陽與湯加減調(diào)節(jié)強(qiáng)直性脊柱炎T細(xì)胞功能和骨代謝指標(biāo)探析

1、陽與湯加減調(diào)節(jié)強(qiáng)直性脊柱炎t細(xì)胞功能和骨代謝指標(biāo)探析【摘要】目的：觀察陽和湯加減的調(diào)節(jié)免疫、抑 制關(guān)節(jié)炎癥及骨質(zhì)破壞的作用，初步從細(xì)胞、分子水平分析 其部分作用機(jī)制。方法：采用蛋白聚糖+弗氏佐劑+寒濕因素 病證結(jié)合的方法制造as腎虛寒濕型動(dòng)物模型。采用免疫組 織化學(xué)技術(shù)sp法檢測腫瘤壞死因子-a、基質(zhì)金屬蛋白酶-9 以及rankl、轉(zhuǎn)化生長因子-b在骨組織中的表達(dá)情況。結(jié)果：復(fù)方組、桂枝組、麻黃組、鹿角片組與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p(10 g) -1；模型組予0.2ml (10 g) -1生理鹽水灌;復(fù)方組予中藥陽和湯加減,按小鼠成人系數(shù)9.019折算劑量(約0.5 mg - kg-1

2、),每日 0. 2 ml (10 g) -lo各組用藥均28 d,于第29天取材。2.4觀察及取材觀察實(shí)驗(yàn)小鼠一般狀況、飲食、體質(zhì) 量、精神狀況、毛色。均于灌胃43 d后，眼眶后靜脈叢取 血并分離血清后，置-70 £冰箱保存，行軟骨組織脫鈣。脫 鈣后、常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。取脊柱、關(guān)節(jié) 行病理組織學(xué)切片，行免疫組化法。鼠抗單克隆抗體、基質(zhì) 金屬蛋白酶-9 (mmp-9)、轉(zhuǎn)化生長因子-b (tgf-b)、腫瘤 壞死因子-a (tnf-a)、rankl免疫組化試劑(武漢博士得 生物有限公司），取脊柱、關(guān)節(jié)10%甲醛固定，包埋。2. 5 ihc法檢測蛋白表達(dá)結(jié)果判斷光學(xué)顯微鏡

3、一側(cè)目鏡 安裝細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)格，觀察免疫組化陽性細(xì)胞的蛋白表達(dá)情況 及分布情況。細(xì)胞呈淺棕色為陽性表達(dá)。2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用spss 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 組間光密度及計(jì)數(shù)的比較采用單因素方差分析，以p 0. 05）o鹿角片組與陰性組比較，陰性組與模型組比較，麻 黃組、復(fù)方組、桂枝組與陰性組比較，復(fù)方組、桂枝組與模 型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0. 05）o麻黃組、鹿角 片組、桂枝組、復(fù)方組與陰性組比較，陰性組與模型組比較, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0.05）。麻黃組、鹿角片組、桂枝 組、復(fù)方組與陰性組比較，陰性組與模型組比較，差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0.05）。麻黃組與陰性組、模型

4、組比較，復(fù) 方組與陰性組、模型組比較，鹿角片組與陰性組、模型組比 較，桂枝組與陰性組、模型組比較，陰性組與模型組比較， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 0. 05）o復(fù)方組與鹿角片組、麻黃組、模型組比較，鹿角片組、 麻黃組與陰性組比較，陰性組與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義（p 0.05）。鹿角片組與陰性組、模型組比較，麻黃 組與陰性組、模型組比較，桂枝組與陰性組、模型組比較， 復(fù)方組與陰性組、模型組，陰性組與模型組比較，差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p陽和湯首載于清代王洪緒的外科全 生集，本意用于治療陰疽之陰寒證及鶴膝風(fēng)，其病機(jī)是由 于營血本虛，寒凝痰滯，痹阻于肌肉、筋骨、血脈、關(guān)節(jié)而 成疽。此與as腎虛

5、寒濕證的病因病機(jī)十分相似。脊柱位置 處在半表半里，as病在脊柱，故病邪也盤踞在半表半里，治 療如僅用清除里邪之法則可引邪深入，獨(dú)透表又里邪難除。故宜內(nèi)清外透結(jié)合，在清里基礎(chǔ)上外透，讓邪有出路，從而 達(dá)到清除盤踞在半表半里之邪實(shí)。汪悅教授根據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)， 結(jié)合臨床實(shí)際情況，對(duì)陽和湯進(jìn)行加減，去白芥子，加用細(xì) 辛、獨(dú)活、桑寄生、娛蚣、桃仁等，以加強(qiáng)溫腎散寒、通絡(luò) 止痛之功效，與臨床所遇患者證型更為貼合?，F(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究 表明4,陽和湯能顯著地抑制醋酸引起的小鼠的扭體反應(yīng), 延長痛覺反應(yīng)時(shí)間，并對(duì)二甲苯所致鼠耳腫脹有明顯抑制作 用，說明該方有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用?，F(xiàn)代藥理研究顯示5,麻黃的化學(xué)成分有化學(xué)堿

6、（主要為麻黃堿）、揮發(fā)油、 黃酮類、多糖類、軟質(zhì)及有機(jī)酸、氨基酸和礦質(zhì)元素類等， 對(duì)細(xì)胞免疫有抑制作用。陳榮明等6從草麻黃中的不同分 離成分中篩選出具有免疫抑制作用的有效部位發(fā)現(xiàn)，將草麻 黃用70%乙醇提取后的濾過物用水提濃縮得到的沉淀物，能 減輕二硝基氯苯所致的小鼠耳廓腫脹，使胸腺萎縮，調(diào)整二 硝基氯苯所致的血液中t淋巴細(xì)胞亞群cd4/cd8的失調(diào)，證 明其對(duì)小鼠的細(xì)胞免疫具有抑制作用。saito sy等7發(fā)現(xiàn)麻黃附子細(xì)辛湯中麻黃可以抑制ige的間接組胺釋放和增加 大鼠嗜堿細(xì)胞性白血病細(xì)胞的環(huán)磷酸腺昔(camp)的含量， 而該方中附子、細(xì)辛無此作用，并認(rèn)為麻黃的該抑制作用主 要是由有別于麻黃

7、堿、甲基麻黃堿和右旋麻黃堿的其他物質(zhì) 所引起的。kobayashi k等8篩選了可以抑制小鼠血漿中淀 粉酶活性的天然藥物，發(fā)現(xiàn)麻黃等9種藥物熱水提物、醇提 物可以抑制小鼠離體血漿淀粉酶的活性，但有強(qiáng)烈劑量依賴 性，且腹腔注射和口服均有效。本研究通過蛋白聚糖免疫balb/c小鼠造模和研究證明, 陽和湯加減具有調(diào)節(jié)免疫、抑制關(guān)節(jié)炎癥及骨質(zhì)破壞作用， 闡明陽和湯加減對(duì)細(xì)胞、分子水平的部分抑制作用。as目前尚無肯定的動(dòng)物模型，本文旨在從發(fā)病機(jī)理上探 討了方藥的作用機(jī)理。as屬于系統(tǒng)性自身免疫病，免疫系統(tǒng) 的紊亂是其發(fā)病的主要機(jī)制，進(jìn)而造成多關(guān)節(jié)炎及脊柱的僵 硬和破壞。其體液免疫功能亢進(jìn)目前已趨于認(rèn)同，

8、細(xì)胞免疫 的探討不多且報(bào)道不一。本課題的臨床部分提示，as存在細(xì) 胞免疫功能低下的情況。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，陽和湯可抑制 抗體形成細(xì)胞產(chǎn)生和分泌抗體的功能，降低血清抗體水平， 抑制亢進(jìn)的體液免疫；可改善免疫亢進(jìn)及抑制實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膖 細(xì)胞亞群，說明其可針對(duì)不同的免疫狀態(tài)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作 用，這可能是其良好療效的主要內(nèi)在基礎(chǔ)。鎮(zhèn)痛作用明顯、 持久，呈量效相關(guān)；對(duì)急性、慢性炎癥，滲出性、結(jié)締組 織增生性炎癥均有較強(qiáng)的抑制作用。陽和湯能夠從多環(huán)節(jié)、 多方面發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫、抑制關(guān)節(jié)炎癥及骨質(zhì)破壞作用，達(dá)到 良好的治療效果。5參考文獻(xiàn)1 el maghraoui a. 0steoporosis and ankyl

9、osing spondylitisj. joint bone spine, 2004, 71： 291-295.2 lange u, kluge a, strunk j, et al. ankylosing spondylitis and bone mineral density-what is the ideal tool for measurement? jrheumatol in, 2005, 26： 115-120.3 吳文，黃國志，陳銀海強(qiáng)直性脊柱炎誤診分析及 康復(fù)措施j中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志,2002, 17 (5)： 299-300.4 黃立中，徐琳本，張曉明，等.陽和湯鎮(zhèn)痛及抗炎 作

10、用的試驗(yàn)研究j湖南中醫(yī)雜志,2002, 18 (5)： 49-50.5 丁麗麗，施松善，崔健，等.麻黃化學(xué)成分與藥理 作用研究進(jìn)展j.中國中藥雜志,2006, 31 (20)：1661-1664.6 陳榮明，朱耕新，芝許銀麻黃中不同提取物對(duì)細(xì) 胞免疫的影響j南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2001, 17 (4)： 234-2367 saito sy, maruyama y, kamiyama s, et al. ephedrae herba in mao-bushi-saishin -to inhibits ige mediated histamine release and increases camp content in rbl-2h3 cellsj. j pharmacol sci, 2004, 95 (1)： 41-46._8 kobayashi k, saito y, nakaza