基因工程試題A()

1、基因工程試題A()作者:日期:基因工程試題A一、名詞解釋(每題2分，共20分)1、轉(zhuǎn)染：2、質(zhì)粒不親和性:3、cDNA文庫：4、RACE:5 基因工程:6、RT-PCR7、插入失活:8、SD序列:9、穿梭質(zhì)粒載體:10、多克隆位點：二、選擇題(每題1分，共15分)1()基因工程操作的三大基本元件是：(1供體II受體III 載體IV抗體V 配體)A I + II + IIIB I + III + IVC II + III + IVD II + IV + VE III + IV + V2 ()基因工程的單元操作順序是A增，轉(zhuǎn)，檢，切，接B切，接，轉(zhuǎn)，增，檢C接，轉(zhuǎn)，增，檢，切D檢，切，接，增，轉(zhuǎn)E

2、切，接，增，轉(zhuǎn)，檢3 () 生物工程的上游技術是A基因工程及分離工程B基因工程及發(fā)酵工程C基因工程及酶工程D基因工程及細胞工程E基因工程及蛋白質(zhì)工程4() 下列對逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確的是：A依賴于RNA勺DNA聚合酶或稱為RNA旨導的DNA聚合酶B依賴于cDNA的DNA聚合酶或稱為cDNA旨導的DNA聚合酶C依賴于DNA勺DNA聚合酶或稱為DNA旨導的DNA聚合酶D依賴于RNA勺RNA聚合酶或稱為rNA指導的RNA聚合酶5()下列對限制性內(nèi)切酶描述正確的是A限制性內(nèi)切酶可識別任一的 DNA序列B使用限制性內(nèi)切酶時，有時可出現(xiàn)星活性C限制性內(nèi)切酶可識別堿基數(shù)不超過 5個D限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生

3、都是黏性末端6 ( )T4 -DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA片段連接在一起，其 底物的關鍵基團是A 2' -OH和 5' -PB 2' -OH和 3' -PC 3' -OH和 2' -PD 3' -OH和 5' -PE 5' -OH 和 3' -P7 ()下列有關連接反應的敘述，錯誤的是A連接反應的最佳溫度為12 16CB連接反應緩沖體系的甘油濃度應低于 10%C連接反應緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD連接酶通常應過量2-5倍E DTT在反應中可加也可不加8 ()下列哪種克隆載體對外源 DNA的

4、容載量最大？A質(zhì)粒B黏粒C酵母人工染色體(YAC)D入噬菌體9 ()載體的功能是(I運送外源基因高效進入受體細胞II為外源基因提供 復制能力III為外源基因提供整合能力)A IB I + IIC I + IIID II + IIIE I + II + III10() 考斯質(zhì)粒(cosmid)是一種A天然質(zhì)粒載體B由入-DNA的cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C能裂解受體細胞的烈性載體D具有溶原性質(zhì)的載體E能在受體細胞內(nèi)復制并包裝的載體11() 下列有關基因的描述，錯誤的是A蛋白質(zhì)是基因表達唯一的產(chǎn)物B基因是DNA鏈上具有編碼功能的片段C基因也可以是RNAD基因突變不一定導致其表達產(chǎn)物改變結(jié)構12

5、 ()關于cDNA的最正確的提法是：A 同mRN互補的單鏈 DNAB 同mRN互補的雙鏈 DNAC以mRN為模板合成的雙鏈DNA D 以上都正確13()某一重組DNA ( 6.2 kb )的載體部分有兩個SmaI酶切位點。用SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子， 其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重 組分子插入片段上的SmaI酶切位點共有個個個個5 4 3 2A B c D14 ()同一種質(zhì)粒DNA以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：A OC DNA>SC DNP>LDNA B SC DNA>L DNA>OC DNAC L DNA>OC DNA&

6、gt;SC DNA D SC DNA>OC DNA>L DNA15 （） cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點是A成功率高B不含內(nèi)含子C操作簡便D表達產(chǎn)物可以分泌E能糾正密碼子的偏愛性三、簡答題（每題5分，共25分）1、什么是包涵體？2、PCF反應體系包括哪些內(nèi)容？基本反應過程是什么？3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？5、基因工程誕生的理論基礎是什么？四、論述題（每題10分，共40分）1簡述載體構建的一般過程2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？3如何有效地提高外源基因的表達效率？ 4試述3' RACES術原理和方法基

7、因工程試題標準答案及評分標準A一、選擇題（每題 1分，共15分）I、A 2、 A3、 A 4、 A 5、B 6、D 7、E 8、C 9、 E 10、BII、A 12、 C 13、D 14、B 15、 B二、名詞解釋（每題 2分，共20分）1、轉(zhuǎn)染：專指感受態(tài)的大腸桿菌細胞捕獲和表達噬菌體 DNA分子的生命過程。2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細胞系中穩(wěn) 定地共存的現(xiàn)象。3、 cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的 克隆的集合。4、 RACE :是一種通過 PCR進行cDNA末端快速克隆的技術，是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)

8、錄 成cDNA第一鏈后用PCR技術擴增出某個特異位點到 3,或5，端之間未知序列的方法。5、 基因工程：在分子水平上的進行的遺傳操作，指將一種或多種微生物的基因或基因組提取 出來，或人工合成基因，按著人們的愿望，進行嚴密的設計，經(jīng)過體外加工重組，轉(zhuǎn)移到另 一種生物體的細胞內(nèi)，使之能在受體細胞遺傳并獲得新的遺傳性狀的技術。6、 RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRNA ,以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知 一對引物，擴增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、I nsert in actio n:即插入失活，基因工程載體上的某些選擇標記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點

9、，在該位點用相應的限制性內(nèi)切酶處理，并將外源DNA片段插入該位點，則插入的外源 DNA片段將破壞原有基因的讀碼框，往往導致原有的選擇標記基因無法翻譯表達，或即使翻譯表達，形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì)，這一現(xiàn)象稱為插入失活。8、 S-D序列：在大腸桿菌 mRNA的核糖體結(jié)合位點上，含有一個轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA 3，末端堿基互補的序列，該序列最初由Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為ShineDalgarno 序列，簡稱 S-D 序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構建的具有兩種不同復制起點的選擇標記，因而可在兩種 不同宿主細胞中存活和復制的質(zhì)粒載體。10、 MC

10、S :指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點的DNA片 段。三、簡答題（共25分，每題5分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達時， 常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達時的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、PCR反應體系包括哪些內(nèi)容？基本反應過程是什么？PCR反應體系所要求的條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物（約20個堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如： TagDNA聚合酶。c、dNTP。d、作為模 板的目的DNA序

11、列，E無菌水，F(xiàn)，緩沖液PCR反應體系的基本反應過程：預變性、變性、退火、延伸、復延伸。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA樣品的純度。DNA的甲基化程度。酶切反應的溫度與時間。DNA分子的構型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應緩沖液。4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？ 能在宿主細胞內(nèi)進行獨立和穩(wěn)定的自我復制 具有合適的限制內(nèi)切酶位點 具有合適的選擇標記基因5、基因工程誕生的理論基礎是什么？是現(xiàn)代分子生物學領域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)： 證實了 DNA是遺傳物質(zhì) 揭示了 DNA分子的雙螺旋結(jié)構模型和半保留復制機理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞

12、方式的確定技術上的三大發(fā)明： 限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA切割 DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應用四、問答題（每題 10分，共40分）1簡述載體構建的一般過程A目的基因分析（1） ORF分析（2）酶切位點分析B載體選擇與分析（1）多克隆位點分析（2）抗性標記分析（3）啟動子與其他篩選標記分析C連接體系與連接時間確定2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？優(yōu)點：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎生物學、分子遺傳學等方面的背 景知識清楚，對其基因表達調(diào)控的分子機理也比較了解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實踐， 大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系

13、，有多種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點：在通常情況下，細菌的RNA聚合酶不能識別真核的啟動子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝， 而細菌中通常并沒有這樣的修飾機制，從而可能導致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細菌的蛋白酶識別，并被當做“異已分子”降解掉。3如何有效地提高外源基因的表達效率？提高啟動子強度縮短啟動子同克隆基因間距離高效的翻譯起始序列高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性用以下方法提高翻譯水平：調(diào)整 SD序列與AUG間的距離用點突變的方法改變某些堿基增加mRNA的穩(wěn)定性的 減輕細胞的代謝負荷：誘導表達表達載體的誘導復制提高表達蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達融合蛋白采用某種突變菌株表達分泌蛋白質(zhì)4試述3' RACE技術原理和方法PCR用于擴增代表 mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點與其 3'或5'末端之間區(qū)域的部分 cDNA稱 為快速擴增cDNA末端技術。如果已敿目的 mRNA的一片段鏈內(nèi)短序列，據(jù)此或設計基因 特異引物，用原先存在的poly（A）尾（3 '末端）或附加的同聚尾（5'末端）互補的序列做