脫病毒植株檢測技術(shù)

1、脫病毒植株的檢測技術(shù)脫病毒植株的檢測技術(shù)一、直接觀察法（一、直接觀察法（非潛隱性病毒的鑒定非潛隱性病毒的鑒定） 概念：指示植物法就是利用病毒在其他植物上產(chǎn)生枯斑作為鑒別病毒種類的方法。 特點：條件簡單，操作方便，經(jīng)濟而有效，它只能鑒定靠汁液傳染的病毒，只能測出病毒的相對感染力。 (1)草本指示植物鑒定方法草本指示植物鑒定方法 1）汁液涂沫法）汁液涂沫法 2）小葉嫁接法）小葉嫁接法 (2)木本指示植物鑒定方法木本指示植物鑒定方法 1）直接在指示植物上嫁接待檢植株的芽片）直接在指示植物上嫁接待檢植株的芽片 2）雙重芽接法）雙重芽接法 3）雙重切接法）雙重切接法二、指示植物法二、指示植物法采取汁液在

2、被鑒定植物上取13g幼葉，在研缽中加入水及少量0.1mol/L磷酸緩沖液（PH7.0），研碎過濾，再在汁液中加入少量的金鋼砂（摩擦劑）。 接種用棉球蘸取汁液在指示植物葉面上輕輕涂沬23次，后用清水沖洗葉面。 培養(yǎng)在防蚜蟲溫室內(nèi)培養(yǎng)，1525 ，26天觀察病癥。 汁液涂抹法木本指示植物鑒定方法木本指示植物鑒定方法 木本多年生果樹及草莓等無性繁殖的草本植物，采用汁液接種法比較困難，則通常采用嫁接接種的方法。以指示植物作砧木，被鑒定植物作接穗，可采用劈接、靠接、芽接等方法嫁接，其中以劈接法為多。 三、抗血清鑒定法三、抗血清鑒定法 植物病毒作為抗原，給動物注射后會在血植物病毒作為抗原，給動物注射后會在

3、血清之中產(chǎn)生的抗體稱抗血清?？乖c抗體間能清之中產(chǎn)生的抗體稱抗血清。抗原與抗體間能發(fā)生高度專一性的血清學反應(yīng)（免疫反應(yīng)）。發(fā)生高度專一性的血清學反應(yīng)（免疫反應(yīng)）。這樣就可用已知抗血清可以鑒定未知病毒的種這樣就可用已知抗血清可以鑒定未知病毒的種類，是目前最有用的方法之一。類，是目前最有用的方法之一。 特點：特點：特異性高，測定速度快。特異性高，測定速度快。 方法：方法： 1）抗原的制備）抗原的制備 2）抗血清的采收，分離）抗血清的采收，分離 3）將抗血清與待測植物組織液混合。）將抗血清與待測植物組織液混合。 4）鑒定凝聚反應(yīng)。（酶聯(lián)免疫法最常用）鑒定凝聚反應(yīng)。（酶聯(lián)免疫法最常用）酶聯(lián)免疫鑒定法（

4、ELISA） 含義：酶聯(lián)免疫法是指采用酶標記抗原或抗體的定含義：酶聯(lián)免疫法是指采用酶標記抗原或抗體的定量測定法量測定法(過氧化物酶或堿性磷酸酶過氧化物酶或堿性磷酸酶) 。間接法、雙抗體夾心法、抗原競爭法間接法、雙抗體夾心法、抗原競爭法捕獲包被法捕獲包被法將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原加稀釋的受檢血清加酶標抗抗體加底物顯色間接法1.雙鏈RNA法 通過提取純純化待測植物RNA，并對其進行電泳分析，可確定雙鏈RNA存在，從而判斷待檢植物是否帶病毒。2.互補DNA（c DNA）檢測法 也叫DNA分子雜交法，核酸分子雜交（用放射性同位素（如32P）或生物素標記分子探針）。四、核酸檢測法四、核酸檢測法 借助于電子顯微鏡能分辨0.5m大小的病毒顆粒,采用電子顯微鏡既可以直接觀察病毒，檢查出有無病毒存在，病毒顆粒的大小、形狀和結(jié)構(gòu)，又可以鑒定病毒的