實(shí)驗(yàn)十四--血清膽固醇測(cè)定(膽固醇氧化酶法)(1)3頁(yè)

1、實(shí)驗(yàn)十四 血清膽固醇測(cè)定（膽固醇氧化酶法）膽固醇地測(cè)定方法很多；通?？煞譃榛瘜W(xué)試劑比色法、酶法、氣相色譜法、高效液相色譜法、核素稀釋質(zhì)譜法五大類.化學(xué)試劑比色法中有直接法和間接法；前者可用血清直接測(cè)定，后者是用溶劑或其它方法提取膽固醇后再作定量.酶法由于操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，試劑無(wú)腐蝕性，而且因使用特異性酶，大大減少了血液中其它成分地干擾，目前已成為測(cè)定膽固醇地主要方法.b5E2R?！灸康亍苛私饽懝檀佳趸阜y(cè)定血清膽固醇地原理，能進(jìn)行血清膽固醇測(cè)定地操作.掌握血清膽固醇測(cè)定地臨床意義.【原理】血清中總膽固醇（）包括膽固醇酯()和游離型膽固醇(),酯型占，游離型占.膽固醇酯酶（）先將膽固醇酯水解

2、為膽固醇和游離脂肪酸（），膽固醇在膽固醇氧化酶（）地作用下氧化生成膽甾烯酮和過氧化氫.后者經(jīng)過氧化物酶（）催化氫與氨基安替比林（）和酚反應(yīng)，生成紅色地醌亞胺，其顏色深淺與膽固醇地含量呈正比，在波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)管比較可計(jì)算出血清膽固醇地含量.反應(yīng)式如下：p1Ean。【器材】試管、吸管、試管架、微量加樣器、恒溫水浴箱、分光光度計(jì).【試劑】酶法測(cè)定膽固醇多采用市售試劑盒. 酶應(yīng)用液 膽固醇酶試劑地組成為：磷酸鹽緩沖液 膽固醇酯酶 膽固醇氧化酶過氧化物酶 氨基安替比林 苯酚 此外還含有膽酸鈉和 ，膽酸鈉是膽固醇酯酶地激活劑，表面活性劑 能促進(jìn)脂蛋白釋放膽固醇和膽固醇酯，有利于膽固醇酯地水解.D

3、XDiT。 （ ）膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液 精確稱取膽固醇 溶于無(wú)水乙醇，移入容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度(也可用異丙醇等配制).【操作】取試管支，編號(hào)，按下操作.表 酶法測(cè)定血清膽固醇操作步驟加入物（）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液蒸餾水酶應(yīng)用液混勻后，水浴保溫分鐘，在波長(zhǎng)處比色，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度.【計(jì)算】【注意事項(xiàng)】. 黃疸血清過高地膽紅素可還原部分反應(yīng)中地，降低顯色反應(yīng)，使結(jié)果偏低.但測(cè)定膽固醇，膽紅素對(duì)酶法地干擾比化學(xué)法小.RTCrp。. 用膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液引起地誤差較大，故目前提倡采用膽固醇定值血清為標(biāo)準(zhǔn). 輕度溶血對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響，但明顯溶血可使結(jié)果增高，此時(shí)可用一個(gè)不加地空白管從結(jié)果中減去后糾正. 其它影響因素，如維生素、谷胱甘肽、氟化物引起負(fù)偏差.【正常參考范圍】【臨床意義】.血清膽固醇增高 常見于動(dòng)脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥、糖尿病、腎病綜合征、膽管阻塞、甲狀腺功能減退.5PCzV。.血清膽固醇降低 常見嚴(yán)重貧血、甲狀腺功能亢進(jìn)、長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良等.【結(jié)果及分析】【思考題】膽固醇有哪些重要地生理功能，血清膽