)作為催化劑。4、聚丙烯酰胺凝膠可以通過化學(xué)聚合形成凝膠，化學(xué)聚合一般以A、硫酸銨（ AP）C、 N,N,N,N- 四甲基乙二胺（ TEMED）B、丙烯酰胺（ Acr）D 、雙丙烯酰胺（ Bis ）5、聚丙烯酰胺凝膠可以通過化學(xué)聚合形成凝膠，化學(xué)聚合一般以（）作為增速劑。A、硫酸銨（ AP）C、N,N,N,N- 四甲基乙二胺（ TEMED）B、

18、丙烯酰胺（ Acr）D 、雙丙烯酰胺（ Bis ）6、以游離態(tài)存在的氨基酸是（）A、蛋白氨基酸 B 、非蛋白氨基酸C 、脂肪族氨基酸D 、芳香族氨基酸7、可用于鑒別胱氨酸和半胱氨酸的試劑是（）A、對二甲氨基苯甲醛 B 、醋酸鉛C 、對氨基苯磺酸D 、米倫試劑8、萃取操作是利用原料液中（）的差異實(shí)現(xiàn)分離的操作。A、沸點(diǎn)B、在溶劑中的溶解度C 、揮發(fā)度 D 、密度9、市售的離子交換劑通常陽離子交換劑為（），陽離子交換劑為（ ）A、Na型B 、H型 C 、Cl 型 D 、 OH型10、柱色譜洗脫時(shí)的洗脫方式主要分為：（）A、簡單洗脫B、分步洗脫 C 、反洗脫 D 、梯度洗脫11、在親和色譜中，根據(jù)配

19、體對待分離物質(zhì)的親和性的不同， 將其分為兩類， 分別是（A、特異性配體、通用性配體B、抗原、抗體、激素受體12、鹽析常用的中性鹽有（A、硫酸銨B 、硫酸鎂氯化鈉D 、硫酸鈉四、簡答題（每題5 分，共 20 分）13、影響絮凝的因素很多，主要有（溶液的 pHA、絮凝劑的加入量B、操作溫度攪拌轉(zhuǎn)速和時(shí)間1、什么叫做等電點(diǎn)沉淀？等電點(diǎn)沉淀的操作條件是什么？適用于什么蛋白質(zhì)？2、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)流動相的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)分離原理的不同，色譜主要分為哪幾類？3、簡述在教材中給出的對物料中的水分的分類及關(guān)系。4、色譜技術(shù)管飯應(yīng)用于生物及化學(xué)物質(zhì)的使用中，其中柱

20、色譜的應(yīng)用最為廣泛，請簡述柱 色譜的基本操作步驟和注意事項(xiàng)。五、綜合應(yīng)用題（共 13 分）1、離子交換色譜是一種簡單而有效的去除水中雜質(zhì)及各種離子的方法，聚苯乙烯樹脂已廣泛用于高純水的制備、 硬水軟化及污水處理等方面。 寫出離子交換樹脂制備去離子水的過程。（ 3 分）2、以下是 DNA的提取分離，回答下面問題。（ 10 分）DNA 在氯化鈉中溶解度隨氯化鈉濃度的變化而變化，當(dāng)氯化鈉物質(zhì)的量濃度為 2mol/L 時(shí)，DNA的溶解度最大， 當(dāng)氯化鈉物質(zhì)的量濃度為 0.14mol/L 時(shí)，DNA的溶解度最小。 且 DNA 不溶于 95%的乙醇。1）為什么選用雞血作為原料？（ 2 分）2）加入檸檬酸鈉

21、的目的是什么？會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？（2 分）3）前后兩次加入了蒸餾水，其目的是什么？（3 分）4）前后兩次析出 DNA沉淀，原理是什么？（ 3 分）浙江理工成教院期終考試生化分離技術(shù)試卷B答案一、填空題（每空 1分，共 21 分）。1、沉淀、離子交換、超濾2、加水稀釋法、加熱法3、極性、非極性、相似相溶4、差速離心法、密度梯度離心法、等密度梯度離心法5、沉淀、結(jié)晶6、低溫快凍、低溫慢凍7、特異性、非特異性8、高、小分子量蛋白、低、中高分子量蛋白二、判斷題（每題 1分，共 15 分）1、 2 、× 3 、 4 、× 5 、× 6 、× 7 、× 8 、9、 10 、 11 、× 12 、 13 、 14 、× 15 、×三、選擇題（ 18 為單選，每題 2分， 913為多選，每題 3分，共 31分）1、A2、B3、A4 、A 5 、 C 6、 B7、B8、B9、A、C 10 、 ABD 11 、AC 12 、ABCD 13 、ABCD四、簡答題（每題 5分，共 20 分）。1、利用蛋白質(zhì)分子在等電點(diǎn)時(shí)，其溶解度最小的特性，向含有目的藥物成分的混合液中加 入酸或堿，調(diào)節(jié)其 pH，使蛋白質(zhì)沉淀