微生物基礎(chǔ)知識培訓(xùn)

1、會計學(xué)1微生物基礎(chǔ)知識培訓(xùn)微生物基礎(chǔ)知識培訓(xùn)代表人物和重要事件科赫的功績 J.D.Waston(李斯特), H.F.C.Crick() 發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋模型葡萄球菌乳酸桿菌炭疽桿菌炭疽桿菌炭疽桿菌是人類歷史上第一個被證實引起疾病的細菌。1877年Robert Koch首次在培養(yǎng)基上培養(yǎng)成功，并說明其可形成內(nèi)孢子體，注射動物后可導(dǎo)致實驗性炭疽，是出現(xiàn)在歷史上比較久的一種生物武器，也是戰(zhàn)爭中常用的一種細菌，曾使無數(shù)人喪命。二戰(zhàn)時期，日本731部隊曾經(jīng)大量培養(yǎng)炭疽病菌，并用活人標本進行實驗。炭疽桿菌是一種很大的格蘭氏染色陽性桿菌，可在普通培養(yǎng)基上需氧或厭氧條件下培養(yǎng)。 芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌 淡水中的

2、螺旋菌 青霉是種真菌，屬于子囊菌。 有的能產(chǎn)生青霉素，救了無數(shù)人的命。 產(chǎn)生無性孢子。酵母菌根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無性孢子菌絲體的直徑約12 um黑的是孢子囊 支原體掃描電鏡圖片支原體支原體（mycoplasma）以前被認為是最小的能獨立存活的原核生物，以前也被認為是地球上迄今為止被發(fā)現(xiàn)的最小的細胞生物。全世界90%的豬體內(nèi)寄生著支原體。立克次氏體（rickettsiae），一種微小的寄生的細菌。上圖是動物的淋巴細胞，紅色的是寄生的立克次氏體。愛滋病病毒SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒 禽流感病毒光學(xué)性質(zhì)細菌為半透明體。表面積細菌體積微小，相對表面積大。帶電現(xiàn)象

3、均帶負電。其帶電現(xiàn)象與染色反應(yīng)、凝集反應(yīng)、抑菌和殺菌作用等密切相關(guān)。半透性細菌的細胞壁和細胞膜都有半透性。滲透壓菌體內(nèi)為高滲透壓。細菌的特點細菌的特點細菌的生長的環(huán)境因素細菌的生長的環(huán)境因素球菌桿菌螺形菌腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌雙球菌雙球菌肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌鏈球菌鏈球菌葡萄球菌葡萄球菌球菌四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌八疊球菌八疊球菌不同桿菌的大小、長短、粗細很不一致。不同桿菌的大小、長短、粗細很不一致。炭疽芽胞桿菌 3-10 m大中大腸埃希菌 2-3 m小布魯菌 0.6-1.5 m兩端齊平炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌兩端尖細白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌桿菌桿菌的形態(tài)多樣桿菌的形態(tài)多樣分枝桿菌分枝桿菌雙歧桿菌雙歧

4、桿菌桿菌弧菌弧菌螺菌螺菌螺桿菌螺桿菌基本結(jié)構(gòu)細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核質(zhì)特殊結(jié)構(gòu)莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞基本結(jié)構(gòu)：基本結(jié)構(gòu)：細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核特殊結(jié)構(gòu)：特殊結(jié)構(gòu)：莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞細菌的結(jié)構(gòu) 脂蛋白脂多糖脂質(zhì)雙層特殊組分：特殊組分：外外膜膜革蘭陽性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭陰性菌革蘭染色革蘭染色法：革蘭染色法： 涂片 風(fēng)干 固定 結(jié)晶紫 碘液 95%乙醇 復(fù)紅1min1min脫色附：革蘭染色法附：革蘭染色法革蘭陽性菌肽聚糖聚糖骨架、四肽側(cè)鏈、五肽交聯(lián)橋青霉素作用點溶菌酶作用點N-乙酰葡糖胺N-乙酰胞壁酸革蘭陰性菌肽聚糖聚糖骨架、四肽側(cè)鏈革蘭陽性菌細胞壁特殊組分革蘭陽性菌細胞壁特殊

5、組分壁磷壁酸膜磷壁酸革蘭陰性菌細胞壁特殊組分革蘭陰性菌細胞壁特殊組分革蘭陰性菌細胞壁特殊組分革蘭陰性菌細胞壁特殊組分脂多糖脂多糖(lipopolysaccharid,LPS) 脂質(zhì)雙層脂多糖(LPS):由脂質(zhì)A,核心多糖和特異性多糖組成脂質(zhì)A:內(nèi)毒素生物活性主要組分,無種屬 特異性核心多糖:有屬特異性特異多糖: G-菌的菌體抗原(O抗原), 有種特異性革蘭陽性菌與陰性菌細胞壁結(jié)構(gòu)比較革蘭陽性菌與陰性菌細胞壁結(jié)構(gòu)比較細胞壁 革蘭陽性菌革蘭陰性菌強度較堅韌較疏松厚度20-80nm10-15nm肽聚糖層數(shù)可多達50層1-2層肽聚糖含量占細胞壁干重50%-80%占細胞壁干重5%-20%磷壁酸+外膜+脂

6、蛋白+脂多糖+細胞壁的功能細胞壁的功能 一、保持細菌細胞具有一定的形狀；二、具有保護作用，防止細菌在低滲溶液中發(fā)生破裂； 三、 對有鞭毛的細菌來說，細胞壁的存在是鞭毛運動 的必要條件； 四、 特異性抗原與細菌的血清型分類有關(guān)；五、某些成分與致病有關(guān) ：A群鏈球菌膜磷壁酸 抗吞噬作用金黃色葡萄球菌A蛋白 抗吞噬等作用革蘭陰性菌脂多糖 多種生物學(xué)效應(yīng) 細胞膜電鏡照片細胞膜電鏡照片載體蛋白載體蛋白脂質(zhì)雙層脂質(zhì)雙層 細胞膜模式結(jié)構(gòu)圖異染顆粒異染顆粒質(zhì)粒質(zhì)粒細菌核蛋白體細菌核蛋白體電鏡照片細胞核細胞核細菌是原核細胞，不具有成形的核。細菌的遺傳物質(zhì)稱為核質(zhì)或擬核，無核膜、核仁和有絲分裂器。功能與真核細胞的

7、染色體相似。核質(zhì)由單一密閉環(huán)狀DNA分子反復(fù)回旋卷曲盤繞組成松散網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。特殊結(jié)構(gòu)莢膜的功能莢膜的功能莢莢 膜膜肺炎鏈球菌產(chǎn)汽莢膜桿菌腦膜炎球菌鞭鞭 毛毛單毛菌單毛菌雙毛菌雙毛菌叢毛菌叢毛菌周毛菌周毛菌菌毛菌毛 1. 普通菌毛普通菌毛(ordinary pilus)2. 性菌毛性菌毛(sex pilus)芽 孢 炭疽芽胞桿菌肉毒梭菌肉毒梭菌破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡(light microscope)電子顯微鏡電子顯微鏡(electron microscope)腦膜炎球菌莢膜莢膜細菌細胞分裂的電鏡超薄切片圖 桿菌二分裂過程模式圖 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 沙門氏菌的菌落特征

8、 銅綠假單孢菌的菌落特征 弗氏志賀氏菌的菌落特征 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 放線菌的菌絲鏈霉菌的一般形態(tài)和構(gòu)造 放線菌的菌落特征 A：諾爾斯氏鏈霉菌； B：皮疽諾卡氏菌； C：酒紅指孢囊菌； D：游動放線菌； E：小單胞菌； F：皺雙孢馬杜拉放線菌產(chǎn)抗菌素的放線菌的菌落特征A：卡特利鏈霉菌； B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲鏈霉菌； F：生磺酸鏈霉菌霉菌的菌環(huán)和菌網(wǎng) a.菌環(huán)；b.簡單菌網(wǎng)；c.復(fù)雜菌網(wǎng) 麥角菌的菌核 節(jié)孢子：菌絲生長到一定階段時出現(xiàn)橫隔膜，然后從隔膜處斷裂而形成的細胞稱為節(jié)孢子。如白地霉產(chǎn)生的節(jié)孢子。 厚垣孢子：某些霉菌種類在菌絲中間或頂端發(fā)

9、生局部的細胞質(zhì)濃縮和細胞壁加厚，最后形成一些厚壁的休眠孢子，稱為厚垣孢子。如毛霉屬中的總狀毛霉。 孢囊孢子：在孢子囊內(nèi)形成的孢子叫孢囊孢子。孢子囊是由菌絲頂端細胞膨大而成，膨大部分的下方形成隔膜與菌絲隔開，膨大細胞的原生質(zhì)分化成許多小塊，每小塊可發(fā)育成一個孢子。孢囊孢子有兩種類型，一種為生鞭毛，能游動的叫游動孢子，如鞭毛菌亞門中的綿霉屬；另一種是不生鞭毛，不能游動的叫靜孢子，如接合菌亞門中的根霉屬。 霉菌的游動孢子 霉菌的靜孢子 左：毛霉的孢子囊；中：孢子囊壁破裂，露出靜孢子；右：囊軸 分生孢子：是在生殖菌絲頂端或已分化的分生孢子梗上形成的孢子，分生孢子有單生、成鏈或成簇等排列方式，是子囊菌和

10、半知菌亞門的霉菌產(chǎn)生的一類無性孢子。 霉菌分生孢子的著生和形態(tài)（青霉、曲霉、鐮刀霉） 曲霉的分生孢子梗和頂囊上的分生孢子 鐮刀霉的鐮刀形大分生孢子 青霉的帚狀分生孢子梗和分生孢子 曲霉的分生孢子頭彩圖 卵孢子：菌絲分化成形狀不同的雄器和藏卵器，雄器與藏卵器結(jié)合后所形成的有性孢子叫卵孢子。 霉菌的卵孢子1.雄器；2. 藏卵器；3. 卵孢子 接合孢子：由菌絲分化成兩個形狀相同、但性別不同的配子囊結(jié)合而形成的有性孢子叫接合孢子。 霉菌的接合孢子左：毛霉的(+)和(-)型菌絲在交界處結(jié)合產(chǎn)生黑色的帶狀，肉眼可見；右：取小黑點用顯微鏡觀察所看到的接合孢子 子囊孢子：菌絲分化成產(chǎn)囊器和雄器，兩者結(jié)合形成子

11、囊，在子囊內(nèi)形成的有性孢子即為子囊孢子。 霉菌的子囊孢子 a子囊果；b子囊；c偽側(cè)絲；d子囊孢子 擔(dān)孢子：菌絲經(jīng)過特殊的分化和有性結(jié)合形成擔(dān)子，在擔(dān)子上形成的有性孢子即為擔(dān)孢子。 擔(dān)孢子的形成過程示意圖 a-d雙核細胞；e核融合；f-g核分裂；h擔(dān)孢子形成；i擔(dān)孢子成熟并釋放 各種曲霉的菌落 各種病原真菌的菌落 青霉的菌落 青霉的菌落 酵母菌的細胞形態(tài) 酵母菌的細胞形態(tài) 酵母菌細胞結(jié)構(gòu)的 顯微照片 酵母菌的無性繁殖芽殖：酵母菌最常見的無性繁殖方式是芽殖。芽殖發(fā)生在細胞壁的預(yù)定點上，此點被稱為芽痕，每個酵母細胞有一至多個芽痕。成熟的酵母細胞長出芽體，母細胞的細胞核分裂成兩個子核，一個隨母細胞的細

12、胞質(zhì)進入芽體內(nèi)，當(dāng)芽體接近母細胞大小時，自母細胞脫落成為新個體，如此繼續(xù)出芽。如果酵母菌生長旺盛，在芽體尚未自母細胞脫落前，即可在芽體上又長出新的芽體，最后形成假菌絲狀。 酵母菌的芽殖過程 1泡；2小管；3核；4液泡 酵母菌假菌絲的形成 圖中1、2、3、4 是出芽的順序 裂殖：是少數(shù)酵母菌進行的無性繁殖方式，類似于細菌的裂殖。其過程是細胞延長，核分裂為二，細胞中央出現(xiàn)隔膜，將細胞橫分為兩個具有單核的子細胞。 酵母菌的有性繁殖 酵母菌是以形成子囊和子囊孢子的方式進行無性繁殖的。兩個臨近的酵母細胞各自伸出一根管狀的原生質(zhì)突起，隨即相互接觸、融合，并形成一個通道，兩個細胞核在此通道內(nèi)結(jié)合，形成雙倍體

13、細胞核，然后進行減數(shù)分裂，形成4個或8個細胞核。每一子核與其周圍的原生質(zhì)形成孢子，即為子囊孢子，形成子囊孢子的細胞稱為子囊。 酵母菌子囊孢子的形成過程 1、2、3、4：兩個細胞結(jié)合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子 各種酵母菌的菌落 啤酒酵母的菌落 紅酵母的菌落 吸附是噬菌體與菌體表面受體發(fā)生特異性結(jié)合的過程，其特異性取決于噬菌體蛋白與宿主菌表面受體分子結(jié)構(gòu)的互補性。噬斑噬斑熒光假單胞菌毒性噬菌體毒性噬菌體 微生物的營養(yǎng)類型 營養(yǎng)類型營養(yǎng)類型 主要（或唯一主要（或唯一）碳源）碳源 能源能源 代表菌代表菌 光能自養(yǎng)型光能自養(yǎng)型 二氧化碳二氧化碳 光能光能 藍細菌藍細菌

14、光能異養(yǎng)型光能異養(yǎng)型 有機物有機物 光能 紅螺細菌紅螺細菌 化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型 二氧化碳二氧化碳 無機物無機物 硫桿菌硫桿菌 化能異養(yǎng)型化能異養(yǎng)型 有機物有機物 有機物有機物 大腸桿菌大腸桿菌 圖2：細菌生長的典型曲線 (.延遲期， .對數(shù)期， .穩(wěn)定期， .衰亡期)四微生物在人體中的分布皮膚上微生物寄生示意圖皮膚菌叢呼吸道菌叢口腔菌叢胃腸道菌叢Disinfection殺死物體上病原微生物的方法殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細菌并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物或非病原微生物消毒：消毒：殺滅物體上所有微生物的方法。殺滅物體上所有微生物的方法。 滅菌：滅菌：Steri

15、lization不存在活菌的意思。不存在活菌的意思。 無菌：無菌：Asepsis防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法。防腐：防腐：Antisepsis(表表 壓壓排出不同程度冷空氣時高壓鍋內(nèi)溫度（排出不同程度冷空氣時高壓鍋內(nèi)溫度（）磅磅/英寸英寸2kg/cm2全排出全排出排出排出2/3排出排出1/3未排出未排出100.7011510910090151.05121115109100 熱力滅菌法熱力滅菌法 高溫殺滅細菌焚燒-最徹底的滅菌方法燒灼-直接用火焰滅菌方法干烤-加熱220 2小時干熱滅菌法干熱滅菌法濕熱滅菌與干熱滅菌的比較濕熱滅菌與干熱滅菌的比較濕熱滅菌法濕熱滅

16、菌法加壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法 121 2030分鐘煮沸消毒法水煮100 5分鐘(繁殖體)2小時(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100 1530分鐘(繁殖體)反復(fù)多次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（61 30分鐘）殺滅致病菌同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好原因原因1、濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱濕熱的蒸汽有潛熱類別類別作用機制作用機制常用種類常用種類用途用途酚類酚類蛋白變性，細胞膜蛋白變性，細胞膜損傷損傷石炭酸石炭酸地面、器具表面、皮膚地面、器

17、具表面、皮膚消毒消毒醇類醇類蛋白變性蛋白變性乙醇乙醇皮膚、體溫計消毒皮膚、體溫計消毒氧化劑氧化劑氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀高錳酸鉀皮膚、尿道、蔬菜、水皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒果消毒重金屬鹽重金屬鹽氧化、蛋白酶變性氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒毒氧化劑氧化劑氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘過氧乙酸、碘酒酒塑料、玻璃器材、皮膚塑料、玻璃器材、皮膚消毒消毒表面活性表面活性劑劑蛋白變性，細胞膜蛋白變性，細胞膜損傷損傷新潔而滅新潔而滅手術(shù)洗手、浸泡手術(shù)器手術(shù)洗手、浸泡手術(shù)器械械常用消毒劑的種類和用途常用消毒劑的種類和用途影響消毒劑作

18、用的因素消毒劑消毒劑細菌細菌 環(huán)境環(huán)境種類種類濃度濃度作用時間作用時間菌齡菌齡種類種類有機物有機物溫度溫度酸堿度酸堿度選擇適當(dāng)?shù)南緞┑投镜投緝r廉價廉低破壞低破壞易貯藏易貯藏方便方便有效有效在藥品生產(chǎn)中，由于受到各種要素（制藥廠房環(huán)境的空氣、制藥用水、操作人員、物料、設(shè)備等）的影響，都可能導(dǎo)致藥品的微生物污染。因此，GMP對各種要素都提出了防止污染的基本要求。中國藥典微生物限度檢查法規(guī)定的檢查項目包括細菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)和控制菌檢查。環(huán)境土壤水空氣人體皮膚地板微生物量104-101010-10410-1051-10410-103單位：個/g在藥品生產(chǎn)中，減少空氣中微生物數(shù)量的方法有多種，常用的有以下3種方法： 空氣潔凈技術(shù)采用的過濾方法 過濾是最常用的方法。過濾介質(zhì)種類很多，例如：纖維素、玻璃棉或人造纖維等?？諝鈨艋b置可用于整個房間如無菌操作室