栽培蒔花生SSR遺傳圖譜的構(gòu)建

1、編號(hào)no.:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文論文題目 栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建學(xué)生姓名 李國(guó)亮 學(xué)號(hào)2009014010201成績(jī) 866學(xué)院 農(nóng)學(xué)院專業(yè)班級(jí)指導(dǎo)教師姓名劉立峰指導(dǎo)教師職稱材料目錄：1、任務(wù)書2、開題報(bào)告（含文獻(xiàn)綜述）3、指導(dǎo)教師評(píng)閱書4、答辯記錄表5. 論文正文6. 其它材料河北農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文任務(wù)書學(xué) 院：農(nóng)學(xué)院教師姓名：劉立峰職 稱：教授2012年 3月 25日®學(xué) 農(nóng)論文 題目目源 %|和因1s體圖缺鮮 圖 基ch倍傳間譜 鎖 于ara四ltc源h駅毓 尅 亠 br"三 土、you彳撐 已亠一 八c花f花 群 0 e 彳 a h 、z ft-亠允

2、s 匕口 mif= a 一 th* xx. 7丿 o 帖和ar一p.標(biāo) 自礎(chǔ) 軸岸1(一。fl述 組基 沖刪組rf上 重論 lk 一乂一 n 1u - 91 一 “己巨勿現(xiàn)于 的理 行襯生卅發(fā)基 建定 m坯花卅究。 構(gòu)奠 研慢 交隆 諾吒1s畦期緩 雜克 俗綁c1斛早展 生與 溝睥z昶但進(jìn) 花位 陽(yáng)卿(ahi。建 黑定 基霑屬袒視構(gòu) 與因 )ix>生耶套譜 紅基 意 分、ga4x構(gòu)恕直 本劃 的 位w的多報(bào) ， 目 定hyq譜乏見 譜bf冬 二g二s )51常 紙b2非 附 砒建 另 器構(gòu) 可 埋譜 , &®' 等 眩因 龐 一廠基 卄 w生 躋 進(jìn)花 機(jī) 軋行

3、 糾 紳進(jìn) 可 勺于 巒 勁對(duì) b 噸性 碑 紳人口 件 翳因 條 尢基 究系 倆 衲交 : £ >0 杞 行刊組 性 料才該 可1.系2技術(shù)可行性本研究采用ssr標(biāo)記技術(shù)對(duì)花生組基因進(jìn)行遺傳圖譜構(gòu)建，該技術(shù)在棉花，玉米, 小麥，大豆，大白菜，果樹等植物的遺傳圖譜構(gòu)建中，都已采用，而且效果良好；在 此之前，在花生遺傳圖譜構(gòu)建中也已應(yīng)用，取得非常好的效果。3.設(shè)備可行性本研究所使用的儀器設(shè)備都由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)花生遺傳育種研究所提供，設(shè)備齊 全，并且儀器先進(jìn)，完全能滿足本實(shí)驗(yàn)的要求。進(jìn)度安排：（可另附紙）2012 年 45 月明確研究目標(biāo)和研究方法，制定實(shí)際可行的實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和實(shí)驗(yàn)方案2

4、012 年 5-7 月種植花生材料，期間查閱文獻(xiàn)，確定具體的實(shí)驗(yàn)方案。2012年7月初按計(jì)劃進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，必要時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃做部分修改。2012年7月初一9月提取花生組dna,并做聚丙烯酰胺凝膠電泳，讀取數(shù)據(jù)。2012 年 9-10 月收獲花生。2012年10月一2013年5月進(jìn)行花生拷種，記錄數(shù)據(jù)。2013 年 5-6 月完成畢業(yè)論文。專家意見：試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，研究方法可行，進(jìn)度安排適度可行，具備完成試驗(yàn)的條件，具有 一定的研究意義，同意按計(jì)劃開題。專家簽字：2012年4 月 1日學(xué)院意見：（是否同意立題）院長(zhǎng):農(nóng) 學(xué)院 農(nóng)學(xué)專業(yè)李國(guó)亮學(xué)生：現(xiàn)把 2012-2013 學(xué)年,第 二 學(xué)期的畢業(yè)論文安

5、排下達(dá)給你, 你本學(xué)期承擔(dān)的畢業(yè)論文任務(wù)如下：依據(jù)本任務(wù)書中論文題目.目的意義.可行性分析的內(nèi)容完成開題報(bào)2、告。按照開題報(bào)告的要求按期完成畢業(yè)論文各項(xiàng)工作的實(shí)施。完成畢業(yè)論文的撰寫。4完成畢業(yè)論文的答辯。請(qǐng)按相關(guān)要求完成畢業(yè)論文任務(wù)。教師簽字:2012 年 4 月 20 h河北農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文開題報(bào)告題 目：栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建學(xué) 院：農(nóng)學(xué)院學(xué)生姓名：李國(guó)亮專 業(yè)：農(nóng)學(xué)班級(jí)學(xué)號(hào)：2009014010201指導(dǎo)教師姓名：劉立峰指導(dǎo)教師職稱：教授2012 年 9 月 25 h學(xué)生姓名李國(guó)亮專業(yè)班級(jí)農(nóng)學(xué)0902班學(xué)號(hào)2009014010201指導(dǎo)教師劉立峰職稱教授所在學(xué)院農(nóng)學(xué)院論文名

6、稱栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建選題依據(jù)：(論文的理論依據(jù)、目的意義?？闪砀郊?分子遺傳圖譜是植物基因組結(jié)構(gòu)分析和比較的有力工具，已被廣泛應(yīng)用于基因定 位、圖位克隆、比較基因組學(xué)和分子標(biāo)記輔助育種等研究。花生栽培種arachis hypogaea l.)屬落花生屬(ar a ch is花生區(qū)組(ar a ch is section),異源四倍體(2n=4x=40, aabb), 是國(guó)際上重要的油料作物之一。一直以來(lái)，花生栽培種分子遺傳圖譜的構(gòu)建備受各國(guó)學(xué)者 重視。但早期研究發(fā)現(xiàn)rflp、rapd和aflp在花生栽培種間缺乏多態(tài)性，致使遺傳圖譜構(gòu) 建進(jìn)展緩慢?；谏鲜鰳?biāo)記構(gòu)建的花生栽培種遺傳圖譜

7、鮮見報(bào)道。雖然herselman等曾 利用aflp標(biāo)記在栽培種上構(gòu)建了部分連鎖圖，但該連鎖圖只包含12個(gè)標(biāo)記。ssr標(biāo)記又稱 為微衛(wèi)星(micro satel lite)標(biāo)記或簡(jiǎn)單序列重復(fù)(simple sequence repeat, ssr ) 標(biāo)記；aflp標(biāo)記技術(shù)首先要建立aflp分析體系；est-ssr標(biāo)記通過(guò)misa軟件分析est庫(kù)中 共包含的位點(diǎn)數(shù)；另外，還利用rflp, rapd等標(biāo)記繪制花生遺傳圖譜。近年來(lái)，系列研究 表明ssr在花生栽培種間具有較豐富的多態(tài)性，使利用ssr標(biāo)記構(gòu)建花生栽培種遺傳圖 譜成為可能。然而，現(xiàn)有的花生ssr引物數(shù)量仍不能滿足圖譜構(gòu)建的需求。近期，大量

8、快 速增長(zhǎng)的est數(shù)據(jù)成為ssr的重要來(lái)源，并為ssr標(biāo)記的開發(fā)提供了一條新的途徑。本研究以黑花生和四粒紅為親本，通過(guò)雜交構(gòu)建包含251個(gè)礙重組自交系的遺傳作 圖群體。采用1021對(duì)ssr引物對(duì)親本進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，在親本中共篩選出75對(duì)多態(tài)性引物。 利用作圖群體對(duì)多態(tài)性ssr位點(diǎn)進(jìn)行遺傳連鎖分析，獲得包含29個(gè)ssr標(biāo)記，涉及7個(gè)連鎖 群，總長(zhǎng)352.7cm,平均圖距為12.2cm的花生栽培種遺傳圖譜。文獻(xiàn)綜述：(可另附紙)花生栽培種(arachis hypogaea l.)屬落花生屬(ara ch is)花生區(qū)組(arachis section),異源四倍體(2n=4x=40, aabb),

9、是國(guó)際上重要的油料作物之一。一直以來(lái)，花 生栽培種分子遺傳圖譜的構(gòu)建備受各國(guó)學(xué)者重視。但早期研究發(fā)現(xiàn)rflp、rapd和aflp 在花生栽培種間缺乏多態(tài)性，致使遺傳圖譜構(gòu)建進(jìn)展緩慢。詹世雄等以南方花生主產(chǎn)區(qū)主栽的40個(gè)珍珠豆型花生為材料，利用62對(duì)ssr標(biāo)記 引物進(jìn)行分子標(biāo)記帶型分析，從中篩選出12對(duì)多態(tài)性好、帶型清晰的ssr標(biāo)記引物進(jìn)行 指紋圖譜構(gòu)建，共獲得88個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。王傳堂等研究在建立適合花生aflp分析的dna 提取流程的基礎(chǔ)上，建立了花生aflp分析的技術(shù)方案。aflp分析結(jié)果表明，6個(gè)花生雜 交親本間存在一定差異。四對(duì)引物共計(jì)擴(kuò)增出307條長(zhǎng)度不同的條帶。其中多態(tài)性條帶 為16

10、0條，占總條帶數(shù)的52.1%。本研究篩選獲得了多態(tài)性程度高的雜交親本，為進(jìn)一 步構(gòu)建分子連鎖圖譜創(chuàng)造了條件。漆燕等為了檢測(cè)花生品種間抗病基因同源序列(rga) 的單核昔酸差異，對(duì)影響花生rga-sscp的電泳溫度、電壓、膠濃度、交聯(lián)度、變性劑等 因素進(jìn)行了優(yōu)化，從而獲得了電泳條帶細(xì)而清晰的sscp圖。該體系的建立對(duì)rga-sscp 標(biāo)記用于花生基因定位、遺傳圖譜構(gòu)建、標(biāo)記輔助選擇等具有重要意義。肖楊等利用抗、 感矮化病毒病的花生品種icgv86699和遠(yuǎn)雜9102為親本配制雜交組合，構(gòu)建重組近交系 群體(ril),采用ssr技術(shù)和bsa分析方法，結(jié)合f6各個(gè)家系接種病毒后elisa的鑒定 結(jié)果

11、，得到1個(gè)與花生矮化病毒病抗性連鎖的分子標(biāo)記xy38,從而進(jìn)行指紋圖譜構(gòu)建， 共獲得106個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。王金彥等利用ncbi的gene bank數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的花生861 32條est序列以及利用高油 酸品種e12所創(chuàng)建的cdna文庫(kù)中的12501條est序列，對(duì)這些序列進(jìn)行前期處理，總共獲得 非冗余且拼接較長(zhǎng)的singletonll260條，contig9972條。通過(guò)misa軟件分析發(fā)現(xiàn)兩個(gè)est 庫(kù)中共包含有3104個(gè)ssr位點(diǎn)，占到總共非冗余序列的11.08%。黃莉等以遠(yuǎn)雜9102 x中花 5號(hào)雜交后代衍生的重組近交系f8代家系為材料，在含油量測(cè)試的基礎(chǔ)上，選用10份低 油材料(平均含油

12、量52. 91%)、12份高油材料(平均含油量58. 85%)以及親本進(jìn)行ssr引物篩 選，綜合分析ril群體和自然體的研究結(jié)果表明，標(biāo)記2a5-250/240可用于花生含油量分 子標(biāo)記輔助選擇，從而構(gòu)建出指示含油量的36個(gè)位點(diǎn)。洪彥彬等研究以粵油13和阜95-5 為親本，通過(guò)雜交構(gòu)建包含184個(gè)f6重組自交系的遺傳作圖群體。采用652對(duì)genomic-ssr 引物和392對(duì)est-ssr引物對(duì)親本進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，從中篩選出121對(duì)多態(tài)性引物，在親 本中共檢測(cè)到123個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，與前人構(gòu)建的花生野生種(a. duranens i s * a. stenosperma, aa genome)

13、ssr遺傳圖譜比較，初步確定本研究構(gòu)建的遺傳圖譜中有11 個(gè)連鎖群與野生種遺傳圖譜的6個(gè)連鎖群存在同源關(guān)系。翁躍進(jìn)等利用aflp技術(shù)對(duì)從國(guó)際 半干旱所(icr1sat)引進(jìn)的9份花生抗旱品種繪制指紋圖譜，通過(guò)引物eaca和與之匹 配的mcag和m-cat,在3006000bp的范圍內(nèi)共獲得1577條aflp擴(kuò)增產(chǎn)物，每個(gè)品種有 主帶和次帶至少71條之多，其中10條為多態(tài)性的帶紋。王傳堂等采用4對(duì)rga引物、9份花 生材料進(jìn)行pcr擴(kuò)增，只有引物nlrr invl/inv2擴(kuò)增出產(chǎn)物。采用該對(duì)引物擴(kuò)增，18 份材料中只有10份獲得產(chǎn)物?？偣搏@得58條遷移率不同的帶，其中多態(tài)性帶56條。根據(jù) 條帶

14、共享程度計(jì)算出的帶型相似指數(shù)為0.188-0. 986。10份材料可以按條帶數(shù)目多寡分成兩大類?；ㄉz傳連鎖圖譜的發(fā)展趨勢(shì)是高飽和化、實(shí)用化和通用化。高飽和化即增加圖譜 上標(biāo)記的密度，高密度的遺傳連鎖圖譜有助于基因定位、物理圖譜的構(gòu)建、基于圖譜的 基因克隆和精確分析數(shù)量性狀基因；實(shí)用化即遺傳連鎖圖譜可以直接應(yīng)用到花生育種工 作中，利用遺傳連鎖圖譜導(dǎo)入野生種的有益等位基因；通用化即遺傳連鎖圖譜的信息可 以在種內(nèi)甚至種間交流，而不局限于作圖親本。相信隨著ssr分子標(biāo)記技術(shù)的進(jìn)一步完善 和發(fā)展，加上應(yīng)用成本的不斷降低，ssr標(biāo)記必將給花生基因遺傳圖譜構(gòu)建的研究工作帶 來(lái)新的革命。參考文獻(xiàn)：1 koc

15、hertqhalwardt,branch w d,simpson c e.rflp variability in peanut (a rack is hypogaea l.) cultivars and wild speciesj.theor appl genet, 1991,81:565-570.2subramanian v,gurtu srao r c n,nigam s n.identification of dna polymorphism in cultivated groundnut using random amplified polymorphic dna (papd) ass

16、ay j. genome, 2000, 43:656-660.黃莉,趙新燕，張文華，樊志明,任小平，廖們壽，姜惹芳，陳玉寧等利用ri.l群體和自然群體檢測(cè)與花生含油量相關(guān) 的 ssr 標(biāo)記j.作物學(xué)報(bào) acta agronomica sinica 2011, 37(11) : 1967-1974.4milla s rjsleib t g,stalker h t.taxonomic relationships among arachis sect. arachis species as revealed by aflp markers j.genome, 2005, & 1一11詹世雄，

17、劉冠明，鄭奕雄，楊靈，張平湖，莊東紅等40個(gè)珍珠豆型花生ssr指紋圖譜的構(gòu)建j.研究報(bào)告1001- 4705( 2012) 06-0023-05.6 漆燕,姚海軍，曹虹，郭輝玉等pcr-sscp分析法及其研究進(jìn)展j生物技術(shù),1996,6( 4): 1-4.7 肖洋,晏立英，雷永，黃家權(quán)，屢伯壽等花生矮化病毒病抗性ssr標(biāo)記中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)j1.2011年12月2011, 33( 6) : 561-566.黃莉,趙新燕，張文華，樊志明，任小平，廖們壽，姜惹芳，陳玉寧等利用ril群體和自然群體檢測(cè)與花生含油帑湘關(guān) 的 ssr 標(biāo)記j.作物學(xué)報(bào) acta agronomica sinica 2011

18、, 37(11) : 1967-1974.9 洪彥彬，梁炫強(qiáng),陳小平，劉海燕,周桂元，李少雄,溫世杰等花生栽培種ssr遺傳圖譜的構(gòu)建j.作物學(xué)報(bào)acta agronomica sinica 2009, 35(3) : 395-402.10 becker jet al. combined mapping o f aflp and rflp marker s in barley j. mol gen genet, 1995, 249: 6573.11 王傳童，楊新，陳殿緒，張建成，劉光臻等花生dna分子標(biāo)記的研究j.花生學(xué)報(bào)2005, 34( 1) : 5-7.12 burow m d, simp

19、son c e, starr j l, paterson a h. transmission genetics of chromatin from a synthetic amphidiploids to cultivated peanut (arachis hypogaea l.): broadening the gene pool of a monophyletic polyploid speciesfj. genetics, 2001, 159: 823-837.13 halward t m, stalker h t, kochcrt g. development of an rflp

20、linkage map in diploid peanut spccicsj theor appl genet. 1993,87: 379-384研究方法、內(nèi)容：(可另附紙)1作圖群體的構(gòu)建以四粒紅為母本，黑花生為父本進(jìn)行雜交，經(jīng)過(guò)多代自交獲得包含251個(gè)單株的f7 重組自交系(ril)作圖群體。四粒紅為紅色種皮，小果，果殼薄，分枝多，中熟，多粒型; 黑花生為黑色種皮，大果，果殼厚，分枝少，晚熟，普通型。2花生基因組dna提取采用ctab法提取基因組dna13 ( 1 )取01克新鮮葉。(2 )用液氮將研缽充分冷卻， 然后將葉片放入研缽中，再加液氮，迅速研磨。(3)將研磨好的粉末加入l5ml離

21、心管內(nèi)， 再加如800u1ctab提取緩沖液混勻，加蓋,置于65c水浴鍋內(nèi)45分鐘-1小時(shí)。(4)加等體 積氯仿：異戊醇(24:l),10000rpm,10mino ( 5 )取上清液于另一新的離心管，加無(wú)水乙醇 (等體積),靜置(-20°c), loooorpm, 5mine (6 )去上清夜，75%的乙醇洗滌，loooorpm, 5min,(兩次重復(fù))。(7 )打開蓋子,隔夜曬干。(8 )次日加200ul的0. 5 x te緩沖液或ddh20。 dna稀釋后，利用neno-drop-1000型微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定od260、od280的吸光度、dna 濃度和od260/od28

22、0的比值。dna的母液將按照比例全部稀釋為25ng/ul濃度用于群體基因 型檢測(cè)。3 ssr分析共用1021對(duì)ssr引物用于本研究分析。pcr在pe9700熱循環(huán)儀(美國(guó)abi公司生產(chǎn))上進(jìn) 行。首先在親本間篩選多態(tài)性引物,將其用于下一步的作圖群體分析。pcr體系(15ml)： mixture(康為)7. 5ul,正反引物各0. 7ul,ddh2o3. 6ul,dna模板2. 5ul 反應(yīng)程序：94c預(yù) 變性5分鐘，94變性45秒，55退火45秒，72c延伸，35個(gè)循環(huán)，72度終延伸10分鐘， 4c保存。pcr產(chǎn)物在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。點(diǎn)樣量2ul。電泳條件：250v, 100

23、w, 40mino銀染過(guò)程為：(1 )固定：10%的酒精和0. 5%的冰乙酸固定2次，每次6分鐘。(2 ) 0. 2%的agn03溶液滲透10-12分鐘。(3) ddh20清洗2次。( 4 ) 0. 002%的硫代硫酸鈉溶 液置換30秒。(5 )含1. 5%的naoh,甲醛0. 4%的溶液顯色。4數(shù)據(jù)記載及連鎖分析作圖群體各株系中帶型與母本相同的記為“護(hù)，與父本相同的記為“b",帶型不清 或者缺失者記為“-”。運(yùn)用joinmap4. 0構(gòu)建遺傳圖譜。先用newproject命令創(chuàng)建一個(gè) 新的文件夾，load data命令導(dǎo)入標(biāo)記數(shù)據(jù)，再用命令individual genot freq

24、排除缺失 數(shù)據(jù)過(guò)多的單株，用locus genot freq命令分析標(biāo)記的偏分離情況，然后用group命令 進(jìn)行分組，最后map命令構(gòu)建連鎖圖譜，采用kosambi函數(shù)計(jì)算圖距進(jìn)度安排：（可另附紙）2012年3月下達(dá)任務(wù)書2012 年 4-5 月查閱資料，明確研究目標(biāo)和研究方法，制定實(shí)際可行的實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和實(shí)驗(yàn)方案2012 年 5-7 月種植花生材料，進(jìn)行田間管理，期間查閱文獻(xiàn)，確定具體的實(shí)驗(yàn)方案，并準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn) 藥品。2012年7月初按計(jì)劃進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定實(shí)驗(yàn)方法的可行性，必要時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃做部分修改。2012年7月初一9月摘取綠色花生葉片，放置在低溫冰箱中保存，用ctab法提取花生組dna,并做聚丙

25、 烯酰胺凝膠電泳，讀取數(shù)據(jù)。2012 年 9-10 月收獲花生，并將材料分類。2012年10月一2013年5月進(jìn)行花生拷種，記錄數(shù)據(jù)。整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果并撰寫畢業(yè)論文。2013 年 5-6 月完成畢業(yè)論文。指導(dǎo)教師意見：試驗(yàn)?zāi)康拿鞔_，相關(guān)文獻(xiàn)查閱認(rèn)真，試驗(yàn)條件具備，工作量適度，時(shí)間進(jìn)度安排合理，試驗(yàn)可行。指導(dǎo)教師：2012年 9月30日審核小組成員姓名職稱備注姓名職稱備注王省芬教授張艷講師李志坤副教授李文龍講師李喜煥副教授開題報(bào)告記錄：該生闡述的花生遺傳圖譜構(gòu)建的全過(guò)程，介紹了 ssr分子標(biāo)記技術(shù)在花生圖譜構(gòu)建過(guò) 程中的重要作用以及今后的發(fā)展趨勢(shì)，語(yǔ)言流利，思路清晰，層次分明，回答疑問(wèn)

26、較準(zhǔn)確， 研究方法可行。審核小組評(píng)語(yǔ)：試驗(yàn)?zāi)康拿鞔_，相關(guān)文獻(xiàn)查閱認(rèn)真，試驗(yàn)條件具備，工作量適度，時(shí)間安排合理，試驗(yàn)可行。審核小組組長(zhǎng)：（簽字）2012年10月20日學(xué)院意見：院長(zhǎng)：年月日河北農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文指導(dǎo)教師評(píng)閱書學(xué)生姓名：李國(guó)亮學(xué) 號(hào)：2009014010201專業(yè)班級(jí)：農(nóng)學(xué)0902班所在學(xué)院：農(nóng)學(xué)院論文題目：栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建指導(dǎo)教師評(píng)語(yǔ)：（1、對(duì)學(xué)生基礎(chǔ)理論、專業(yè)知識(shí)、獨(dú)立工作能力及學(xué)風(fēng)的評(píng)語(yǔ)；2、對(duì)論文 選題意義、引用資料；實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性；論文的創(chuàng)新點(diǎn)及寫作的規(guī)范性、邏輯性； 論文的不足之處等進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明）該生在進(jìn)行畢業(yè)論文試驗(yàn)期間，能夠認(rèn)真查閱相關(guān)資料，

27、善于發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并能 夠熟練運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決問(wèn)題。對(duì)老師交給的任務(wù)積極執(zhí)行，并較好完成，具有 較強(qiáng)的動(dòng)手能力和較強(qiáng)的團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神。論文旨在研究以黑花生和四粒紅為親本，雜交后代產(chǎn)生的重組自交系f7為材 料，通過(guò)ssr分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)251個(gè)株系進(jìn)行基因圖譜構(gòu)建，內(nèi)容詳細(xì)具體。 本文閱讀、引用文獻(xiàn)資料的范圍較廣，較全面的了解本領(lǐng)域的學(xué)術(shù)動(dòng)態(tài)，具有較 強(qiáng)的綜合分析能力。論文立題依據(jù)充分，撰寫規(guī)范，語(yǔ)言流暢，條理清晰，層次分明，試驗(yàn)方法 正確可行，引用文獻(xiàn)恰當(dāng)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)具有一定的可靠性，符合科技論文的寫作要 求。成績(jī)?cè)u(píng)定：86. 6是否同意答辯：綜上所述，該同學(xué)已經(jīng)達(dá)到了本科生的培養(yǎng)要求，同意該同學(xué)參加畢

28、業(yè)論文答 辯指導(dǎo)教師（簽名）:2013年5月 15日河北農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文答辯評(píng)分表評(píng)分指標(biāo)一分值評(píng)價(jià)內(nèi)容得分論文選題10選題有重要理論意義或?qū)嵱脙r(jià)值。立題依據(jù)充分。文獻(xiàn)引用12閱讀、引用文獻(xiàn)資料較廣泛，較全面了解本領(lǐng)域?qū)W術(shù)動(dòng) 態(tài)，綜合分析能力較強(qiáng)。論文難度 及工作量14難度較大，工作量大。論文成果 的創(chuàng)新性12有獨(dú)到見解，有較大的創(chuàng)新性成果。理論基礎(chǔ)與 科研能力16具有堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)理論和系統(tǒng)的專門知識(shí)，具有較強(qiáng)的獨(dú) 立從事科研工作的能力，研究方法和技術(shù)體系得當(dāng)。寫作能力16條理清楚，層次分明，說(shuō)理透徹，文筆流暢，表格、繪 圖準(zhǔn)確規(guī)范，中外文摘要簡(jiǎn)明扼要，語(yǔ)句通順，語(yǔ)法正 確，符合科技寫作規(guī)范

29、。答辯報(bào)告10能簡(jiǎn)明扼要、重點(diǎn)突出地闡述論文或設(shè)計(jì)的主要內(nèi)容， 有新見解，結(jié)論明確；時(shí)間掌握恰當(dāng)?；卮饐?wèn)題10思維敏捷，邏輯性強(qiáng)，準(zhǔn)確流利地回答各種問(wèn)題。總分10086. 6注：本表為答辯小組成員評(píng)分用表，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照河北農(nóng)業(yè)大學(xué)畢業(yè)論文質(zhì)量評(píng)定參考標(biāo)準(zhǔn)河北農(nóng)業(yè)大學(xué)2013屆本科畢業(yè)論文答辯記錄表所在學(xué)院：農(nóng)學(xué)院專業(yè)班級(jí)：農(nóng)學(xué)時(shí)間：2013年6月6日學(xué)生姓名李國(guó)亮學(xué)號(hào)2009014010201指導(dǎo)教師姓名劉立峰職稱教授畢業(yè)論文題目：栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建答辯小組成員姓名職稱成績(jī)姓名職稱成績(jī)王省芬教授87李文龍講師87李喜煥副教授85李志坤副教授85張艷講師88答辯小組評(píng)語(yǔ)：該生闡述的花

30、生遺傳圖譜構(gòu)建的全過(guò)程,介紹了 ssr分子標(biāo)記技術(shù)在花生圖譜構(gòu)建過(guò)程中的重要作用以及今后的發(fā)展趨勢(shì)，語(yǔ)言流利，思路清晰，層次分明，回答疑問(wèn)較準(zhǔn)確。 答辯小組組長(zhǎng)：（簽字）2013年 6月 6日答辯成績(jī)：86. 6注：本表與學(xué)生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）一同在學(xué)院存檔（必須用鋼筆書寫）河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院畢業(yè)論文題 目:栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建專業(yè)班級(jí)：農(nóng)學(xué)0902班學(xué) 號(hào)：2009014010201學(xué)生姓名：李國(guó)亮指導(dǎo)教師：劉立峰教授二o 一三年六月一口栽培種花生ssr遺傳圖譜的構(gòu)建(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院 農(nóng)學(xué)0902班 保定071000李國(guó)亮)摘 要：花生栽培種品種間分了多態(tài)性和對(duì)缺乏，至今未構(gòu)建出

31、較完整的分了遺傳圖譜。木 研究以黑屁生和四粒紅為親木，通過(guò)雜交構(gòu)建包含251個(gè)f?重紐口交系的遺傳作圖群體。采 用1021對(duì)ssr引物對(duì)親木進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，在親木中共篩選出75對(duì)多態(tài)性引物。利用作圖 群體對(duì)多態(tài)性ssr位點(diǎn)進(jìn)行遺傳連鎖分析，獲得包含29個(gè)ssr標(biāo)記，涉及7個(gè)連鎖群，總長(zhǎng) 352.7cm,平均圖距為12.2cm的屁生栽培種遺傳圖譜。關(guān)鍵詞：栽培種花生；ssr；遺傳圖譜construction of genetic linkage map in peanut(arachis hypogaea l.)li guo liangclass of agronomy 0902,college

32、 of agronomy, agricultural university of hebeibaoding 071000abstract: molecular genetic map is a fundamental organizational tool for genomic research. however,a comprehensive genetic linkage map for peanut cultivars has not yet been developed due to extremely low levels of dna polymorphisms in culti

33、vated peanut.in this study,251 recombinant inbred lines(rils),derived from a cross between two peanut cultivars 5were used as mapping population.a total of 1021 ssr primers were used to detect the polymorphisms between the parental cultivars. of them, 75 ssr primer pairs were selected to analyze the

34、 ril population. a genetic linkage map consisting of 29 ssr loci in 7 linkage groups and covers 352.7cm with an average distance of 12.2cm of inter maker was constructedkey words: peanut (arachis hypogaea l.)cultivars;ssr;genetic linkage map目錄1 引言3li ssr 分子標(biāo)記技術(shù)31.2花牛分子遺傳圖譜的發(fā)展近況32材料與方法42作圖群體的構(gòu)建-11-2.

35、2花生基因纟fl dna 提取-11-2.3 ssr 分析-11-2.4數(shù)據(jù)記載及連鎖分析-11-3結(jié)果與分析53親本遺傳多態(tài)性的ssr分析53.2遺傳圖譜構(gòu)建54討論75結(jié)論7參考文獻(xiàn)：8致謝101引言1.1 ssr分子標(biāo)記技術(shù)ssr(simple sequence repeat)分子標(biāo)記又稱為簡(jiǎn)單序列重復(fù)或者微衛(wèi)星dna,是指以 少數(shù)幾個(gè)核昔酸(26個(gè))為單位串聯(lián)重復(fù)的dna序列，通常為23個(gè)堿基。該標(biāo)記是基于pcr 技術(shù)產(chǎn)生的，較其他分子標(biāo)記如rflp、rapd、aflp、ssr、sts、scar等具有多態(tài)性 高、共顯性、重復(fù)性好等特點(diǎn)。它是由幾個(gè)核昔酸組成的基序串聯(lián)重復(fù)而成的dna序列

36、， 長(zhǎng)度一般在200bp以下，廣泛分布于基因組的不同位置。其兩端序列多是相對(duì)保守的單拷 貝序列，根據(jù)這兩端的序列進(jìn)行特異引物的設(shè)計(jì)，再利用pcr技術(shù)對(duì)各位點(diǎn)的微衛(wèi)星序列 進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙酰胺凝膠電泳分離、顯色后，比較譜帶的相對(duì)遷移距離，分析 核心序列的長(zhǎng)度多態(tài)性。由于序列重復(fù)長(zhǎng)度的高度變異性以及不同遺傳材料中序列重復(fù)次 數(shù)的可變性，導(dǎo)致ssr長(zhǎng)度的高度變異，這一變異正是ssr標(biāo)記產(chǎn)生的基礎(chǔ)。ssr標(biāo)記屬于 特異性引物標(biāo)記，其引物的開發(fā)要在明確物種dna序列的前提下進(jìn)行。而花生基i大i組文庫(kù) 和dna序列尚不清楚，所以花生ssr引物的開發(fā)成本較高。目前以下3種方法常被用于花 生微衛(wèi)星dn

37、a標(biāo)記的開發(fā)：(1)基i大i組文庫(kù)法(2)生物信息學(xué)技術(shù)(3)同源轉(zhuǎn)移法。1.2花生分子遺傳圖譜的發(fā)展近況分了遺傳圖譜是植物基因組結(jié)構(gòu)分析和比較的自力工具，已被廣泛應(yīng)用于基因定位、 圖位克隆、比較基因組學(xué)和分了標(biāo)記輔助育種等研究。花生栽培種(arachis hypoaea l.)屬 落花生屬(arachis)牛區(qū)組(arachis section),界源四倍體(2n=4x=40,aabb),是國(guó)際上重要 的油料作物z-o 一直以來(lái)，花生栽培種分了遺傳圖譜的構(gòu)建備受各國(guó)學(xué)者重視。但早期研 究發(fā)現(xiàn)rflp、rapd和aflp在花牛栽培種間缺乏多態(tài)性i,致使遺傳圖譜構(gòu)建進(jìn)展緩慢。 基于上述標(biāo)記構(gòu)建的

38、花生栽培種遺傳圖譜鮮見報(bào)道。雖然herselman等曾利用aflp標(biāo)記 在栽培種上構(gòu)建了部分連鎖圖，但該連鎖圖只包含12個(gè)標(biāo)記。近年來(lái)，系列研究表明ssr在 花生栽培種間具有較豐富的多態(tài)性5勺，使利用ssr標(biāo)記構(gòu)建花生栽培種遺傳圖譜成為可 能。然而，現(xiàn)有的花生ssr引物數(shù)量仍不能滿足圖譜構(gòu)建的需求。r.k.varshney等認(rèn)為分 了標(biāo)記和基因遺傳連鎖圖譜構(gòu)建是現(xiàn)在作物育種的前提，以屁生為例，一個(gè)二倍體(2n=4x) 的花生品種的遺傳圖譜，可以用于栽培種中。木研究對(duì)一個(gè)四倍體栽培種花生進(jìn)行連鎖圖 譜構(gòu)建，得!1'|1145個(gè)ssr標(biāo)記。此結(jié)果總共反映出有135個(gè)ssr位點(diǎn)，分布在22個(gè)

39、連鎖群中。 姜慧芳等曾利用ssr標(biāo)記構(gòu)建花生栽培種分了遺傳圖譜，但由于當(dāng)時(shí)花生上可利用的 ssr引物數(shù)量不多，獲得包含29個(gè)標(biāo)記的部分連鎖圖。詹世雄9等以南方花生主產(chǎn)區(qū)主栽的 40個(gè)珍珠豆型花生為材料，利用62對(duì)ssr標(biāo)記引物進(jìn)行分了標(biāo)記帶型分析，從中篩選出12 對(duì)多態(tài)性好、帶型清晰的ssr標(biāo)記引物進(jìn)行指紋圖譜構(gòu)建，共獲得88個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。洪彥 彬等研究以粵油13和阜955為親木，通過(guò)雜交構(gòu)建包含184個(gè)f6重組口交系的遺傳作圖 群體。采用652對(duì)genomic-ssr引物和392對(duì)est-ssr引物對(duì)親木進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，從中篩選 出121對(duì)多態(tài)性引物，在親木中共檢測(cè)到123個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，與前

40、人構(gòu)建的尼牛野生種(a.duranensisa. stenosperma.w genome) ssr遺傳圖譜比較，初步確定本研究構(gòu)建的遺傳圖 譜中有11個(gè)連鎖群與野生種遺傳圖譜的6個(gè)連鎖群存在同源關(guān)系。翁躍進(jìn)等利用aflp技 術(shù)對(duì)從國(guó)際半干旱所(icrisat)引進(jìn)的9份花生抗旱品種繪制指紋圖譜，通過(guò)引物eaca 和與z匹配的mcag和mcat,在3006000bp的范圍內(nèi)共獲得1577條aflp擴(kuò)增產(chǎn)物, 每個(gè)品種有主帶和次帶至少71條z多，其屮10條為多態(tài)性的帶紋。morctzsohn12利用野 生花生品種朵交產(chǎn)生的93個(gè)單株組成的f2群體，建立了aa基因組的遺傳連鎖圖譜。利用 433對(duì)s

41、sr標(biāo)記用于親本間表現(xiàn)多態(tài)，其屮有170位點(diǎn)定位到連鎖圖譜上，但該圖譜并未覆 蓋整個(gè)野生品種的基因組，有些區(qū)域仍存在空缺，這些為將來(lái)花生展遺傳圖譜的整合與利 用打下基礎(chǔ)。本研究利用四粒紅與黑花生朵交構(gòu)建的重組自交系定位群體，建立遺傳連鎖 圖譜，為新品種的選育、基因定位與克隆奠定理論基礎(chǔ)。2材料與方法2. 1作圖群體的構(gòu)建以四粒紅為母本，黑花生為父木進(jìn)行雜交，經(jīng)過(guò)多代自交獲得包含251個(gè)單株的f7重 組自交系(ril)作圖群體。四粒紅為紅色種皮，小果，果殼薄，分枝多，屮熟，多粒型；黑 花生為黑色種皮，大果，果殼厚，分枝少，晚熟，普通型。2.2花生基因組dna提取釆用ctab法提取基因組dna13

42、 (1)取0.1克新鮮葉。(2)用液氮將研缽充分冷卻， 然后將葉片放入研缽中，再加液氮，迅速研磨。(3)將研磨好的粉末加入1.5ml離心管內(nèi)， 再加如sooulctab提取緩沖液混勻，加蓋，置于65°c水浴鍋內(nèi)45分鐘1小時(shí)。(4)加等體 積氯仿：異戊s?(24:1),1 oooorpm, 1 omino (5)取上清液于另一新的離心管，加無(wú)水乙醇(等 體積),靜置(-20°c), 10000rpm, 5min。(6)去上清夜,75%的乙醇洗滌,loooorpm, 5min,(兩次重復(fù))。(7)打開蓋子,隔夜曬干。(8)次日加200ul的0.5xte緩沖液或ddh20o d

43、na 稀釋后，利用nenodrop1000型微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定od260、od280的吸光度、dna 濃度和o d260/od280的比值°dna的母液將按照比例全部稀釋為25ng/ul濃度用于群體基因 型檢測(cè)。2. 3 ssr分析共用1021對(duì)ssr引物用于本研究分析。pcr在pe9700熱循環(huán)儀(美國(guó)abi公司生產(chǎn))上進(jìn) 行。首先在親本間篩選多態(tài)性引物，將其用于下一步的作圖群體分析。pcr體系(15ul)： mixture(康為)7.5ul,正反引物各0.7ul,ddh2o3.6ul,dna模板2.5ul反應(yīng)程序：94°c預(yù)變性5分 鐘,94°c變性45秒

44、,55°c退火45秒，72°c延伸，35個(gè)循環(huán)，72度終延伸10分鐘,4°c保存。 pcr產(chǎn)物在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。點(diǎn)樣量2ul。電泳條件：250v, 100w, 40mino銀染過(guò)程為：(1)固定:10%的酒精和0.5%的冰乙酸固定2次,每次6分鐘。(2)0.2% 的agn03溶液滲透1012分釗a (3) ddh2o清洗2次。(4) 0.002%的硫代硫酸鈉溶液置換30 秒。（5）含1.5%的naoh,甲醛0.4%的溶液顯色。2. 4數(shù)據(jù)記載及連鎖分析作圖群體各株系中帶型與母本相同的記為“a”，與父本相同的記為“b”，帶型不清或 者缺失者記為“

45、”。運(yùn)用joinmap4.0構(gòu)建遺傳圖譜。先用newproject命令創(chuàng)建一個(gè)新的文件 夾,load data命令導(dǎo)入標(biāo)記數(shù)據(jù),再用命令individual genot freq排除缺失數(shù)據(jù)過(guò)多的單株，用 locus genot freq命令分析標(biāo)記的偏分離情況，然后用group命令進(jìn)行分組，最ju map命令構(gòu) 建連鎖圖譜，采用kosambi函數(shù)計(jì)算圖距。3結(jié)果與分析3. 1親本遺傳多態(tài)性的ssr分析1021對(duì)用于雙親（黑花生和四粒紅）多態(tài)性檢測(cè)的ssr引物中有902對(duì)擴(kuò)增帶型清晰，重 復(fù)性好，其余119對(duì)ssr引物無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物或者擴(kuò)增帶型模糊。擴(kuò)增帶型清晰的75對(duì)引物在親 本間貝多態(tài)性，共檢

46、測(cè)出多態(tài)性位點(diǎn)29個(gè)，多態(tài)率為8.31%。3. 2遺傳圖譜構(gòu)建采用75個(gè)多態(tài)性標(biāo)記對(duì)作圖群體251個(gè)單株進(jìn)行擴(kuò)增（圖1）,利用joinmap軟件對(duì)擴(kuò)增結(jié) 果進(jìn)行遺傳連鎖分析。在lod22.5的條件下，共有29個(gè)標(biāo)記進(jìn)入連鎖群，其余46個(gè)標(biāo)記未能 歸入連鎖群。所構(gòu)建的分子遺傳圖譜涉及7個(gè)連鎖群（圖2）,總352.7cm,連鎖群t度介于 12.2-98.0cm,標(biāo)記間的平均圖距為12.2cm,連鎖群標(biāo)記數(shù)27個(gè)（表1）。表1花牛栽培種分子遺傳圖譜的基本特征table 1 main characteristis of genetic linkage map in peanut（arachis hyp

47、oaeci l.）連鎖群長(zhǎng)度標(biāo)記個(gè)數(shù)平均距離linkage grouplength (cm)no. of markersaverage distance(cm)154.7413.7241.575.9360.4512.149&0519.6512.226.1658.9319.6727.039.0total or mean352.72912.2由表1 口j以看出所構(gòu)建的遺傳連鎖圖譜上的ssr標(biāo)記并不是均勻的分布在各個(gè)連鎖群±o連鎖圖譜的總長(zhǎng)度為352.7cm,涉及7個(gè)連鎖群，包括29個(gè)標(biāo)記位點(diǎn)。不同連鎖群上標(biāo) 記數(shù)差異大，其屮標(biāo)記數(shù)最多的為2號(hào)連鎖群，最少的為5號(hào)連鎖群。連鎖群的長(zhǎng)

48、度分布在 12.2cm-98.0cm之間，平均標(biāo)記距離為5.9cm 19.6cm。pl p2m圖1 94pm引物在作圖祥體中的擴(kuò)增結(jié)果fig. 1 amplification of 94pm primer pairs in mapping populationsrh本研究所構(gòu)建的花生遺傳連鎖圖譜（圖2）可知：lg4連鎖群最長(zhǎng)，約100cm, lg5 連鎖群最短，約12cm；其中l(wèi)g2連鎖群上標(biāo)記最多，有7個(gè)，其次是lg3和lg4連鎖群有5個(gè), 然而lg6和lg7連鎖群上只有3個(gè)標(biāo)記；連鎖群上不同標(biāo)記的平均距離：lg2和lg5連鎖群上 平均距離最短，只有6cm左右，lg4和lg6連鎖群上最長(zhǎng)，有

49、20cm左右，其中，lgl, lg3 連鎖群上平均距離在10-15cm o1 1 49qm23ofivi1 n43qm1 nnoqmo_ o24. 235. 5 3*7. 438- 94 t . 5557f=>m1 211 op 4qm574qm1 1 57尸 m29. 14n. 549. 7eo. q9 1948 pm1 1 bzfivl47. 559. 81 n48尸 me8f=>m93.098. o 1 1 89尸 m833 pm2sof=» fvlo. o1rvitbdi rx/i23.0nroee7 尸 rviewr» rviq33 戸 rvi圖2基于

50、ssr標(biāo)記構(gòu)建的花生栽培種遺傳圖譜fig. 2 genetic linkage map of peanut (arachis hypogaea l.) based on ssr markers4討論本研究基于ssr標(biāo)記構(gòu)建了一張包含29個(gè)標(biāo)記，涉及7個(gè)連鎖群的花生栽培種分子遺 傳圖譜。但相對(duì)于龐大的花生基因組，該圖譜遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有飽和。圖譜的總長(zhǎng)度只有352.7cm, 遠(yuǎn)小于 burow 等勿構(gòu)建的花生栽野雜交a.batizocoi x （a.cardenasii x a.diogoi）4x x a.hypogaearflp遺傳圖譜（2210cm,370個(gè)標(biāo)記），甚至小于halward等問(wèn)構(gòu)建的花生

51、野生 種（a.stenosperma x a.carclenasii）rflp遺傳圖譜（1063cm,l 17個(gè)標(biāo)記）和moretzsohn等巾構(gòu)建 的花牛野牛種（a duranensisxa. stenosperm«）ssr遺傳圖譜（1230.89 cm,170個(gè)標(biāo)記）。導(dǎo)致本 圖譜總長(zhǎng)度偏小的原因除與圖譜包含的標(biāo)記數(shù)少外，也與所采用的分析軟件有關(guān)。利用 joinmap4.0軟件構(gòu)建的圖譜長(zhǎng)度通常比用mapmaker和outmap軟件構(gòu)建的小心忙根拯本 圖譜上標(biāo)記的順序，利用mapmaker軟件重新計(jì)算圖譜的距離，結(jié)果為290cm,大于 joinmap4.0計(jì)算的長(zhǎng)度。由于mapm

52、akei采用的多基因座概率函數(shù)算法，假設(shè)染色體重組不 存在交換干涉，因此，即使兩個(gè)軟件都使用kosami函數(shù)，當(dāng)交換干涉出現(xiàn)時(shí),joinmap4.0軟 件繪制出的圖譜長(zhǎng)度通常都會(huì)偏小切。研究表明，利用rflp和rapd等dna技術(shù)在花生屬野生種中能檢測(cè)到較為豐富的多態(tài) 性，但在栽培種中的多態(tài)性水平并不高加。然而ssr分子標(biāo)記能在花生栽培種中檢測(cè)出豐 富的遺傳多態(tài)性且操作簡(jiǎn)便23'25o ssr標(biāo)記的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)（1）雜合程度高。ssr位點(diǎn)等位基 因數(shù)多，雜合程度高，多態(tài)信息含量（pci）大，在區(qū)分親緣關(guān)系近的個(gè)體（群體）時(shí)的 效率比rflp標(biāo)記高。（2）所需dna樣品量少，對(duì)d n a質(zhì)量

53、要求不高。由于ssr序列較 短，即使部分降解的dna也有可能包含足夠用來(lái)擴(kuò)增的ssr位點(diǎn)。（3）多態(tài)性高。多數(shù)ssr 無(wú)功能作用，增加或減少兒個(gè)重復(fù)序列的重復(fù)數(shù)不會(huì)影響生物的正常生長(zhǎng)發(fā)育，因而在品 種間具有廣泛變異。（4）通用性與保守性。微衛(wèi)星dna所在區(qū)域在生物基因組中是相對(duì)保 守的，某一物種的ssr引物可在密切相關(guān)的物種中使用。（5）共顯性遺傳。呈孟德爾式遺 傳，可鑒別出雜合子和純合子。本研究所用的作圖群體屬穩(wěn)定的重組自交系群體，通過(guò)該作圖群體，今后花生栽培種 上新開發(fā)的標(biāo)記將可直接用于遺傳圖譜的加密?；ㄉz傳圖譜在許多研究領(lǐng)域發(fā)揮重要作 用，從花生改良中的標(biāo)記輔助選擇育種到分子遺傳研究中

54、的圖位克?。╩ap-based cloning） 都發(fā)揮了重要作用。因此，對(duì)花生這種重要的油料作物而言，如何利用現(xiàn)有圖譜發(fā)掘野生 資源中的優(yōu)良基因，并對(duì)原有圖譜進(jìn)行補(bǔ)加，使密度逐漸飽和，同時(shí)建立廣泛的雜交群體, 利用這些圖譜鑒定新的重要農(nóng)藝性狀優(yōu)良基因，提高我國(guó)的花生育種水平，是亟待深入研 究的課題。5結(jié)論本研究構(gòu)建了包含7個(gè)連鎖群的花生栽培種分子遺傳圖譜，圖譜的總長(zhǎng)度只有 352.7cm,標(biāo)記間的平均圖距為12.2cm,可作為花生重要性狀的基因定位和qtl分析的框 架。參考文獻(xiàn):1 kochert g halvvard t, branch w d, simpson c e. rflp var

55、iability in peanut （aradiis hypogaea l.） cultivars and wild species j the or appl genet. 1991,81: 565-5702 subramanian v, gurtu s, rao r c n, nigam s n lden（ifica（ion of dna polymorphism in cultivated groundnut using random amplified polymorj?hic dna （papd） assayj. genome, 2000, 43:656-660.3 milla s

56、 r, islcib t q stalker h t. taxonomic relationships among arae his sect. a rack is species as revealed by aflp markersjgmo加匕 2005, 8: 1-11.4 herselman l, thwaites r, kimmins f m, courtois b, van dermervve p j, seal s e. identification and mapping of aflp markers linked to peanut （ara ch is hypogaeci l.） resistance to the aphid vector of groundnut rosette diseasefj theor appl genet, 2004, 109:1426-1433.5 gimcncs m a, hoshino a a, barbosa a v, palmieri d a, lopcsc r. characterization and transferabi