龍膽苦苷及其滴丸的研制

1、歷下區(qū)科技發(fā)展計劃項目可行性研究報告項目名稱：龍膽苦苷及其滴丸的研制領 域：生物技術起止時間：2006年4月至2008年8月濟南 市 科 學 技 術 局填報日期：2006年4月15日龍膽苦苷及其滴丸的研制可行性研究報告一、立項的背景和意義病毒性肝炎是一種嚴重危害人體健康的傳染病,傳染性強,發(fā)病率高。亞洲、非洲及南歐地區(qū)人群中乙型肝炎病毒攜帶者高達15%20%，中國是乙肝病毒的高發(fā)區(qū)，據(jù)統(tǒng)計每年新增的乙型肝炎病人就有100萬?，F(xiàn)已證實病毒性肝炎與肝硬化、原發(fā)性肝癌密切相關。全世界每年約有75萬人死于HBV引起的肝癌。肝炎對人類健康的威脅有增強的趨勢。中藥在治療HBV方面有獨到的優(yōu)勢，其中龍膽苦苷

2、是其中一種有代表性的藥物。龍膽現(xiàn)已收載于中國藥典2000年版一部中。龍膽為龍膽科植物條葉龍膽Gentiana manshurica Kitag、龍膽Gentiana scabra Bge、三花龍膽Gentiana triflora Pall或堅龍膽Gentiana rigescens Franch的干燥根及根莖。前三種習稱龍膽。后一種習稱堅龍膽。記載其功能為清熱燥濕，瀉肝膽火。用于濕熱黃膽，陰腫應癢，帶下，強中，濕疹瘙癢，目赤，耳聾，肋痛，口苦，驚風抽搐等。龍膽苦苷是植物龍膽有效成分之一，屬裂環(huán)烯醚萜甙類；整體動物試驗和離體灌流肝及分離細胞實驗證明其具有保肝作用。龍膽注射液30mg/kg腹腔注

3、射，能減輕四氯化碳(CCl4)所致小鼠肝損傷的細胞變性和組織壞死，提高其肝糖原含量。另有報道，龍膽地上部位也具有與根相似的保肝作用。給小鼠腹腔注射龍膽苦苷240mg/kg，每日2次，共4次，對CCl4和D-氨基半乳糖(GALN)所致化學性肝損傷的整體動物有保護作用。采用改良Miller灌流儀灌流大鼠肝臟，在灌流液中加入龍膽苦苷和CCl4，1h內(nèi)，以灌流量、灌流液、丙氨酸轉氨酶(ALT)和肝組織病理觀察為指標，龍膽苦苷+ CCl4組與CCl4組比較，有顯著差異。同時，以CCl4致大鼠新鮮分離肝細胞損傷為病理模型，在細胞培養(yǎng)液中加入龍膽苦苷，以培養(yǎng)液ALT值及分離細胞之DNA、糖原、脂肪染色和電鏡

4、觀察為檢測指標，發(fā)現(xiàn)龍膽苦苷保護肝細胞作用在一定范圍內(nèi)與劑量成正比，龍膽苦苷+CCl4組與CCl4組比較，前者ALT值明顯低于后者，給藥組因糖原、DNA豐富，微結構損傷明顯弱于CCl4組，由于分離肝細胞剔除了神經(jīng)、體液因素的影響，故認為龍膽苦苷有直接保肝作用。龍膽苦苷可顯著降低饑餓小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化。饑餓小鼠肝細胞體外孵育結果表明，龍膽苦苷對CCl4所致肝臟脂質(zhì)過氧化升高有明顯的降低作用。有關龍膽苦苷藥理、藥動及毒理作用的文獻資料表明：龍膽苦苷的保肝作用明顯，療效確切。二、國內(nèi)外現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢包括知識產(chǎn)權現(xiàn)狀龍膽為常用中藥，具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效，常用于濕熱黃疸、目赤、口苦、脅痛等癥的治

5、療。龍膽主要有效成分包括龍膽苦苷(Gentiopicrin)、當藥苦苷(Swertiamarin)及當藥苷(Sweroside)等，其中龍膽苦苷含量最高。1905年，Herrissey用滅菌法得到龍膽苦苷，此后，日本學者對其進行了繼續(xù)研究，確定了龍膽苦苷的化學結構，龍膽苦苷屬于環(huán)烯醚萜苷類，該化合物廣泛存在于龍膽科植物。藥理研究表明龍膽苦苷具有保肝利膽和抗炎作用。中國的肝炎發(fā)病率居世界第一，開發(fā)治療肝炎的有效藥物刻不容緩，龍膽苦苷是一種難得的治療肝炎的化合物，因此目前國內(nèi)外對龍膽的研究和應用較多。一般應用多采用龍膽和其他中藥或西藥聯(lián)合應用治療肝炎，并且療效也比較令人滿意。或者采用將龍膽提取，以

6、獲得較高純度的龍膽苦苷，但后者目前所得到的龍膽苦苷提取物的純度均不理想，產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)純度一般不足80%。本公司經(jīng)過努力，在龍膽苦苷提取物的提純工藝上獲得了突破，所得龍膽苦苷提取物的純度可達98%以上，明顯高于其他同類研究。明顯減少了含龍膽成藥的服用量及提高了藥物療效。并且在此基礎上開發(fā)出首家獨有的龍膽苦苷滴丸，制成滴丸劑，藥物高度分散，基質(zhì)為水溶性，能加快藥物的溶出速度和吸收速度，起效迅速，生物利用度高，在這方面明顯優(yōu)于其它固體劑型；對生產(chǎn)設備的要求較低，車間無粉塵，有利于勞動保護，自動化程度高，生產(chǎn)成本低；滴丸劑表面積大、溶出速度快、胃腸刺激作用小、服用方便，在用藥安全行方面明顯優(yōu)于注射劑。且

7、對其主要成分的研究與質(zhì)量控制已達分子水平。藥物以極小的晶粒存在，故可提高難溶性藥物的生物利用度，舌下含服經(jīng)舌粘膜迅速吸收進入血循環(huán)，因而可達到高效、速效的目的，特別適用于中藥急癥制劑。 2、申請承擔單位目前研發(fā)應用情況。我公司已完龍膽苦苷提取工藝條件的初步探索，正在進一步完善小試工藝。本項目龍膽苦苷及其滴丸的提取及制備工藝路線，是本公司自行設計，國內(nèi)沒有查到專利申請，本項目龍膽苦苷滴丸及其制備方法已申報發(fā)明專利。三、現(xiàn)有研究基礎、特色和優(yōu)勢（一）技術指標1.龍膽苦苷結構式分子式：C16H20O9分子量：356.322.龍膽苦苷提取物的含量應不低于98%。3. 龍膽苦苷滴丸10mg/粒，每次服1

8、0粒，每日3次，每10粒含龍膽苦苷不少于30mg。4.龍膽苦苷提取物在室溫條件下采用塑料袋真空包裝，2年內(nèi)主要成分的含量、溶解性等應無明顯變化。5.龍膽苦苷凍干擬上市包裝在室溫條件下2年內(nèi)主要成分的含量、溶解性等指標應無明顯變化。（二）本項目的特色和優(yōu)勢有關龍膽苦苷藥理、藥動及毒理作用的文獻資料表明：龍膽苦苷的保肝作用明顯 ，療效確切。由于龍膽的主要有效成分為龍膽苦苷，我們研制了龍膽苦苷滴丸。已經(jīng)進行了很長時間的研究，可以快速完成研究，并且在劑型上具有其他劑型無法比擬的優(yōu)勢:1、起效迅速，生物利用度高。因為藥物在基質(zhì)中的分散呈分子狀態(tài)，膠體狀態(tài)或微粉狀結晶，為高度分散狀態(tài)，而基質(zhì)為水溶性的，則

9、可增加或改善藥物的溶解性，加快藥物的溶出速度和吸收速度。2、生產(chǎn)車間無粉塵，有利于勞動保護，設備簡單、生產(chǎn)周期短，自動化程度高，生產(chǎn)效率高，成本相對低。3、滴丸可使液體藥物固體化，便于運輸，儲存。（三）經(jīng)濟指標項目完成后，年新增產(chǎn)品銷售額1500萬元、年新增交稅總額120萬元、年新增凈利潤180萬元、年新增產(chǎn)值1800萬元。（四）項目創(chuàng)新點1.龍膽苦苷提取物純度高，含量不低于98%。2.龍膽苦苷的制備工藝的創(chuàng)新，針對國內(nèi)中藥生產(chǎn)廠家現(xiàn)有設備研究新型制備方法。我們進行的研究，特點在于將龍膽用一定濃度的乙醇提取，采用的方法有：浸漬、滲濾、加熱回流等，得到龍膽苦苷提取物，再采用硅膠柱、聚酰胺柱、大孔

10、樹脂柱等集中聯(lián)用進行精制，然后采用結晶、重結晶的方法達到較高純度的產(chǎn)品，我們的研究工藝采用的設備簡單，易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。3.龍膽苦苷滴丸明顯優(yōu)于其它劑型，主要特點是起效迅速、生物利用度高。滴丸中的藥物在基質(zhì)中的分散成分子狀態(tài)，膠體狀態(tài)或微粉狀結晶，為高度分散狀態(tài)，而基質(zhì)為水溶性物質(zhì)，可增加或改善藥物的溶解性，加快藥物的溶出速度和吸收速度。生產(chǎn)車間無粉塵，有利于勞動保護，設備簡單、生產(chǎn)周期短，自動化程度高，生產(chǎn)效率高，成本相對低。滴丸可使液體藥物固體化，便于運輸，儲存。（五）人才及產(chǎn)業(yè)方面的特色優(yōu)勢我公司成立幾年來，建立了完善的科研管理體系及穩(wěn)健的人才梯隊，擁有高中級專業(yè)技術人才及操作工人30

11、人。其中，高級職稱2人，中級職稱8人。大學?？坪捅究飘厴I(yè)的工作人員占60%以上，是已具規(guī)模實力的生產(chǎn)單位。我公司自主研制的項目龍膽苦苷及其滴丸投入生產(chǎn)后將在國內(nèi)有著很好的市場前景，創(chuàng)造很好的社會效益和經(jīng)濟效益。該項目完成后，具有很大的產(chǎn)業(yè)化需求。四、應用或產(chǎn)業(yè)化前景、市場需求。肝炎的肆虐嚴重威脅人類的身體健康. 研究開發(fā)具有我國自主知識產(chǎn)權及符合中醫(yī)特點的保肝藥物,解除肝病患者的痛苦刻不容緩.目前,我國的保肝藥有近百種.其藥理作用可包括抗肝細胞壞死,促進肝細胞修復,免疫調(diào)節(jié)等.這些保肝藥均為單一的保肝機制. 沒有抗肝炎病毒的作用.龍膽為龍膽科植物條葉龍膽Gentiana manshurica

12、Kitag、龍膽Gentiana scabra Bge、三花龍膽Gentiana triflora Pall或堅龍膽Gentiana rigescens Franch的干燥根及根莖。前三種習稱龍膽。后一種習稱堅龍膽。記載其功能為清熱燥濕，瀉肝膽火。用于濕熱黃膽，陰腫應癢，帶下，強中，濕疹瘙癢，目赤，耳聾，肋痛，口苦，驚風抽搐等。龍膽苦苷是植物龍膽有效成分之一，屬裂環(huán)烯醚萜甙類；整體動物試驗和離體灌流肝及分離細胞實驗證明其具有保肝作用.龍膽苦苷制劑龍膽苦苷滴丸，起效迅速，生物利用度高。因為藥物在基質(zhì)中的分散呈分子狀態(tài)，膠體狀態(tài)或微粉狀結晶，為高度分散狀態(tài)，而基質(zhì)為水溶性的，則可增加或改善藥物的溶

13、解性，加快藥物的溶出速度和吸收速度。研究開發(fā)具有我國自主知識產(chǎn)權及符合中醫(yī)特色的龍膽苦苷制劑對于提高我國保肝藥研究水平,解除肝病患者痛苦具有重要的科學意義. 因此市場前景廣闊，可給肝病患者帶來福音。五、研究內(nèi)容與預期目標1.項目總投資：項目執(zhí)行期間預計投資總額63萬元。其中，自籌33萬元，已完成投資5萬元，申請撥款25萬元。2.預計項目完成后的年經(jīng)濟指標：年新增產(chǎn)品銷售額1500萬元、年新增交稅總額120萬元、年新增凈利潤180萬元、年新增產(chǎn)值1800萬元。3.技術、質(zhì)量指標：（1）龍膽苦苷提取物的含量應不低于98%。（2）龍膽苦苷滴丸10mg/粒，每10粒含龍膽苦苷不少于30mg。4.本項目

14、完成后可獲專利及其它知識產(chǎn)權：發(fā)明專利 1項、新品種1項。六、研究方案、技術路線、組織方式與課題分解（一）工藝研究1、龍膽苦苷提取物的工藝優(yōu)化篩選，主要研究方法為：特點在于將龍膽用一定濃度的乙醇提取，采用的方法有：浸漬、加熱回流等，得到龍膽苦苷醇提物，再采用硅膠柱、聚酰胺柱、大孔樹脂柱等的幾種聯(lián)用進行精制，然后采用結晶，重結晶的方法得達到較高純度的產(chǎn)品。我們的研究采用的設備相對簡易，能適應目前國內(nèi)中藥生產(chǎn)廠家。2.龍膽苦苷提取物理化性質(zhì)的研究，3.龍膽苦苷進行藥理毒理研究.主要藥學研究、一般藥理研究、急性毒性研究,長期毒性研究,藥代動力學研究、臨床前毒理資料的研究；4.龍膽苦苷滴丸的處方確定、

15、制備工藝優(yōu)化篩選的主要研究方法為：對滴丸的常用基質(zhì)（聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油明膠、硬脂酸、蜂蠟、氫化植物油等）進行篩選，篩選出適宜的基質(zhì)，確定基質(zhì)的最少用量，確定處方；對滴丸常用的冷卻液（液體石蠟、植物油、甲基硅油、水、不同濃度的乙醇等）及冷卻條件進行篩選。篩選出適宜成型的冷卻液；對制備過程中的溫度進行考查（恒溫箱、冷卻柱溫度），確定最佳制備溫度。5.龍膽苦苷滴丸的理化性質(zhì)的研究.6.根據(jù)中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術要求對龍膽苦苷滴丸的理化性質(zhì)及質(zhì)量標準進行研究,確定質(zhì)量標準。（1）理化性質(zhì)研究.（2）質(zhì)量標準研究包括：性狀、鑒別、檢查（水分、重量差異、溶散時限、砷鹽、重金屬、微

16、生物限度等）、含量測定（色譜條件、測定波長、線性關系、回收率、重現(xiàn)性等）進行研究。7.對龍膽苦苷滴丸進行臨床研究。8.龍膽苦苷滴丸的穩(wěn)定性考察，主要研究方法為：（1）影響因素試驗：高溫試驗 光照試驗 高濕試驗. （2）加速試驗（3）長期試驗（二）主要技術參數(shù)1.龍膽苦苷提取物的含量應不低于98%。2.龍膽苦苷滴丸10mg/粒，每10粒含龍膽苦苷不少于30mg。（三）現(xiàn)有工作條件1、本公司成立以來，由于實行現(xiàn)代企業(yè)管理制度，機制先進靈活，經(jīng)過全體員工的努力和拼搏，現(xiàn)已發(fā)展成設有化學藥物合成、藥物制劑、中藥、藥物分析及生物藥物五個專業(yè)配套的研究室，可以從事化學藥物新藥和中藥新藥的研究開發(fā)。是近年來

17、新崛起的新藥研究開發(fā)中心之一。已研制開發(fā)中西藥新藥品種200余個，已取得臨床批件和生產(chǎn)批件的新藥百余多個，其中化學藥物方面：成功研制并轉讓鹽酸頭孢唑蘭、甲磺酸帕珠沙星、恩曲他濱、巴洛沙星、利拉萘酯、西尼地平、伊布利特等原料和制劑的多個臨床批件及生產(chǎn)批件；中藥方面：成功研制并轉讓了冠心丹參片、產(chǎn)后逐瘀片、生脈口服及凍干、輸液和刺五加口服及凍干制劑、消糜靈泡騰片等多個臨床批件及生產(chǎn)批件。已申請發(fā)明專利20項。2、工作基礎和條件（1）我公司多年從事新藥研發(fā)工作，現(xiàn)已經(jīng)審報國家一類新藥1個，二、三類新藥10余個，完成五、六類的研究和轉讓的新藥一百余個。其中申請發(fā)明專利有20余個，現(xiàn)公司員工30余人，

18、其中有高級職稱2人，中級職稱8人，公司員工60%以上為本科畢業(yè)生。（2）目前可用的試驗室主要儀器設備：高效液相色譜儀12臺，超低溫反應器1臺，高壓釜2臺，攪拌30臺，三用紫外分光光度儀2臺，紅外分光光度儀1臺。（四）特殊行業(yè)許可證報批情況龍膽苦苷及其滴丸項目完成后，申請臨床研究批件。（五）推廣應用計劃肝炎的肆虐嚴重威脅人類的身體健康. 研究開發(fā)具有我國自主知識產(chǎn)權及符合中醫(yī)特點的保肝藥物,解除肝病患者的痛苦刻不容緩.目前,我國的保肝藥有近百種.其藥理作用可包括抗肝細胞壞死,促進肝細胞修復,免疫調(diào)節(jié)等.這些保肝藥均為單一的保肝機制. 沒有抗肝炎病毒的作用.龍膽為龍膽科植物條葉龍膽Gentiana

19、 manshurica Kitag、龍膽Gentiana scabra Bge、三花龍膽Gentiana triflora Pall或堅龍膽Gentiana rigescens Franch的干燥根及根莖。前三種習稱龍膽。后一種習稱堅龍膽。記載其功能為清熱燥濕，瀉肝膽火。用于濕熱黃膽，陰腫應癢，帶下，強中，濕疹瘙癢，目赤，耳聾，肋痛，口苦，驚風抽搐等。龍膽苦苷是植物龍膽有效成分之一，屬裂環(huán)烯醚萜甙類；整體動物試驗和離體灌流肝及分離細胞實驗證明其具有保肝作用.龍膽苦苷制劑龍膽苦苷滴丸，起效迅速，生物利用度高。因為藥物在基質(zhì)中的分散呈分子狀態(tài)，膠體狀態(tài)或微粉狀結晶，為高度分散狀態(tài)，而基質(zhì)為水溶性的，則可增加或改善藥物的溶解性，加快藥物的溶出速度和吸收速度。研究開發(fā)具有我國自主知識產(chǎn)權及符合中醫(yī)特色的龍膽苦苷制劑對于提高我國保肝藥研究水平,解除肝病患者痛苦具有重要的科學意義. 因此市場前景廣闊，可給肝病患者帶來福音。 七、年度計劃內(nèi)容1.2006年4月至2006年10月完成龍膽苦苷及其滴丸的處方及工藝研究。2.2006年10月至2007年10月完成龍膽苦苷及其滴丸的理化性質(zhì)的研究、質(zhì)量標準研究及穩(wěn)定性研究。3.2007年2月至2007年12月完成龍膽苦苷及其滴