任務(wù)十三 測定食品中農(nóng)藥及藥物殘留

1、食品分析與檢驗技術(shù)1任務(wù)十三 測定食品中農(nóng)藥及藥物殘留李京東 余奇飛 劉麗紅食品分析與檢驗技術(shù)2v技能目標(biāo)1會測定食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量。2會測定糧食、蔬菜樣品中的有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量。3會測定蔬菜、水果中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量。4會測定食品中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量。5會測定食品中的氯霉素殘留量。6會測定食品中磺胺類藥物殘留量。v知識目標(biāo)1了解農(nóng)藥及農(nóng)藥殘留，獸藥及獸藥殘留在食品中允許殘留標(biāo)準(zhǔn)。2 明確食品中農(nóng)藥及藥物殘留檢測原理。食品分析與檢驗技術(shù)3項目一：測定蔬菜和水果中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留v一、案例v二、選用標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬

2、除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定。食品分析與檢驗技術(shù)4v三、測定方法1試樣制備 取不少于1kg蔬菜水果樣品，取可食部分，用干凈紗布輕輕擦去試樣表面的附著物，經(jīng)縮分后，將其切碎，充分混合放入食品加工器粉碎，制成待測樣，放入分裝容器中，于-20-16條件下保存，備用。提取與凈化v（1）提?。簻?zhǔn)確稱取25.0g試樣放入勻漿機(jī)中，加入50.0mL乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2min后用濾紙過濾，濾液收集到裝有57g氯化鈉的100ml具塞量筒中，收集濾液4050mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，在室溫下靜置30min，使乙腈相和水分層。v（2）凈化：從具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，放入150m

3、L燒杯中，將燒杯放在80水浴鍋上加熱，杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨饣蚩諝饬?，蒸發(fā)近干，加入2.0mL丙酮，蓋上鋁箔，備用。v將上述備用液完全轉(zhuǎn)移至15mL刻度離心管中，再用約3mL丙酮分三次沖洗燒杯，并轉(zhuǎn)移至離心管，最后定容至5.0mL，在旋渦混合器上混勻，分別移入兩個2mL自動進(jìn)樣瓶中，供色譜測定。如定容后的樣品溶液過于渾濁，應(yīng)用0.2m濾膜過濾后再進(jìn)行測定。食品分析與檢驗技術(shù)5v3測定（1）色譜柱參考條件色譜柱：預(yù)柱：1.0m，0.53mm內(nèi)徑，脫活石英毛細(xì)管柱。v 兩根色譜柱分別為：v A柱：50%聚苯基甲基硅氧烷（DB-17或HP-50+），30m0.53 mm1.0m，或相當(dāng)者。v B柱：100

4、%聚甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）柱，30m0.53mm1.50m，或相當(dāng)者。溫度v進(jìn)樣口溫度：220；檢測器溫度：250。柱溫：150（保持2min），按8/min升至250(保持12min)。氣體及流量v載氣：氮氣，純度99.999%，流速為10mL/min。v燃?xì)猓簹錃?，純?9.999%，流速為75mL/min。v助燃?xì)猓嚎諝?，流速?00mL/min。進(jìn)樣方式v 不分流進(jìn)樣。樣品溶液一式兩份，由雙自動進(jìn)樣器同時進(jìn)樣。食品分析與檢驗技術(shù)6v（2）色譜分析由自動進(jìn)樣器分別吸取1.0L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和凈化后的樣品溶液注入色譜儀中，以雙柱保留時間定性，以A柱獲得的樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面

5、積比較定量。食品分析與檢驗技術(shù)7v4、結(jié)果表述（1）定性分析v雙柱測得樣品溶液中未知組分的保留時間（RT）分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液在同一色譜柱上的保留時間（RT）相比較，如果樣品溶液中某組分的兩組保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中某一農(nóng)藥的兩組保留時間相差都在士0.05min內(nèi)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。（2）結(jié)果計算v式中vX試樣中農(nóng)殘量，mg/kg；v標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，mg/L；vA樣品溶液中被測農(nóng)藥的峰面積；vAs農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測農(nóng)藥的峰面積；vV1提取溶劑總體積，mL；vV2吸取出用于檢測的提取溶液的體積，mL；vV3樣品溶液定容體積，mL；vm試樣的質(zhì)量，g。pmVVVVVXs231食品分析與檢驗技術(shù)8v5

6、試劑乙腈、丙酮、氯化鈉、濾膜（0.2m，有機(jī)溶劑膜）、鋁箔、農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液、農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液。v6儀器氣相色譜儀、食品加工器、旋渦混合器、勻漿機(jī)、氮吹儀、其他常用儀器設(shè)備。食品分析與檢驗技術(shù)9v四、相關(guān)知識食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留測定氣相色譜法原理。v試樣中有機(jī)磷類農(nóng)藥經(jīng)乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮后，用丙酮定容，用雙自動進(jìn)樣器同時注入氣相色譜儀的兩個進(jìn)樣口，農(nóng)藥組分經(jīng)不同極性的兩根毛細(xì)管柱分離，火焰光度檢測器（FPD磷濾光片）檢測，用雙柱的保留時間定性，外標(biāo)法定量。本法摘自NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定，適用于蔬菜和水果

7、中甲胺磷等54種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定，最低檢出限量為0.010.3mg/kg。食品分析與檢驗技術(shù)10v五、測定食品中有機(jī)磷的方法（一）食品中有機(jī)磷農(nóng)藥的限量（二）食品中有機(jī)磷農(nóng)藥檢測方法v1.色譜法：GB/T 5009.207-2008糙米中50種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定、GB/T5009.161-2003動物性食品中有機(jī)磷農(nóng)藥多組分殘留量的測定、GB/T5009.145-2003植物性食品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留的測定。v2 酶抑制法：GB/T5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測，GB/T18626-2002肉中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的簡易

8、檢驗方法和GB/T18625-2002茶中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的簡易檢驗方法等。食品分析與檢驗技術(shù)11項目二：測定食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留v一、案例 v二、選用的國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.146-2008植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定糧食、蔬菜中16種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的測定。食品分析與檢驗技術(shù)12v三、測定方法1試樣制備與提取取糧食試樣經(jīng)糧食粉碎機(jī)粉碎，過20目篩制成糧食試樣。v（1）蔬菜試樣：擦凈去掉非可食部分后備用。稱取20g蔬菜試樣。置于組織搗碎機(jī)中，加入30mL丙酮和30mL石油醚，于搗碎機(jī)上搗碎2min，搗碎液經(jīng)抽濾，濾液移入250

9、mL分液漏斗中，加入100mL2%硫酸鈉水溶液，充分搖勻，靜置分層，將下層溶液轉(zhuǎn)移到另一250mL分液漏斗中，用220mL石油醚萃取，合并三次萃取的石油醚層，過無水硫酸鈉，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至10mL。v（2）糧食試樣：稱取10g糧食試樣，置于100mL具塞三角瓶中，加入20mL石油醚，于振蕩器上振搖0.5h。食品分析與檢驗技術(shù)13v2凈化與濃縮（1）層析柱的制備：v玻璃層析柱中先加入1cm高無水硫酸鈉，再加入5g 5%水脫活弗羅里硅土，最后加入1cm高無水硫酸鈉，輕輕敲實，用20mL石油醚淋洗凈化柱，棄去淋洗液，柱面要留有少量液體。（2）凈化與濃縮：v準(zhǔn)確吸取試樣提取液2mL，加入已淋洗過的

10、凈化柱中，用100mL石油醚-乙酸乙酯（95+5）洗脫，收集洗脫液于蒸餾瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，用少量石油醚多次溶解殘渣于刻度離心管中，最終定容至1.0mL，供氣相色譜分析。食品分析與檢驗技術(shù)14v3測定（1）氣相色譜參考條件v色譜柱：石英彈性毛細(xì)管柱，0.25mm（內(nèi)徑）15m，內(nèi)涂有OV-101固定液。v氣體流速：氮氣40mL/min，尾吹氣60mL/min，分流比1:50。v溫度：柱溫自180升至230保持30min；檢測器、進(jìn)樣口溫度250。（2）色譜分析v吸收1L試樣注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保留時間和峰高，再吸收1L混合標(biāo)準(zhǔn)使用液進(jìn)樣，記錄色譜峰的保留時間和峰高，根據(jù)組分在

11、色譜上的出峰時間與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定性，用外標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定量。食品分析與檢驗技術(shù)15v4結(jié)果計算v 式中X試樣中農(nóng)藥的含量，mg/kg；hi試樣中i組分農(nóng)藥峰高，mm；mis標(biāo)準(zhǔn)樣品中i組分農(nóng)藥的含量，ng；V2最后定容體積，mL；V1試樣進(jìn)樣體積，L；his標(biāo)準(zhǔn)樣品中i組分農(nóng)藥峰高，mm；m試樣的質(zhì)量，g；K稀釋倍數(shù)。v5試劑石油醚、苯、丙酮、乙酸乙酯、無水硫酸鈉、弗羅里硅土、農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品v6儀器氣相色譜儀、電動振蕩器、組織搗碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、過濾器具、具塞三角瓶、分液漏斗、層析柱。KmVhVmhXisisi12食品分析與檢驗技術(shù)16v四、相關(guān)知識植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留

12、量的測定氣相色譜法原理。v試樣中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥用石油醚、丙酮等有機(jī)溶劑提取，經(jīng)液液分配及弗羅里硅土層析凈化除去干擾物質(zhì)，用附有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀檢測，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。本法摘自GB/T 5009.146-2008植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定，對糧食、蔬菜中16種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行測定。食品分析與檢驗技術(shù)17v五、測定食品中有機(jī)氯農(nóng)藥的方法（一）食品中有機(jī)氯農(nóng)藥的限量（二）食品中有機(jī)氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留的方法v1GB/T 5009.19-2008食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測定v2GB/T 5009.1622008

13、動物性食品中有機(jī)氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥多組分殘留量的測定v3NYT761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定食品分析與檢驗技術(shù)18項目三：測定植物性食物中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留v一、案例v二、選用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.145-2003植物性食品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留的測定。食品分析與檢驗技術(shù)19v三、測定方法1試樣制備v糧食經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過20目篩即可，蔬菜擦去表層泥水，取可食部分勻漿即可。2提取v（1）蔬菜v方法一：稱取10g試樣于三角瓶中，加入與試樣含水量之和為10g的水和20mL丙酮，振蕩30min，抽濾，取20mL濾液于分液漏斗中

14、。v方法二：稱取5g試樣（視試樣中農(nóng)藥殘留量而定），置于50mL離心管中，加入與試樣含水量之和為5g的水和10mL丙酮，置于超聲波清洗器中，超聲提取10min在5000r/min離心轉(zhuǎn)速下離心使蔬菜沉降，用移液管吸取上清液10mL于分液漏斗中。v（2）糧食：稱取20g試樣于三角瓶中，加入5g無水硫酸鈉和100mL丙酮，振蕩30min提取，過濾后取濾液50mL于分液漏斗中。食品分析與檢驗技術(shù)20v3凈化 向方法一分液漏斗中加入40mL凝結(jié)液和1g助濾劑celite545，或向方法二分液漏斗中加入20mL凝結(jié)液和1g助濾劑celite545，輕搖后放置5min，經(jīng)兩層濾布的布氏漏斗抽濾，并用少量凝

15、結(jié)液洗滌分液漏斗和布氏漏斗，將濾液移至分液漏斗，加入3g氯化鈉，依次用50、50、30mL二氯甲烷提取，合并三次提取液，經(jīng)無水硫酸鈉漏斗過濾至濃縮瓶中，在35水浴的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至少量，氮氣吹干，取下濃縮瓶，加入少量正己烷，以少許棉花塞住5mL醫(yī)用注射器出口，以1g硅膠以正己烷濕法裝柱，敲實，將濃縮瓶中液體倒入，再以少量正己烷+二氯甲烷（9+1）洗滌濃縮瓶，倒入柱中。依次以4mL正己烷+丙酮（7+3），4mL乙酸乙酯，8mL丙酮+乙酸乙酯（1+1），4mL丙酮+甲醇（1+1）洗柱，匯集全部濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀45水浴濃縮近干，定容至1mL。 向糧食提取液漏斗中加入50mL5%氯化鈉溶液，再以50

16、、50、30mL二氯甲烷提取三次，合并二氯甲烷經(jīng)無水硫酸鈉過濾后，在40水浴上濃縮近干，定容1mL。食品分析與檢驗技術(shù)21v 4測定（1）氣相色譜參考條件色譜柱：BP5或OV-101 25m0.32mm（內(nèi)徑）石英彈性毛細(xì)管柱。氣體流速：v氮氣：50mL/min。v尾吹氣：（氮氣）：30mL/min。v氫氣：0.5kg/cm2。v空氣：0.3kg/cm2。溫度：柱溫采用程序升溫方式v 50/min 恒溫2min2/min 10/min 恒溫1minv140185195235235進(jìn)樣口溫 度240檢測器：氮磷檢測器(FTD)。v5色譜分析取1L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣凈化液注入色譜儀中，以保留時間定

17、性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量食品分析與檢驗技術(shù)22v6結(jié)果計算式中Xii組分有機(jī)磷（氨基甲酸酯類）農(nóng)藥的含量，mg/kg；hi試樣中i組分的峰高或峰面積；hsi標(biāo)樣中i組分的峰高或峰面積；Esi標(biāo)樣中i組分的量，ng；m試樣量，g；f換算系數(shù)，糧食為1/2，蔬菜為2/3。 v7試劑丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、正己烷、磷酸、氯化鈉、無水硫酸鈉、氯化銨、硅膠、助濾劑、凝結(jié)劑、農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品。v8儀器組織搗碎機(jī)、離心機(jī)、超聲波清洗器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氣象色譜儀。mfhEhXisisii1000食品分析與檢驗技術(shù)23v四、相關(guān)知識植物性食品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多種殘留測定氣相色譜法原理。v試

18、樣中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥用有機(jī)溶劑提取，再經(jīng)液液分配，微型柱凈化等步驟除去干擾物，用氮磷檢測器（FTD）檢測，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。本方法摘自GB/T5009.145-2003，適用于使用過有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的糧食、蔬菜等作物的殘留量分析。食品分析與檢驗技術(shù)24v五、測定食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的方法（一）食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥限量（二）測定氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的方法v 1NYT 1679-2009植物性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。v2SN/T2085-2008進(jìn)出口糧谷中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量檢測方法-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。v3GB/T21

19、132-2007煙草及煙草制品二硫代氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的測定-分子吸收光度法。v4.GB/T18630-2002蔬菜中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的簡易檢驗方法-酶抑制法v5.GB/T18626-2002肉中有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的簡易檢驗方法-酶抑制法。食品分析與檢驗技術(shù)25v（三）蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的定性檢測 膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此判斷出樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥做定性檢測。 本法摘自GB/T5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷

20、和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測，適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定。食品分析與檢驗技術(shù)26v1測定方法（1）整體測定法：選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10mL緩沖溶液，振蕩50次，放置2min以上。v取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min以上進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，有條件時放在37恒溫裝置中10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)。每批測定設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。（2）表面測定法（粗篩法）：擦去蔬菜表面泥土，滴23滴緩沖溶液在蔬菜

21、表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。放置10min以上進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，有條件時放在37恒溫裝置中10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)。每批測定設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。食品分析與檢驗技術(shù)27v2結(jié)果判定 結(jié)果以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制（為陽性），未抑制（為陰性）表示。白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色為陽性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。陽性結(jié)果樣品可以用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。食品分析與檢驗技術(shù)28v3注意事項（1）韭菜、生姜

22、、蔥、蒜、辣椒、胡蘿卜等蔬菜中，含有破壞酶活性或使藍(lán)色產(chǎn)物褪色的物質(zhì)，處理這類樣品時不要剪得太碎，浸提時間不要太長，必要時可用整株蔬菜浸提的方法。（2）當(dāng)溫度低于37，酶反應(yīng)速度放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長，延長時間以空白對照卡用手捏3min時可變色為準(zhǔn)。（3）空白卡如果不變色原因一是由于藥片表面緩沖溶液過少，藥片表面不夠濕潤，二是由于溫度太低。（4）白色和紅色藥片疊合時間以3min為準(zhǔn)，3min后藍(lán)色會逐漸加深，24h后顏色會逐漸褪去。食品分析與檢驗技術(shù)29項目四：測定食品中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素的殘留v一、案例v二、選用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22990-2008牛奶和奶粉

23、中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定食品分析與檢驗技術(shù)30v三、測定方法1試樣的制備與保存v牛奶置于04冰箱中避光保存。使用時，從冰箱中取出，放置至室溫，搖勻。奶粉常溫避光保存。2提取與凈化v牛奶試樣稱取10.00g，置于50mL具塞塑料離心管中，奶粉試樣稱取2.00g，置于50mL具塞塑料離心管中，向試樣中加入20mL0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液(pH 4)，于渦旋振蕩器上混合2min，于10，5000r/min離心10min，上清液過濾至另一離心管中，殘渣中再加入20mL緩沖溶液，重復(fù)提取一次，合并上清液，待凈化。v將上清液通過處理好的Oasis

24、HLB固相萃取柱，使上清液以不超過3mL/min的流速通過Oasis HLB固相萃取柱，待上清液完全流出后，用5mL甲醇+水(體積比5+95)洗柱，棄去全部流出液。減壓抽干5min，最后用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液于10mL樣品管中。 v將上述洗脫液通過羧酸型陽離子交換柱，待洗脫液全部流出后，用5mL甲醇洗柱，減壓抽干，用4mL0.01mol/L草酸-乙腈溶液洗脫，收集洗脫液于10mL樣品管中，45氮氣吹至1.5 mL左右，定容至2mL，供測定。食品分析與檢驗技術(shù)31v3測定（1）液相色譜條件v色譜柱：Kromasil 100-5C18，5m，150mm4.6mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者。v流動相：0

25、.01 mol/L草酸溶液乙腈甲醇（77185）。v流速：1.0 mL/ min。v柱溫: 40 。v檢測波長：350 nm。v進(jìn)樣量：60L。（2）液相色譜測定v將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。（3）按上述步驟，對同一試樣進(jìn)行平行試驗測定。除不稱取試樣外，均按上述步驟同時完成空白試驗。 食品分析與檢驗技術(shù)32v4結(jié)果計算 式中X試樣中被測組分殘留量，g/kg；c從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測組分溶液濃度，ng/mL； V試樣溶液定容體積，mL；m

26、試樣溶液所代表的質(zhì)量，g。v5.試劑甲醇、乙腈、磷酸氫二鈉、檸檬酸、乙二酸四乙酸二鈉、草酸、0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、0.1mol/L檸檬酸溶液、Mcllvaine 緩沖溶液、0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液、0.01mol/L草酸溶液、甲醇+水（1+19）、0.01mol/L草酸-乙腈溶液（1+1）、土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、Oasis HLB固相萃取柱或相當(dāng)者、羧酸型陽離子交換柱：v6.儀器液相色譜儀、分析天平、渦旋振蕩器、冷凍離心機(jī)、固相萃取裝置、真空泵、氮氣吹干儀、pH計、刻度樣品管10001000mVcX食品分析與檢驗技術(shù)33v四、

27、相關(guān)知識食品中四環(huán)素族抗生素殘留測定液相色譜-紫外檢測法原理。v用0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液提取試樣中四環(huán)素族抗生素殘留，Oasis HLB 或相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈汪人嵝完栯x子柱凈化，液相色譜儀測定，外標(biāo)法定量。v本法摘自GBT 22990-2008，該方法的檢出限量牛奶中土霉素、四環(huán)素為5g/kg、金霉素、強力霉素為10g/kg；奶粉中土霉素、四環(huán)素為25g/kg、金霉素、強力霉素為50g/kg。v五、測定食品中四環(huán)素族抗生素藥物的方法（一）食品中四環(huán)素族抗生素藥物的限量（二）測定土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留的方法v1GB/T 20764-2006可食動物肌肉

28、中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定。v2GB/T18932.23-2003蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定方法-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法v3DB33T 691-2008 水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定-高效液相色譜熒光檢測法食品分析與檢驗技術(shù)34項目五：測定食品中氯霉素殘留v一、案例v二、選用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T9695.32-2009肉與肉制品氯霉素含量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法。食品分析與檢驗技術(shù)35v三、測定方法1提取v稱取10.00g樣品于50mL具塞離心管中，加入少量無水硫酸鈉和30mL乙酸乙酯，均質(zhì)1min，以5000r/min離心5min，

29、用吸管吸出上層乙酸乙酯轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中，殘渣用15mL乙酸乙酯再提取一次，合并提取液，提取液在50水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去乙酸乙酯，加入1mL甲醇-氯化鈉溶液和4mL正己烷，充分振搖后，移至10mL具塞離心管中，用1mL甲醇-氯化鈉清洗濃縮瓶，合并清洗液于10mL具塞離心管中，渦旋0.5min，于3000r/min離心3min后，用吸管吸去正己烷，加入4mL正己烷重復(fù)上述操作。然后在離心管中加入4mL乙酸乙酯，渦旋1min，經(jīng)3000r/min離心3min后，用吸管吸去乙酸乙酯，加入4mL乙酸乙酯重復(fù)上述操作。合并乙酸乙酯于濃縮瓶中，在50水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，至近干，用5mL水溶解殘渣。食品分析與檢驗技

30、術(shù)36v2.凈化與衍生化依次用5mL甲醇、5mL三氯甲烷、5mL甲醇、5mL水活化C18固相萃取柱，然后加上述提取液，加5mL甲醇+水（2+8）淋洗色譜柱，用25mL甲醇洗脫于濃縮瓶中，洗脫液在50水浴中濃縮至近干，用100 L甲醇溶解殘渣。轉(zhuǎn)移至10mL具塞離心管中，再用甲醇沖洗濃縮瓶，合并洗液，于50下用氮氣吹干。在吹干的試樣殘渣中加入100 L甲苯和100 L混合衍生劑，蓋緊塞后，渦旋混勻1min，60下反應(yīng)30 min，于50下用氮氣吹干，用1mL正己烷溶解殘渣。標(biāo)準(zhǔn)工作液和空白液（除不稱取試樣外）按照上述步驟衍生化。食品分析與檢驗技術(shù)37v4測定（1）氣相色譜-質(zhì)譜條件v色譜柱：DB

31、-5MS石英毛細(xì)管柱，30m0.25mm（內(nèi)徑）0.25 m，或相當(dāng)者。v色譜柱溫度：初始55保持1min ，以25/min升至280，保持6min。v進(jìn)樣口溫度：250。v進(jìn)樣量：1.0 L。v進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，保持1min。v載氣：氦氣，純度99.999%。v流速：1.65mL/min。v接口溫度：280。v離子源：NCI源，70eV。v溶劑延遲：7min。v離子源溫度：150。v反應(yīng)氣：甲烷，純度99.99%。食品分析與檢驗技術(shù)38v（2）定性測定進(jìn)行試樣測定時，如果檢出色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子比與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

32、衍生物的離子比相一致（各相關(guān)離子比在相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品的10%之內(nèi)），則可判斷樣品中存在氯霉素。 v（3）定量測定吸取1 L衍生的試樣液、標(biāo)準(zhǔn)液或空白液注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，以m/z 466為定量離子，標(biāo)準(zhǔn)工作液氯霉素的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)試樣液的峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的氯霉素濃度值。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對試樣進(jìn)行定量，樣品溶液中氯霉素衍生物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，氯霉素衍生物的參考保留時間為12.58min。 食品分析與檢驗技術(shù)39v5結(jié)果計算v 式中X試樣中氯霉素含量，g/kg；C從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查到的試樣液中氯霉素濃度，ng/mL；

33、C0從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查到的空白液中氯霉素濃度，ng/mL；V試樣溶液定容體積，mL；m試樣的質(zhì)量，g。v6試劑氯霉素、甲醇、三氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、無水硫酸鈉、氯化鈉、,O-雙（三甲基硅烷）三氟乙酰胺（BSTFA)、三甲基氯硅烷（TMCS）、丙酮、甲苯、甲醇+水溶液（2+8）、氯化鈉溶液（40g/L）、甲醇-氯化鈉溶液、混合衍生化試劑、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液v7儀器氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、均質(zhì)器、固相萃取裝置、振蕩器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、漩渦混和器、離心機(jī)、恒溫箱、氮吹儀、具塞離心管、C18固相萃取柱或相當(dāng)者。3301010)(mVCCX食品分析與檢驗技術(shù)40v四、相關(guān)知識食品中氯霉素殘留測定氣相色譜-質(zhì)譜

34、法原理。v樣品中氯霉素用乙酸乙酯提取，正己烷除去脂肪，經(jīng)C18凈化，以N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷（BSTFA+TMCS,99+1）衍生化，用負(fù)離子化學(xué)源NCI源選擇m/z為466的特征離子為目標(biāo)離子，在SIM模式下測定。v本法摘自GB/T 9695.32-2009，適用于禽畜肉中氯霉素殘留的測定，該方法測定低限為：氯霉素0.2g/kg。v五、測定食品中氯霉素殘留的方法（一）食品中氯霉素的限量（二）測定氯霉素殘留的方法v1酶聯(lián)免疫法。v2 GB/T 22338-2008 動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定-氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法食品分析與檢驗技術(shù)41項目六：測定食

35、品中磺胺類藥物殘留v一、案例v二、選用的標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部1025號公告-7-2008動物性食品中磺胺類藥物殘留檢測酶聯(lián)免疫吸附法。食品分析與檢驗技術(shù)42v三、測定方法1樣品的制備與保存v取新鮮或解凍的空白或供試動物組織，剪碎，置于組織勻漿機(jī)中高速勻漿。取雞蛋去除殼后用均質(zhì)器500r/min勻漿20s，使蛋清和蛋黃充分混合。將已制備的樣品在-20冰箱中貯存?zhèn)溆谩?提取v稱取樣品2士0.02g于50mL離心管中，加乙腈8mL，振蕩20min，4000r/min離心5min：分取上清液2.5mL于10mL離心管中，于50水浴下氮氣吹干；加正己烷1mL，渦動20s溶解殘留物，再加緩沖液工作液1mL，渦動1min，4000r/min離心10min，取下層水相20L分析。食品分析與檢驗技術(shù)43v3測定（1）使用前將試劑盒于室溫（1925）下放置12h。（2）每個標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液按兩個或兩個以上平行計算，將所需數(shù)目的酶標(biāo)板條插入板架。（3）加系列標(biāo)準(zhǔn)溶液或試樣液20L于對應(yīng)的微孔中，隨即加酶標(biāo)記物工作液50L/孔，再加磺胺類藥物抗體工作液80