試驗(yàn)九甲醛滴定法測(cè)定氨基酸

1、實(shí)驗(yàn)九 甲醛滴定法測(cè)定氨基酸一、目的 掌握甲醛滴定法測(cè)定氨基酸含量的原理和操作要點(diǎn)。二、原理氨基酸是兩性電解質(zhì)，在水溶液中有如下平衡： +H3N+RCOOH2NRCOO+H+-N%是弱酸，完全解離時(shí)pH為1112或更高，若用堿滴定-NH3所釋放的H+來(lái)測(cè)量氨基酸，一般指示劑變色域小于 10，很難準(zhǔn)確指示終點(diǎn)。常溫下，甲醛能迅速與氨基酸的氨基結(jié)合，生成羥甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3釋放H,使溶液的酸度增加，滴定終點(diǎn)移至酚酞的變色域內(nèi)(pH9.0左右)。因此，可用酚酞作指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定。R-CH(COO)-NH 3R-CH(COO)-NH2+H+ NaOH 中和R-CH(

2、COO)-NH2 HCHO R-CH(COO)-NHCH2OH HCHO R-CH(COO)-N(CH2OH)2 如樣品為一種已知的氨基酸，從甲醛滴定的結(jié)果可算出氨基氮的含量( 脯氨酸與甲醛作用生成不穩(wěn)定的化合物，使滴定 mL數(shù)偏低。酪氨酸的滴定mL數(shù)偏高)。如樣品是多種氨基酸的混合物，如蛋白水解液，則滴定結(jié)果不能作為氨基酸的定量依據(jù)。但此法簡(jiǎn)便快速，常用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。隨水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加時(shí)，表 示水解作用已完全、器材藥25 mL 錐形瓶；3 mL微量滴定管；吸管；0.1 mol/L標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液300 mL準(zhǔn)確稱取750 mg甘氨酸，溶解后定容至100 mL

3、0.1 m01 /L標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液500 mL；（標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液應(yīng)在使用前標(biāo)定，并在密 閉瓶中保存。不可使用隔日貯在微量滴定管中的剩余氫氧化鈉。）酚酞指示劑20 mL 0.5 %酚酞的50%乙醇溶液中性甲醛溶液400mL在50 mL 3637%分析純甲醛溶液中加入1 mL 0.1 %酚酞乙醇 水溶液，用0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液滴定到微紅，貯于密閉的玻璃瓶中。此試劑在臨用 前配制。如已放置一段時(shí)間，則使用前需重新中和。四、操作1 取3個(gè)25 mL的錐形瓶，編號(hào)。向第1、2號(hào)瓶?jī)?nèi)各加入2mL0.1 mo1/L的標(biāo)準(zhǔn)甘 氨酸溶液和5 mL水，混勻。向3號(hào)瓶?jī)?nèi)加入7mL水。然后向3個(gè)瓶中各

4、加入5滴酚酞指示 劑，混勻后各加2 mL甲醛溶液，再混勻，分別用 0.1 mo1 /L標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定至溶 液顯微紅色。重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)2次，記錄每次每瓶消耗標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的 mL數(shù)。取平均值，計(jì)算甘 氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率 =實(shí)際測(cè)得量X 100加入理論量公式中實(shí)際測(cè)得量為滴定第1和2號(hào)瓶耗用的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液 mL數(shù)的平均值與3號(hào) 瓶耗用的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液mL數(shù)之差乘以標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉的摩爾濃度，再乘以 14.008。2mL乘以標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸的摩爾濃度再乘 14.008。即為加入理論量的mg數(shù)。2 取未知濃度的甘氨酸溶液 2 mL,依上述方法進(jìn)行測(cè)定，平行做幾份，取平均值。 計(jì)算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的 mg數(shù)。氨基氮（mg/mL）=（A B） mol/LNaOH 體008 2式中：A為滴定待測(cè)液耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均 mL數(shù)。B為滴定對(duì)照液（3號(hào)瓶）耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的平均 mL數(shù)。mo/Lnroh為標(biāo)準(zhǔn)氫 氧化鈉溶液的真實(shí)摩爾濃度。思考題