基因工程試題

1、基因工程試題A一、名詞解釋(每題2分，共20分）1、轉(zhuǎn)染：2、質(zhì)粒不親和性：3、cDNA 文庫:4、RACE:5、基因工程：6、RTPCR7、插入失活：8、SD 序列：9、穿梭質(zhì)粒載體:10、多克隆位點：二、選擇題(每題1分，共15分）1( )基因工程操作的三大基本元件是:（I 供體 II 受體 III 載體 IV 抗體 V 配體） I + II + III I + III + IV II + III + IV II + IV + V III + IV + V2（ ）基因工程的單元操作順序是 增,轉(zhuǎn)，檢，切，接 切，接,轉(zhuǎn)，增，檢 接，轉(zhuǎn)，增,檢，切 檢,切，接，增,轉(zhuǎn) 切，接，增,轉(zhuǎn),檢3（

2、 )生物工程的上游技術(shù)是 基因工程及分離工程 基因工程及發(fā)酵工程 基因工程及酶工程 基因工程及細胞工程 基因工程及蛋白質(zhì)工程4( )下列對逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確的是：A 依賴于RNA的DNA聚合酶或稱為RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶B 依賴于cDNA的DNA聚合酶或稱為cDNA指導(dǎo)的DNA聚合酶C 依賴于DNA的DNA聚合酶或稱為DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶D 依賴于RNA的RNA聚合酶或稱為rNA指導(dǎo)的RNA聚合酶5( )下列對限制性內(nèi)切酶描述正確的是限制性內(nèi)切酶可識別任一的DNA序列 使用限制性內(nèi)切酶時，有時可出現(xiàn)星活性 限制性內(nèi)切酶可識別堿基數(shù)不超過5個 限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生都是黏性末端6 （

3、）T 4 DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團是 2' OH 和 5 P 2 -OH 和 3' -P 3' OH 和 2 P 3 OH 和 5 P 5 -OH 和 3 -P7( ）下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述,錯誤的是 連接反應(yīng)的最佳溫度為12-16 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mM 連接酶通常應(yīng)過量 25 倍 DTT 在反應(yīng)中可加也可不加8（ ）下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大？A質(zhì)粒 B黏粒C酵母人工染色體(YAC) D噬菌體9（ ）載體的功能是（I 運送外源基因

4、高效進入受體細胞 II 為外源基因提供復(fù)制能力 III 為外源基因提供整合能力） I I + II I + III II + III I + II + III10（ ）考斯質(zhì)粒（cosmid）是一種 天然質(zhì)粒載體 由入-DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體 能裂解受體細胞的烈性載體 具有溶原性質(zhì)的載體 能在受體細胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體11( ）下列有關(guān)基因的描述，錯誤的是 蛋白質(zhì)是基因表達唯一的產(chǎn)物 基因是DNA鏈上具有編碼功能的片段 基因也可以是RNA基因突變不一定導(dǎo)致其表達產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)12( ）關(guān)于cDNA的最正確的提法是： A 同mRNA互補的單鏈DNA B 同mRNA互補的雙鏈D

5、NA C 以mRNA為模板合成的雙鏈DNA D以上都正確13( ）某一重組 DNA （ 6。2 kb ） 的載體部分有兩個 SmaI 酶切位點。用 SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點共有 5 個 4 個 3 個 2 個14（ ) 同一種質(zhì)粒DNA,以三種不同的形式存在,電泳時，它們的遷移速率是： A OC DNA>SC DNPLDNA B SC DNAL DNAOC DNAC L DNAOC DNA>SC DNA D SC DNAOC DNAL DNA15（ ） cDNA 法獲得目的基因的優(yōu)點是 成

6、功率高 不含內(nèi)含子 操作簡便 表達產(chǎn)物可以分泌 能糾正密碼子的偏愛性三、簡答題(每題5分，共25分）1、什么是包涵體?2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容?基本反應(yīng)過程是什么？3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？四、論述題(每題10分，共40分）1簡述載體構(gòu)建的一般過程2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？3如何有效地提高外源基因的表達效率?4試述3RACE技術(shù)原理和方法基因工程試題標(biāo)準答案及評分標(biāo)準A一、選擇題（每題1分，共15分)1、A 2、A 3、 A 4、A 5、B 6、D 7、E 8、C 9、

7、E 10、B11、A 12、C 13、D 14、B 15、B二、名詞解釋（每題2分，共20分）1、轉(zhuǎn)染:專指感受態(tài)的大腸桿菌細胞捕獲和表達噬菌體DNA分子的生命過程.2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下,兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合.4、RACE：是一種通過PCR進行cDNA末端快速克隆的技術(shù)，是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴增出某個特異位點到3,或5,端之間未知序列的方法.5、基因工程：在分子水平上的進行的遺傳操作,指將一種或多種微生物的基因或基

8、因組提取出來，或人工合成基因,按著人們的愿望，進行嚴密的設(shè)計，經(jīng)過體外加工重組，轉(zhuǎn)移到另一種生物體的細胞內(nèi)，使之能在受體細胞遺傳并獲得新的遺傳性狀的技術(shù)。6、RTPCR：先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA，以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一對引物,擴增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、Insert inaction:即插入失活，基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點，在該位點用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理，并將外源DNA片段插入該位點,則插入的外源DNA片段將破壞原有基因的讀碼框,往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無法翻譯表達，或即使翻譯表達，形成的也是喪失了

9、原有生物活性的蛋白質(zhì)，這一現(xiàn)象稱為插入失活。8、SD序列:在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點上,含有一個轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA 3,末端堿基互補的序列，該序列最初由Shine 、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為ShineDalgarno 序列，簡稱S-D序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點的選擇標(biāo)記,因而可在兩種不同宿主細胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點的DNA片段。三、簡答題（共25分，每題5分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達時,常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀

10、體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達時的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白.2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過程是什么？PCR反應(yīng)體系所要求的條件： a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的 DNA引物(約20個堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如:TagDNA聚合酶。c、dNTP.d、作為模板的目的DNA序列，E 無菌水,F，緩沖液PCR反應(yīng)體系的基本反應(yīng)過程：預(yù)變性、變性、退火、延伸、復(fù)延伸.3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響?酶的純度。DNA樣品的純度。DNA的甲基化程度.酶切反應(yīng)的溫度與時間.D

11、NA分子的構(gòu)型.限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？能在宿主細胞內(nèi)進行獨立和穩(wěn)定的自我復(fù)制具有合適的限制內(nèi)切酶位點具有合適的選擇標(biāo)記基因5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明.理論上的三大發(fā)現(xiàn)：證實了DNA是遺傳物質(zhì)揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機理遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問答題(每題10分，共40分)1簡述載體構(gòu)建的一般過程A 目的基因分析(1）ORF 分析（2）

12、酶切位點分析B 載體選擇與分析（1）多克隆位點分析（2)抗性標(biāo)記分析（3）啟動子與其他篩選標(biāo)記分析C 連接體系與連接時間確定2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？優(yōu)點:大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知識清楚,對其基因表達調(diào)控的分子機理也比較了解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實踐，大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系,有多種適用的寄主菌株和載體系列,大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產(chǎn).缺點：在通常情況下,細菌的RNA聚合酶不能識別真核的啟動子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝，而細菌中通常并沒有這樣的修飾機制

13、，從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細菌的蛋白酶識別,并被當(dāng)做“異已分子"降解掉。3如何有效地提高外源基因的表達效率？提高啟動子強度 縮短啟動子同克隆基因間距離 高效的翻譯起始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū) 提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性 用以下方法提高翻譯水平:調(diào)整SD序列與AUG間的距離用點突變的方法改變某些堿基增加mRNA的穩(wěn)定性的 減輕細胞的代謝負荷：誘導(dǎo)表達表達載體的誘導(dǎo)復(fù)制 提高表達蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達融合蛋白采用某種突變菌株表達分泌蛋白質(zhì)4試述3RACE技術(shù)原理和方法PCR用于擴增代表mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點與其3或5末端之間區(qū)域的部分cDNA稱為快速擴增cDNA末端技術(shù).如果已敿目的mRNA的一片段鏈內(nèi)短序列，據(jù)此或設(shè)計基因特異引物,用原先存在的poly（A）尾(3末端）或附加的同聚尾（5末端