系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細(xì)胞超保守區(qū)域轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平研究

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個核細(xì)胞超保守區(qū)域轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平研究【摘要】目的：探討超保守區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子與系統(tǒng)性 紅斑狼瘡的相關(guān)性?！娟P(guān)鍵詞】紅斑狼瘡，系統(tǒng)性；單個核細(xì)胞；t-ucrs； 生物標(biāo)志物doi： 10. 3969/j. issn. 2095-4174. 2014.04.006analyzing the expression level of the ultra conservative region of the peripheral blood mononuclear cells in patients with systemic lupus erythematosusqiu jin-j

2、un, sui wei-guo, cao cui-hui, he hui-yan, zhang yang, dai yong【abstract 】 objective : systemic lupus erythematosus is a systemic autoimmune disease regulated by a variety of genest-ucr is an important part of the long non coding rna transcribed from the 481 extreme conservative regions in the human

3、genome, which will change the expression pattern in many kinds of cancers such as leukemia, liver can cer, col on can cer, neurobiastoma and so on. method： t-ucr chip technologywas used to analyze the expression level of the ultra conservativeregion of the peripheral bloodmononuclear cells in 15 pat

4、ients with systemic lupus erythematosus and 15 healthy people .results： compared the group with systemic lupus erythematosus with the healthy control group, the expression level of 18 t-ucrs (uc. 285+, uc. 234+, uc.102+, uc. 341 + , uc. 267+, uc. 221-, uc. 290- and uc. 90+) up-regulated and the expr

5、ession level of 29 t-ucrs down-regulated, among which the expression of uc. 186- was the most significant in the corresponding ultra conserved region (p = 3. 29, fc二-38. 648 61) and hnrnph1 was its related gene.conclusion： go analysis showed that uc. 186- might be a potential biomarker for diagnosis

6、 and prognosis of systemic lupus erythematosus, and hnrnph1 might be the potential key gene of lupus erythematosus system.【keywords 】 lupus erythematosus , systemic ； mononuclear cells； t-ucrs； biological marker系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (systemic lupus erythematosus,sle)是一種與彌漫性結(jié)締組織相關(guān)的典型的全身性自 身免疫病1，其特征在于發(fā)生免疫炎癥。sle的發(fā)病機(jī)

7、制復(fù) 雜2,涉及家族遺傳、免疫和環(huán)境因素等，可能會導(dǎo)致組 織和器官的損害，其中最復(fù)雜的是腎功能損害3。在人、 小鼠和大鼠基因中極度保守的長段非編碼基因區(qū)域，命名為 超保守區(qū)域(ul-traconserved regions, ucrs)。ucr 為長 約200779 bp的序列，最初于2004年由bejerano g發(fā)現(xiàn) 4-5。ucr常位于腫瘤相關(guān)基因區(qū)域或脆性位點(diǎn)。ucr編碼 的一群特殊的非編碼rna (ncrna),稱為超保守區(qū)域轉(zhuǎn)錄子(transcribed ultraconserved regions, t-ucrs), 在人 腫瘤中其表達(dá)發(fā)生變化。t-ucr是長鏈非編碼rna(lo

8、ng-noncoding, rna)重要組成部分，轉(zhuǎn)錄自人類基因 組中481個極度保守區(qū)域(ultraconserved regions),在 白血病、肝癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等多種癌癥中會改變 表達(dá)模式6-9。t-ucrs參與癌癥生物學(xué)和腫瘤發(fā)生，并有 可能作為疾病診斷、預(yù)后和預(yù)測的指標(biāo)，以及一類新的治療 靶點(diǎn)。本文通過對sle單個核細(xì)胞的t-ucrs表達(dá)水平的研 究，發(fā)現(xiàn)其臨床病理特征，以及新的診斷或預(yù)后生物標(biāo)志物。1材料與方法1. 1標(biāo)本采用兩組全血標(biāo)本，采集時間為2011年1 月至2011年9月，均來自解放軍第181醫(yī)院，分別為15名 sle患者(sle組)和15名健康人群(健康對照

9、組)，其中 sle早期患者(未經(jīng)過治療，病程較短)5例，病程較長、 預(yù)后較好者與病程較長、預(yù)后不好者各5例，健康對照組與sle組年齡、種族、性別相匹配，見表1。1.2標(biāo)本的測定 采用nanodrop nd-1000測定標(biāo)本rna 的含量與質(zhì)量，用瓊脂凝膠電泳評估標(biāo)本rna的完整性。1. 3 dna芯片 采用arraystar公司的人t-ucr芯片分析人體 t-ucrs表達(dá)水平。在481個ucrs超保守區(qū)域的兩端分別添 加1 kb的片段，然后用40 bp的特異性探針標(biāo)記，從而可 以準(zhǔn)確的檢測t-ucr和發(fā)現(xiàn)新的t-ucro接著，在芯片中加 入特定的外顯子或探針,精確地檢測到153個潛在的t-uc

10、rs, 這些 t-ucrs 可以與數(shù)據(jù)庫，如 refseq、ucsc knowngenes 和ensembl進(jìn)行比對。最后，基因特異性探針標(biāo)記的ucrs 檢測到1 809個基因，由此可探索t-ucrs和它們近端蛋白 質(zhì)編碼基因之間的關(guān)系。1.4 rna標(biāo)記和芯片雜交1. 5數(shù)據(jù)分析2結(jié)果3討論在人體組織中，很大一部分的ucrs都會發(fā)生轉(zhuǎn)錄 (t-ucrs ),并且它們的表達(dá)水平與組織特異性相關(guān)聯(lián)。t-ucrs只有一條主鏈會發(fā)生轉(zhuǎn)錄，而且只有9%的t-ucrs會 發(fā)生正反轉(zhuǎn)錄13。準(zhǔn)確測定人類所有的481t-ucrs方法有 芯片測定、northern印跡法、反轉(zhuǎn)錄實(shí)時定量pcr14和線 性恒溫r

11、ibo-spia? rna擴(kuò)增法15 o因?yàn)闃?biāo)本量小而且結(jié) 果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，所以這對于臨床方面的轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控 研究具有特別意義。本文主要研究了 sle組與正常對照組之間的潛在的 t-ucrs和tus重疊ucrs的rna轉(zhuǎn)錄子，發(fā)現(xiàn)基因hnrnph1 (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein hl) 在 sle 組與正常對照組之間表達(dá)差異最顯著。該基因編碼異質(zhì)核核 糖核蛋白(hnrnps), hnrnps是rna結(jié)合蛋白與異構(gòu)核rna 相結(jié)合的產(chǎn)物，此蛋白在細(xì)胞核中與前mrna相關(guān)聯(lián)，并且 影響著前mrna加工和mrna代謝和運(yùn)輸?shù)钠渌矫?。所有?h

12、nrnps都存在于細(xì)胞核中，一些hnrnps會在細(xì)胞核與細(xì)胞 質(zhì)之間運(yùn)動。此核蛋白的蛋白質(zhì)具有不同的核酸結(jié)合特性。 由hnrnph1編碼的蛋白質(zhì)具有結(jié)合于rna的三個重復(fù)的rrm 結(jié)構(gòu)域并且非常類似于家族成員hnrpf,并且該基因可能與 遺傳性淋巴水腫1型相關(guān)。綜上所述，本文系統(tǒng)地評估了 sle患者與正常對照組的 外周血單個核細(xì)胞的t-ucrs的差異表達(dá)情況，并獲得了相 關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵基因。結(jié)果表明，t-ucrs與系統(tǒng)系紅斑狼瘡具有 相關(guān)性，并且相關(guān)的關(guān)鍵基因可能作為sle的潛在的生物標(biāo) 志物或是治療靶點(diǎn)。然而，本文的研究數(shù)據(jù)只是初步階段， 需要更多的標(biāo)本數(shù)以及更深入的研究。致謝作者在此深深感謝所

13、有捐獻(xiàn)血液的志愿者。這項(xiàng)工作受 基金項(xiàng)目一一深圳市坪山新區(qū)醫(yī)療衛(wèi)生發(fā)展孵化資助資金 (201203384)的資助。4參考文獻(xiàn)nat rev rheumatol, 2013, 9 (4)： 197.2 baizabal-carvallo jf , alonso-juarez m , koslowski m.chorea in systemic lupus erythematosusj. j clin rheumatol, 2011, 17 (2)： 69-72.3 ponticelli c, glassock rj, moroni g. inductionand maintenance ther

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