微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱

1、課程編號：微生物學(xué)試驗(yàn)教學(xué)大綱學(xué)時數(shù)： 108講課： 108學(xué)制：四年制本科適合專業(yè)：生物科學(xué)相關(guān)專業(yè)一、本課程的性質(zhì)和任務(wù)（一）課程的性質(zhì)：微生物學(xué)試驗(yàn)主要任務(wù)是使同學(xué)把握討論與應(yīng)用微生物的主要方法與技術(shù)， 包括經(jīng)典的、 常規(guī)的、以及現(xiàn)代的方法與技術(shù)，使同學(xué)具有適應(yīng)于從事相關(guān)學(xué)科的基礎(chǔ)理論討論與實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用的微生物學(xué)試驗(yàn)技能；提高同學(xué)分析問題和解決問題的才能； 依據(jù)本學(xué)科的特點(diǎn)， 逐步使同學(xué)熟識微生物的基本特性，比較它們與其它生物的相像和不同之處，知道如何討論微生物以及對討論中所顯現(xiàn)的問題 點(diǎn)樣分析，并加以解決；（二）課程的任務(wù)：微生物學(xué)試驗(yàn)是生物學(xué)重要的基礎(chǔ)課之一，要求同學(xué)熟識微生物學(xué)方法

2、與技術(shù)，把握無菌操作技能和建立無菌概念是微生物學(xué)試驗(yàn)中最重要的內(nèi)容，重點(diǎn)把握最基本的無菌操作技能，如接種、純培育、計(jì)數(shù)等；二、本課程與其他課程的聯(lián)系：1. 通過老師示范、講解與同學(xué)實(shí)際操作相結(jié)合方法，使同學(xué)堅(jiān)固樹立無菌概念，把握顯微鏡的使用、生物染色技術(shù)、外形學(xué)觀看的方法、微生物計(jì)數(shù)、培育基的配置和滅菌方法、微生物分別、純化等基本操作技能，基本明白常用的儀器設(shè)備的基本原理、構(gòu)造、使用方法及使用中的留意事項(xiàng)，樹立嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度，提高觀看、分析問題和解決問題的才能，培育勤儉節(jié)約、愛惜公物和相互協(xié)作的優(yōu)良作風(fēng)；2. 本試驗(yàn)課內(nèi)容包括驗(yàn)證性試驗(yàn)、綜合性試驗(yàn)兩個部分；驗(yàn)證性試驗(yàn)主要1通過光學(xué)顯微鏡鏡

3、檢觀看方法進(jìn)行教學(xué)，綜合試驗(yàn)在老師指導(dǎo)下同學(xué)依據(jù)所掌握的理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)技能，由同學(xué)自己動手完成；試驗(yàn)過程要求同學(xué)認(rèn)真觀看試驗(yàn)現(xiàn)象，完整記錄原始試驗(yàn)數(shù)據(jù)、結(jié)果，分析試驗(yàn)現(xiàn)象并認(rèn)真填寫試驗(yàn)報 告；三、教學(xué)內(nèi)容（一）試驗(yàn)一試驗(yàn)室安全訓(xùn)練與微生物學(xué)試驗(yàn)室常用的器皿目的要求把握試驗(yàn)室安全規(guī)章， 明白微生物學(xué)試驗(yàn)所用的器皿， 因其大多要進(jìn)行消毒、滅菌和用來培育微生物，因此明白其質(zhì)量、洗滌和包裝方法的要求；試驗(yàn)內(nèi)容一、器皿的種類、要求與應(yīng)用：1、試管大試管 約 18mm×180mm: 可裝倒平板用的培育基；可作制備斜面用；裝液體培育基用于微生物的振蕩培育中試管 13 15mm×100 1

4、50mm:裝液體培育基培育細(xì)菌或做斜面用；用于細(xì)菌、霉菌、病毒等的稀釋和血清學(xué)試驗(yàn)；小試管 10 12mm×100mm:一般用于糖發(fā)酵或血清學(xué)試驗(yàn)，和其它需要節(jié)約材料的試驗(yàn)；2、容量瓶主要用于精確配制肯定濃度的溶液，它是一種瘦長頸、梨形的平底玻璃瓶，配有磨口塞，瓶頸上刻有標(biāo)線；3、量筒用來量取液體體積的一種玻璃儀器，外壁上有刻度；常用量筒的規(guī)格有5ml、10ml、25ml、50ml、100ml、250ml 等；4、三角瓶用來裝無菌水、培育基和振蕩培育微生物等；5、燒杯呈圓柱形， 頂部的一側(cè)開有一個槽口，便于傾倒液體， 有些燒杯外壁標(biāo)有刻度，可以粗略地估量燒杯中液體的體積，這種燒杯叫印

5、標(biāo)燒杯，也叫刻度燒杯， 其分度并不非常精確，答應(yīng)誤差一般在±5%；26、燒瓶通常具有圓肚細(xì)頸的外觀， 因瓶口很窄，不適用玻璃棒攪拌， 如需要攪拌時，可以手握瓶口稍微轉(zhuǎn)動手腕即可順當(dāng)攪拌混勻；燒瓶隨其外觀的不同分為圓底燒瓶和平底燒瓶兩種， 通常平底燒瓶用在室溫下的反應(yīng)，而圓底燒瓶就用在較高溫的反應(yīng)，這是由于圓底燒瓶的玻璃厚薄較勻稱，可承擔(dān)較大的溫度變化；7、三角燒瓶（錐形瓶）錐形瓶瓶體較長，底大而口小，盛入溶液后，重心靠下，極便于手持振蕩， 故常用于容量分析中作滴定容器；也可以供加熱、煮沸、貯存、消毒各種液體用，常用容量有： 100ml、250ml、500ml、1000ml 等；8、燒

6、杯用來配制培育基與各種溶液等；9、離心管常用的有0.5ml 、1.5ml 、10ml、15ml、20ml 等規(guī)格，其上有刻度，專供離心機(jī)使用；主要用于微生物分子生物學(xué)試驗(yàn)中，小量菌體的離心，dna 或 rna的檢測和提取等；10、移液管和吸管均用于吸取和轉(zhuǎn)移少量液體；移液管上刻有標(biāo)線， 在標(biāo)明的溫度下， 當(dāng)吸取溶液至彎月面與標(biāo)線相切后，讓溶液自然放出， 此時所放出溶液的體積即等于管上所標(biāo)的體積；常用的移液管有1ml、2ml、5ml、1oml等；吸管常用的規(guī)格有兩種：一種為無刻度的毛細(xì)管；另一種為有刻度吸管，管壁有精細(xì)的刻度；一般長為 25cm，常用的容量為0.2ml、0.5ml、1ml、2ml

7、、5ml、1oml；11、染色缸有方形和圓形兩種，方形的較大，可放10 張載玻片，圓形的較小，可放5張載玻片，供細(xì)菌、血液及組織切片的標(biāo)本染色用；12、漏斗分短頸和長頸式兩種； 漏斗直徑大小不等， 有 60mm、100mm和 150mm等幾種不同規(guī)格，供分裝溶液或者上墊濾紙、紗布、棉花作過濾雜質(zhì)用；13、滴瓶有橡皮帽式和玻塞式， 分無色和棕色， 容量有 30ml和 60ml等，供儲存試劑或染色液用；14、下口瓶分為有龍頭和無龍頭兩種；容量有2500ml、5000ml兩種規(guī)格；供存放蒸餾 水或常用的消毒藥液用；15、培育皿3由一底一蓋組成一套，常用的培育皿皿底直徑90 mm，高 15mm皿,底皿

8、蓋均為玻璃制成；在培育皿內(nèi)倒入適量固體培育基制成平板，可用于分別、純化、鑒定菌種、活菌計(jì)數(shù)以及測定抗生素、噬菌體的效價等；16、載玻片及蓋玻片載玻片主要用于微生物涂片、染色，做外形觀看等；另有凹玻片，就是在一 塊厚玻片當(dāng)中有一圓形凹窩，做懸滴觀看活細(xì)菌及血清學(xué)試驗(yàn)用；蓋玻片為極薄的玻片，用于標(biāo)本封閉及懸滴標(biāo)本等；17、德漢氏小管觀看細(xì)菌在糖發(fā)酵培育基內(nèi)產(chǎn)氣情形時，一般在小試管內(nèi)再套一倒置的小套管（約 6mm×36mm），此小管即為德漢氏小管，又稱發(fā)酵小套管；18、雙層瓶由內(nèi)外兩個玻璃瓶組成， 內(nèi)層小錐形瓶放香柏油， 供油鏡觀看微生物時使用，外層瓶放二甲苯，用以擦凈油鏡頭；19、接種工

9、具接種工具有接種環(huán)，接種針，接種鉤，接種鏟，玻璃涂布器等；為細(xì)菌學(xué)檢 驗(yàn)工作中接種、 分別細(xì)菌或挑取菌落制作涂片所必不行少的工具；接種環(huán)常裝于鋁質(zhì)的握柄上，用壞后可隨時更換；二、玻璃器皿的洗滌方法1、新玻璃器皿的洗滌在 2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，用自來水沖洗潔凈；2、舊玻璃器皿的洗滌（1）試管、培育皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自來水沖洗；a 裝有固體培育基：刮掉，洗滌；b 帶菌的器皿：2%來蘇爾或 0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24 小時或煮沸0.5小時，然后洗滌；c 帶病原菌培育物的器皿：先高壓蒸汽滅菌，倒去培育物；（2）玻璃吸管：吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，反復(fù)沖洗；a 吸過

10、血液、 血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立刻投入盛有自來水的容器中浸泡，試驗(yàn)后集中沖洗；b 塞有棉花的吸管：用水將棉花沖出，然后沖洗；c 吸過含有微生物培育物的吸管：2%來蘇爾或 0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24 小時然后洗；d 吸管內(nèi)壁有油垢：洗滌液中浸泡數(shù)小時，再沖洗；洗凈后的試管倒置于試管筐內(nèi)，三角瓶倒置于洗滌架上， 培育皿的皿底和皿4蓋分開，依次壓著皿邊排列倒扣在桌上, 晾干；洗滌后，如內(nèi)壁的水勻稱分布成一薄層，表示完全洗凈，如仍掛有水珠，就需用洗滌液浸泡數(shù)小時，然后再用自來水沖洗；三、各種器皿的包扎1、培育皿的包扎：培育皿常用舊報紙緊緊包裹（也可用金屬筒包裝），一包 710 套

11、，包好后干熱或濕熱滅菌；2、吸管的包扎：在上端約 0.5cm 處，塞入一小段 1.5 cm長的棉花（勿用脫脂棉） ，目的是防止將外界或嘴中雜菌吹入管內(nèi)， 或不慎將菌液吸出管外； 然后用 45 cm寬的長紙條包扎；3、試管和三角瓶等的包扎：試管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅膠塞；用二層報紙包扎好（如有牛皮紙， 成效更好），進(jìn)行干熱或濕熱滅菌；試管較多時，一般7 個或 10 個一組，再用雙層報紙包扎；附：棉塞的制作：棉塞可過濾空氣， 防止雜菌侵入并可減緩培育基水份的蒸發(fā)，故在微生物工作中始終普遍使用著；做棉塞的要求：松緊適中，不能太松也不能太緊，太松達(dá)不到濾菌的目的， 并且易脫落，太緊通氣不好，操作不

12、便，做到手拿不掉，又易轉(zhuǎn)動；深淺適度， 棉塞總長 1.5 寸左右，約有1/3 在試管外， 2/3 在試管內(nèi)，順時針方向塞入；棉花要求采納一般棉花，它能防潮不易吸水，不要用脫脂藥棉，它易吸水又昂貴；（由老師示范）試驗(yàn)材料和用品以上全部器皿；（二）試驗(yàn)二環(huán)境微生物的檢查目的要求1、證明試驗(yàn)室環(huán)境與體表存在微生物；2、比較來自不同場所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類型；3、觀看不同類群微生物的菌落外形特點(diǎn)；4、體會無菌操作的重要性；試驗(yàn)原理平板培育基含有細(xì)菌生長所需要的養(yǎng)分成分，當(dāng)取自不同來源的樣品接種于5培育基上，在合宜溫度下培育，1-2d內(nèi)每一菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁衍， 形成一個可見的細(xì)胞

13、群體的集落，稱為菌落； 每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或潮濕、隆起或扁平、粗糙或光 滑，邊緣整齊或不整齊， 菌落透亮或半透亮或不透亮，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等；因此，可通過平板培育來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型；試驗(yàn)內(nèi)容1、環(huán)境微生物的檢測：倒平板、接種環(huán)境微生物；2、滅菌器皿的預(yù)備：學(xué)習(xí)包扎平皿、移液管；試驗(yàn)材料和用品1、材料：環(huán)境中各種微生物；2、用品：牛肉膏蛋白胨培育基、無菌平皿、移液管、平皿、酒精燈、牛皮紙、記號筆；（三）試驗(yàn)三顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法目的要求1、學(xué)習(xí)把握油鏡的規(guī)范使用方法；2、復(fù)習(xí)把握光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)及使用方法；試驗(yàn)原理油鏡工作

14、原理：1、增加照光明度；2、顯微鏡的辨論力：指顯微鏡能夠辨別兩點(diǎn)之間最小距離的才能；它與接物鏡的數(shù)值孔徑成正比，與光的波長成反比；辨論力 =（1/2 光波長度） / 數(shù)值孔徑試驗(yàn)內(nèi)容1、復(fù)習(xí)顯微鏡的使用方法；2、油鏡的使用原理、操作要點(diǎn)（包括清潔方法）；3、當(dāng)堂考核油鏡使用方法，合格方能通過；試驗(yàn)材料和用品同學(xué)顯微鏡、細(xì)菌三型裝片；雙層瓶 內(nèi)裝香柏油和乙醚酒精擦拭液 、擦鏡紙；（四）試驗(yàn)四細(xì)菌的簡潔染色與顯微觀看目的要求61、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，把握細(xì)菌的簡潔染色法；2、初步熟識細(xì)菌的個體外形、菌落外形特點(diǎn)；3、鞏固顯微鏡 油鏡 的使用方法和無菌操作技術(shù)；試驗(yàn)原理簡潔染色法是利用單

15、一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法；此法操作簡便， 適用于菌體一般外形和細(xì)菌排列的觀看；常用堿性染料進(jìn)行簡潔染色，這是由于：在中性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷 酸性染料電離時， 其分子的染色部分帶正電荷 ，因此堿性染料的染色部分很簡潔與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著色；染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別；常用作簡潔染色的染料有：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等；當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培育基ph 下降時，細(xì)菌所帶正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料染色；試驗(yàn)內(nèi)容1、微生物菌落外形的觀看： 幾種代表類型微生物菌落外形特點(diǎn)明白、

16、辨識；2、細(xì)菌簡潔染色及個體外形的觀看：無菌接種操作；涂片、干燥、固定、染色、水洗、干燥、鏡檢；試驗(yàn)材料和用品1、材料：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、環(huán)境微生物檢測平板；2、用品：同學(xué)顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶 內(nèi)裝香柏油和乙醚酒精擦拭液 、擦鏡紙；呂氏堿性美藍(lán)染液 或草酸銨結(jié)晶紫染液 ；（五）試驗(yàn)五革蘭氏染色目的要求1、學(xué)習(xí)并初步把握革蘭氏染色法；2、明白革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性；試驗(yàn)原理革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法，是1884 年由丹麥病理學(xué)家 christaingram氏創(chuàng)立的，而后一些學(xué)者在此基礎(chǔ)上作了某些改進(jìn)；該染色法 能將細(xì)菌分為g菌和 g

17、菌，是基于這兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分不同；g 菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性， 使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色；g菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少， 經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖7層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時的顏色；試驗(yàn)內(nèi)容1、革蘭氏染色法基本步驟：制片初染媒染脫色復(fù)染鏡檢；2、染色成敗緣由分析；3、試驗(yàn)操作考核一；試驗(yàn)材料和用品1、材料：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌；2、用品：同學(xué)顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶 內(nèi)裝香柏

18、油和乙醚酒精擦拭液 、擦鏡紙；革蘭氏染色液 結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95乙 醇、番紅液 ；（六）試驗(yàn)六細(xì)菌的芽孢染色法目的要求1、學(xué)習(xí)并把握芽孢染色法；2、觀看芽孢的外形特點(diǎn)：外形、大小及著生位置；試驗(yàn)原理芽孢染色法是利用芽孢和菌體對染色體的親合力的不同的原理，用不同的染色體進(jìn)行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)分；芽孢壁厚，透性低，著色、脫色均較困難，所以我們必需實(shí)行著色力強(qiáng)、濃度高的孔雀綠染液（5%）進(jìn) 行染色：染色過程中延長染色時間，10 分鐘（一般為23 分鐘）并且在加熱條件下進(jìn)行染色；進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染料就難以透出，如再利用復(fù)染液進(jìn)行復(fù)染， 此時菌體就被染

19、成紅色， 而芽孢難以著色， 仍呈綠色；試驗(yàn)內(nèi)容1、涂片：將培育24 小時枯草桿菌作涂片、干燥、固定；2 、染色：涂片上蓋上一張2.5 ×2cm濾紙片， 在上面滴加56 滴孔雀綠（不易過多，以鋪滿濾紙為宜） ，用鑷子加在載玻片在火焰上漸漸加熱，使燃料冒蒸汽（但不沸騰），切勿使燃料蒸干，隨時添加染色液，保持10 分鐘（從冒蒸汽時開頭計(jì)時）；3 、沖洗：取下冷卻，取掉濾紙，沖洗至孔雀綠不再退色為止；4 、復(fù)染：用番紅液復(fù)染12 分鐘，水洗，氣干；5 、鏡檢：待干燥后，置油鏡觀看，芽孢呈綠色，菌體呈紅色；試驗(yàn)材料和用品1、材料：枯草芽孢桿菌1-2d 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培育物、梭狀芽胞桿菌1

20、-2d 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培育物；82、用品： 5孔雀綠水溶液、 0.5%番紅水溶液、無菌水、香柏油、二甲苯；一般光學(xué)顯微鏡、 擦鏡紙、綢布、酒精燈、載玻片、接種針、培育皿、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯） 、試管夾等；（七）試驗(yàn)七細(xì)菌鞭毛染色及運(yùn)動性觀看目的要求1、學(xué)習(xí)并初步把握鞭毛染色法，觀看細(xì)菌鞭毛的外形特點(diǎn)；2、學(xué)習(xí)用壓滴法觀看細(xì)菌的運(yùn)動性；試驗(yàn)原理鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動“器官” ，細(xì)菌是否具有鞭毛，以及鞭毛著生的位置和數(shù)目是細(xì)菌的一項(xiàng)重要外形特點(diǎn)；細(xì)菌的鞭毛很纖細(xì)，其直徑通常為0.01 0.02微米，所以，除了很少數(shù)能形成鞭毛束 由很多根鞭毛構(gòu)成 的細(xì)菌可以用相差顯微鏡直接觀看到鞭毛束的存在

21、外，一般細(xì)菌的鞭毛均不能用光學(xué)顯微鏡直接觀看 到，而只能用電子顯微鏡觀看；要用一般光學(xué)顯微鏡觀看細(xì)菌的鞭毛，必需用鞭毛染色法；試驗(yàn)內(nèi)容1、硝酸銀染色法染色；2、壓滴法觀看細(xì)菌的運(yùn)動性；試驗(yàn)材料和用品1、材料：變形桿菌；2、用品：同學(xué)顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶 內(nèi)裝香柏油和乙醚酒精擦拭液 、擦鏡紙；鞭毛染色液 鞭毛染色液a、鞭毛染色液b；（八）試驗(yàn)八酵母菌的外形觀看及死活細(xì)胞的鑒別目的要求1、觀看酵母菌的外形及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的試驗(yàn)方法；2、把握酵母菌的一般外形特點(diǎn)及其與細(xì)菌的區(qū)分；試驗(yàn)原理酵母菌是不運(yùn)動的單細(xì)胞真核微生物，其大小通常比常見細(xì)菌大幾倍甚至十幾倍；美

22、藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，仍原型無色；用美藍(lán)對酵 母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時， 由于細(xì)胞的新陳代謝作用， 細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的仍原才能，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的仍原型，因此，具有仍原才能的酵母活細(xì)胞9是無色的、而死細(xì)胞或代謝作用柔弱的衰老細(xì)胞就呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，借此即可對酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞進(jìn)行鑒別；試驗(yàn)內(nèi)容酵母菌的外形觀看及死活細(xì)胞的鑒別；試驗(yàn)材料和用品1、材料：釀酒酵母 saccharomyces cerevisiae；2、用品：同學(xué)顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)；0.05 和 o.1呂氏堿性美藍(lán)染色液；（九）試驗(yàn)九霉菌的外形觀看目的要求1、學(xué)習(xí)并把握觀看霉菌外形的基本方法；2

23、、初步明白霉菌的外形特點(diǎn)；試驗(yàn)原理霉菌的外形結(jié)構(gòu)觀看： 霉菌可產(chǎn)生復(fù)雜分枝的菌絲體，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到肯定階段分化產(chǎn)生繁衍菌絲，由繁衍菌絲產(chǎn)生孢子；霉菌菌絲體 特殊是繁衍菌絲 及孢子的外形特點(diǎn)是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)；霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多 約為 310 微米 ，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀看；試驗(yàn)內(nèi)容霉菌的觀看（試管直接觀看法） ；試驗(yàn)材料和用品1、材料：細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌、黑曲霉、根霉；2、用品：同學(xué)顯微鏡、體視鏡、酒精燈、載玻片、鑷子等；（十）試驗(yàn)十培育基的配制與滅菌目的要求1、明白培育基的配制原理；2、通過對

24、基礎(chǔ)培育基的配制，把握配制培育基的一般方法和步驟；3、明白常見滅菌、清毒基本原理及方法；把握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法；試驗(yàn)原理培育基是人工按肯定比例配制的供微生物生長繁衍和合成代謝產(chǎn)物所需要10的養(yǎng)分物質(zhì)的混合物；培育基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因素和水；依據(jù)微生物的種類和試驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培育基也有不同的種類和配制方法；牛肉膏蛋白胨培育基是一種應(yīng)用最廣泛和最一般的細(xì)菌基礎(chǔ)培育基，有時又稱為一般培育基；由于這種培育基中含有一般細(xì)胞生長繁衍所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長繁衍之用；基礎(chǔ)培育基含有牛肉膏， 蛋白胨和 nacl；其中牛肉膏為微生物供應(yīng)碳源、能源、

25、磷酸鹽和維生素， 蛋白胨主要供應(yīng)氮源和 維生素，而nacl 供應(yīng)無機(jī)鹽；由于這種培育基多用于培育細(xì)菌，因此要用稀酸或稀堿將其ph 調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長繁衍；干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微 生物的成效；干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌 的目的；細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時， 當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，就蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢；高壓 蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱， 使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽；從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100的溫度；導(dǎo)致菌體蛋

26、白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的；試驗(yàn)內(nèi)容1、配制牛肉膏蛋白胨等培育基；2、高壓蒸汽滅菌方法滅菌；試驗(yàn)材料和用品1、試劑：牛肉膏、蛋白胨、nacl、瓊脂粉；2、用品：試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培育基、分裝器、天平、牛角匙、ph 度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、移液管、高壓蒸汽滅菌鍋等；（十一）試驗(yàn)十一微生物的分別與純化目的要求把握倒平板的方法和幾種常用的分別純化微生物的基本操作技術(shù)；試驗(yàn)原理從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分別與純化； 微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種， 必需從中進(jìn)行分別；在保藏菌種時不慎污染時也需予以分別；分別純化

27、方法很多， 基本原理相像， 即將待分別樣品進(jìn)行肯定的稀釋，并使微生物的細(xì)胞（或孢子）盡量以分散狀態(tài)存在， 然后使其長成一個個純種單菌落；分別純化常用的方法有：111、簡易單細(xì)胞挑取法它需要特制的顯微操縱器或其他顯微技術(shù)，因而其使用受到限制；2、平板分別法：挑選適合于待分別微生物的生長條件， 如養(yǎng)分成分、 酸堿度、溫度和氧等要求, 或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長， 而抑制其他微生物生長的環(huán)境， 從而剔除一些不需要的微生物微生物在固體培育基上生長形成的單個菌落， 通常是由一個細(xì)胞繁衍而成的集合體；因此可通過挑取單菌落而獲得一種純培育； 獵取單個菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等技術(shù)完

28、成；試驗(yàn)內(nèi)容1、土樣樣品的采集；2、倒平板；3、平板涂布法；4、制備土壤稀釋液；5、稀釋傾注法；試驗(yàn)材料和用品1、材料：校內(nèi)土、牛肉膏蛋白胨培育基（12ml）；2、用品：無菌培育皿、無菌刮鏟、1ml 無菌吸管、盛 9ml 無菌水試管6 支、盛 90ml 無菌水三角瓶一個、酒精燈等；（十二）試驗(yàn)十二微生物的培育特點(diǎn)目的要求1、明白不同的微生物在瓊脂平板、斜面上、和液體培育基中的生長特點(diǎn)；2、懂得微生物接種技術(shù)的重要性與應(yīng)用面；3、能描述微生物在瓊脂平板、斜面上、和液體培育基中的培育特點(diǎn)；試驗(yàn)原理微生物的培育特點(diǎn)是指微生物在固體、半固體和液體培育基中生長后所表現(xiàn)出的群體外形特點(diǎn)；不同的微生物有其固

29、有的培育特點(diǎn)，這些特點(diǎn)一般用固體、 半固體和液體培育基來進(jìn)行檢測；試驗(yàn)內(nèi)容1、斜面接種；2、穿刺接種；3、液體培育基接種；4、培育；125、細(xì)菌在固體斜面培育特點(diǎn)的觀看與描述；6、細(xì)菌在半固體培育基培育特點(diǎn)的觀看與描述；7、細(xì)菌在液體培育基中培育特點(diǎn)的觀看與描述；試驗(yàn)材料和用品1、材料：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌；2、用品：牛肉膏蛋白胨培育基、接種環(huán)、接種針、無菌吸管、酒精燈等；（十三）試驗(yàn)十三菌種保藏目的要求學(xué)習(xí)并把握菌種保藏的基本原理，比較幾種不同的保藏方法；試驗(yàn)原理微生物具有簡潔變異的特性，因此， 在保藏過程中， 必需使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在肯定的時間內(nèi)使其不發(fā)生

30、變異而又保持生活才能；低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝才能降低的重要因素，所以， 菌種保藏方法雖多，但都是依據(jù)這三個因素而設(shè)計(jì)的；1、傳代培育保藏法又有斜面培育、穿刺培育、皰肉培育基培育等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培育后于 46冰箱內(nèi)儲存；2、液體石蠟掩蓋保藏法是傳代培育的變相方法， 能夠適當(dāng)延長保藏時間， 它是在斜面培育物和穿刺培育物上面掩蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培育基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻擋氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用；3、冷凍保藏法可分低溫冰箱（ -20 -30 ， -50 -80 ）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70 ）和液氮（ -196 ）等保藏法；4、冷凍干燥保藏法先

31、使微生物在極低溫度（-70 左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥） ；有些方法如濾紙保藏法、 液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用愛護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液， 以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害；愛護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)固細(xì)胞成分的構(gòu)型；愛護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等；試驗(yàn)內(nèi)容131、斜面低溫保藏法；2、液體石蠟保藏法；3、液氮冷凍保藏法；4、冷凍干燥保藏法；試驗(yàn)材料和用品1、材料：大腸桿菌、酵母菌，放線菌和霉菌；2、用品：肉膏蛋白胨斜面培育基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷， 河沙，瘦黃土或紅土， 冰塊

32、、食鹽，干冰，95酒精， 10鹽酸，無水氯化鈣；滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培育皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底） ，40 目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5 ×1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，l 形五通管 , 冰箱，低溫冰箱（ -30 ），液氮冷凍保藏器；（十四）試驗(yàn)十四微生物數(shù)量的測定目的要求1、學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法；2、明白光電比濁計(jì)數(shù)法的原理，學(xué)習(xí)、把握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法；3、明白血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理，把握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法；試驗(yàn)原理平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細(xì)胞， 取肯

33、定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培育， 由每個單細(xì)胞生長繁衍而形成肉眼可見的菌落； 為了清晰地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位 colony -formingunits ，cfu 而不以肯定菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量；當(dāng)光線通過微生物菌懸液時， 由于菌體的散射及吸取作用使光線的透過量降低；在肯定的范疇內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光 密度或透光度可以由光電池精確測出；因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度， 作出光密度 - 菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線； 因此， 對于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計(jì)數(shù)應(yīng)采納相同的菌株和培育條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待

34、測樣品的懸浮液置于一種特殊的具有確定面積和容積的載玻片上 又稱計(jì)菌器 ，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法；試驗(yàn)內(nèi)容141、平板計(jì)數(shù)法；2、光電計(jì)數(shù)法；3、直接計(jì)數(shù)法 顯微鏡 ；4、試驗(yàn)操作考核二；試驗(yàn)材料和用品1、材料：大腸桿菌；2、用品：同學(xué)顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、分光光度計(jì)、蓋玻片、無菌毛細(xì)滴管、無菌平皿、無菌試管、無菌移液管、酒精燈、涂棒、鑷子、記號筆等；牛肉膏蛋白胨培育基、無菌生理鹽水；（十五）試驗(yàn)十五理化因素對微生物的影響目的要求1、明白常用化學(xué)消毒劑對微生物的作用；2、明白紫外線對微生物的作用；試驗(yàn)原理常用化學(xué)消毒劑主要有重金屬及其鹽類、酚、醇、醛等有機(jī)溶劑、鹵

35、族元素 及其化合物、 染料和表面活性劑等； 重金屬離子可與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合而使之變性或與某些酶蛋白的巰基相結(jié)合而使酶失活；有機(jī)溶劑可使蛋白質(zhì)及核酸變性，也可破壞細(xì)胞膜透性使內(nèi)含物外溢；碘可與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不行逆結(jié)合而使蛋白 質(zhì)失活，氯氣與水發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生的強(qiáng)氧化劑也具有殺菌作用；染料在低濃度條件下可抑制細(xì)菌生長；紫外線滅菌是用紫外線燈進(jìn)行的；波長為200-300nm 的紫外線都有殺菌才能，其中以 260nm的殺菌力最強(qiáng)； 在波長肯定的條件下，紫外線的殺菌效率與強(qiáng)度和時間的乘積成正比； 紫外線殺菌機(jī)制主要是由于它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和 dna鏈的交聯(lián)， 從而抑制了dna的復(fù)制；另一方面， 由于輻射能使空氣中的氧電離成 o，再使o2 氧化生成自臭氧 o3 或使水 h2o氧化生成過氧化氫h2o2；o3和 h2o2均有殺菌作用；試驗(yàn)內(nèi)容1、化學(xué)因素對微生物的影響；2、物理因素對微生物的影響；試驗(yàn)材料和用品1、材料：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌；2、用品：酒精燈、接種環(huán)、記