不規(guī)則抗體篩選和鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、不規(guī)則抗體篩選和鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 檢驗(yàn)?zāi)康牟灰?guī)則抗體篩選和鑒定可在交叉配合之前進(jìn)行或一起進(jìn)行， 這樣有利于患者抗 體的早期確認(rèn)及鑒定， 發(fā)現(xiàn)臨床上有意義的抗體， 避免一些可能的情況而造成 病情的延誤。2. 檢驗(yàn)方法 分鹽水介質(zhì)法、抗球蛋白法和微柱凝膠法。3. 檢驗(yàn)原理讓待檢者的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞（I、U、川套）起反 應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37C中有反應(yīng)活性的抗體。這種抗體可引起新生兒溶血病、溶 血性輸血反應(yīng)、 或使輸入的紅細(xì)胞存活期縮短等。 當(dāng)不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性 后，再進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，即利用譜紅細(xì)胞（ 11 套鑒定細(xì)胞）與待檢者的 血清反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷機(jī)體所產(chǎn)生的同

2、種抗體類別。4. 標(biāo)本要求受檢者不抗凝靜脈血 4.0ml ，分離血清， 48 小時(shí)內(nèi)使用5. 試劑5.1. 篩選紅細(xì)胞：由2或3人份的0型紅細(xì)胞組成為一套試劑，每套試劑篩選紅細(xì)胞中至少有以下常見的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb等。每次用3套試劑（I、U、川）進(jìn)行抗 體篩選，見表 1005-1 。5.2. 鑒定譜細(xì)胞：除包括常見的抗原以外還有：Cw、 Kpa、 Kpb、 Jsa、 Jsb、 Lua、Lub、Xr/mina等。每次用11套試劑進(jìn)行抗體鑒定，見表1005-2。5.3. 抗球蛋白試劑：多特異性抗球蛋白血清（ IgG、

3、 C3d）。5.4. 致敏紅細(xì)胞（質(zhì)控細(xì)胞） 。5.5.0.9% 生理鹽水。5.6. Coombs微柱凝膠卡。6. 器材試管、吸管、37 E水浴箱、臺(tái)式離心機(jī)、濾紙、微量加樣器等。7. 操作程序7.1. 鹽水介質(zhì)法7.1.1 .取受檢者血清2滴于標(biāo)記有I、U、川的3支小試管中。7.1.2 .對(duì)應(yīng)加入I、U、川套2%-5%$選紅細(xì)胞生理鹽水懸液1滴，37C 孵育30分鐘。7.1.3.以3000r/min離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并記錄反應(yīng)情況于 表1005-1中。如果抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性，繼續(xù)做以下試驗(yàn)。表1005-1 紅細(xì)胞血型篩選細(xì)胞反應(yīng)格局表序號(hào)血型系Rh-hrKellDuffyKill

4、LewisPMNSsLuth基因DCEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebP1MNSsLuaLubIR1R1+00+00+0+0+0+nR2R2+0+00+00+0+00+R1r1+0+0+0+00+0+00+0+試驗(yàn)結(jié)果（鹽水法、抗球蛋白法、微柱凝膠法）IR1R1nR2R2R1r1注：+為陽(yáng)性；0為陰性7.1.4再取受檢者血清2滴于標(biāo)記有111的11支小試管中。7.1.5.在11支小試管中分別加入11套2%5您定譜細(xì)胞生理鹽水懸液1滴,37C孵育30分鐘。7.1.6.以3000r/min離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并將反應(yīng)情況記錄于表1005-2中表1005-2 紅細(xì)胞血型譜細(xì)胞

5、反應(yīng)格局表序號(hào)血型系Rh-hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth基因DCEceKkFya匸bFyJkaJkbLea1 b LeP1MNSsLuaLub1RwR+00+0+0+0+0+2RiR+00+0+00+0+0+0+3R?R?+0+00+0+00+0+00+4r' r0+0+00+00+5r" r00+0+0+00+0+0+6r r000+0+00+0+0+0+0+7r r000+0+0+0+0+0+0+0+8R)r+00+0+00+00+0+0+9r r000+0+00+0+00+10r r000+0+0+0+00+0+11r r000+0+0+0+

6、00+結(jié)果（鹽水法、抗球蛋白法、微柱凝膠法）1wRi R2R1R3詠4r' r5r" r6r r7r r8Rr9r r10r r11r r注：+為陽(yáng)性；0為陰性；W為弱陽(yáng)性7.2抗球蛋白法721.如果鹽水法（1）（3）抗體篩選試驗(yàn)陰性，繼續(xù)做以下試驗(yàn)。7.2.2. 再振搖試管，使管底紅細(xì)胞重新懸浮，用生理鹽水洗滌3次。7.2.3. 最后一次洗滌后，棄去全部鹽水，將試管邊緣鹽水用濾紙吸干。7.2.4. 立即加入多特異性抗球蛋白血清1滴，混勻。7.2.5以3000r/min離心10秒，輕輕懸浮細(xì)胞，肉眼觀察凝集和溶血情況, 并用顯微鏡確證，記錄結(jié)果于表1005-1中。7.2.6.

7、 如果抗體篩選試驗(yàn)陽(yáng)性，再取受檢者血清2滴于標(biāo)記有111的11支小試管中。727.在11支小試管中分別加入11套鑒定譜細(xì)胞懸液1滴和多特異性抗球 蛋白血清1滴，37C孵育30分鐘。7.2.8.以3000r/min離心10秒，觀察凝集和溶血情況，并將反應(yīng)情況記錄于表 1005-2 中。7.3. 微柱凝膠法（強(qiáng)生卡）7.3.1. 在CoombS微柱凝膠卡上標(biāo)記I、U、川，分別加入I、U、川套篩選 紅細(xì)胞40卩1和被檢血清40卩I。7.3.2. 將CoombS微柱凝膠卡置于微柱凝膠孵育器內(nèi)，孵育15分鐘。7.3.3. 取出微柱凝膠卡觀察結(jié)果，并記錄于表 1005-1中。7.3.4. 如果抗體篩選試驗(yàn)

8、陽(yáng)性，將11套鑒定譜細(xì)胞對(duì)應(yīng)加入標(biāo)記有111 的微柱凝膠卡中各40卩I。7.3.5. 然后，再各加入被檢血清40卩I。7.3.6. 重復(fù)操作7.3.2.和7.3.3，觀察結(jié)果，并記錄于表 1005-2中。8. 結(jié)果判斷8.1. 必須記錄觀察到的每個(gè)細(xì)胞樣本的凝集強(qiáng)度或溶血現(xiàn)象。鹽水法和抗球蛋白法以土+ + + +為陽(yáng)性凝集結(jié)果； 微柱凝膠法中抗原抗 體復(fù)合物浮在微柱凝膠卡表面或膠中， 為陽(yáng)性反應(yīng)；沉于尖底部為陰性反應(yīng)，見 圖 1005-1。溶血 濬血 混合（完全）（不完全）凝集圖1005-1微柱凝膠法結(jié)果判斷8.2. 抗球蛋白法陰性無(wú)凝集，應(yīng)加入致敏紅細(xì)胞（質(zhì)控細(xì)胞）1滴，混勻后以1000r/

9、min離心15秒，觀察結(jié)果，若凝集表示試驗(yàn)結(jié)果為陰性；若不凝集，表示抗球蛋白血清可能失效，試驗(yàn)無(wú)意義8.3. 鹽水法和抗球蛋白法判斷溶血和凝集的終點(diǎn)必須準(zhǔn)確和前后一致， 如果溶 血和凝集都存在， 離心后要立即觀察上清液的情況， 然后輕輕地把細(xì)胞搖散 以觀察凝集。8.4. 紅細(xì)胞血型篩選細(xì)胞和譜細(xì)胞反應(yīng)格局見表 1005-1 和 1005-2 。9. 注意事項(xiàng)9.1. 每種試驗(yàn)必須做自身對(duì)照， 即待檢者自身血清和自身紅細(xì)胞反應(yīng)， 無(wú)凝集 則試驗(yàn)有效；若有凝集則提示存在自身免疫抗體。9.2. 抗體篩選陽(yáng)性后， 要用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞 3 次，離心后再觀察結(jié)果， 避 免假陽(yáng)性反應(yīng)。9.3. 根據(jù)反應(yīng)凝集強(qiáng)度土+ + + +記為陽(yáng)性結(jié)果，表示待檢者血清中有不規(guī)則抗體， 結(jié)合譜細(xì)胞反應(yīng)格局， 確定抗體特性； 無(wú)凝集表示待檢者