醫(yī)療器械微生物基礎(chǔ)知識(shí)及操作

1、醫(yī)療器械檢測(cè)微生物基礎(chǔ)知識(shí)及操作品管部 *前言 微生物廣泛存在于自然界中，可謂是到處有菌。在無(wú)菌醫(yī)療器械的生產(chǎn)過(guò)程中，由于醫(yī)療器械的多樣性與復(fù)雜性，即使在標(biāo)準(zhǔn)制造狀態(tài)下生產(chǎn)的產(chǎn)品，仍可能有微生物的污染。因此，了解和掌握微生物方面的有關(guān)知識(shí)，將有助于生產(chǎn)過(guò)程中微生物的控制和醫(yī)療用品質(zhì)量的提高。第一節(jié) 微生物及其種類一、微生物 在自然界里，有許多肉眼看不到的、需用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的微小生物，這類生物稱為微生物。 盡管微生物很小，但均有其一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能，對(duì)外環(huán)境適應(yīng)性極強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖迅速，且廣泛存在于空氣、土壤、水及動(dòng)植物的有機(jī)體中。 第一節(jié) 微生物及其種類二、微生物五大共性

2、體積小，面積大；吸收多，轉(zhuǎn)化快；生長(zhǎng)旺，繁殖快；適應(yīng)強(qiáng)，異變異；分布廣，種類多。第一節(jié) 微生物及其種類三、微生物的種類 微生物的種類有10萬(wàn)種以上。按其結(jié)構(gòu)、組成等差異，可分為3大類（一）非細(xì)胞型微生物體積微小，能通過(guò)濾菌器；只能在活細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。如病毒，就是形體最微小，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的微生物。（二）原核細(xì)胞型微生物僅有原始核，無(wú)核仁和核膜；缺乏完整的細(xì)胞器。這類微生物有細(xì)菌、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。（三）真核細(xì)胞型微生物細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器。真菌是真核型微生物。霉菌屬此類型。第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)一、細(xì)菌的形態(tài)與大小 細(xì)菌在一定的條件

3、下，可分為球菌、桿菌、弧菌或螺形菌，見(jiàn)圖1。其體積微小，但大小不一。通常以m作為測(cè)量單位。一般球菌的直徑約為0.81.2m，大球菌的直徑可達(dá)2m；桿菌長(zhǎng)約23m，寬0.30.5m；螺形菌長(zhǎng)150m，寬0.3-1m。能產(chǎn)生芽胞的菌比一般不產(chǎn)芽胞菌要大些。 細(xì)菌以無(wú)性分裂方式繁殖，1個(gè)細(xì)菌分裂成2個(gè)細(xì)胞，2個(gè)細(xì)胞互相脫離為2個(gè)個(gè)體，再由2個(gè)分裂為4個(gè)，4個(gè)分裂成8個(gè)，如此連續(xù)不斷裂殖。1個(gè)菌在十幾分鐘或12 h就分裂1次。因此細(xì)菌接種在含有營(yíng)養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)1824h的生長(zhǎng)繁殖，即有幾十億個(gè)菌云集在一起，出現(xiàn)稱為肉眼可見(jiàn)的菌落群體（CFU）。 第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)圖1各種細(xì)菌的形

4、態(tài) 1葡萄球菌2各種雙球菌3鏈球菌4四聯(lián)球菌5八疊球菌6球桿菌 7鏈桿菌8弧菌9螺形菌第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu) 細(xì)菌雖小，但有一定構(gòu)造。細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)等是各種各樣細(xì)菌細(xì)胞均有的基本結(jié)構(gòu)。而莢膜、鞭毛、芽胞、菌毛等僅某些細(xì)菌具有, 是細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)。 (一) 細(xì)胞壁 細(xì)胞壁位于菌體的最外層，是一層無(wú)色透明的薄膜，堅(jiān)韌并富有彈性，其總量為細(xì)菌干重的1025%。其功能是使細(xì)菌保持一定的外形，并起保護(hù)菌體的作用。它的化學(xué)組成主要是肽聚糖等蛋白質(zhì)、類脂質(zhì)和多糖等復(fù)合物。但隨菌體不同而有差異。如大腸桿菌的細(xì)胞壁由類脂-蛋白質(zhì)組成，金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁由甘油、磷酸、蛋白

5、質(zhì)組成。第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)兩類細(xì)胞壁的特征比較 特特 征征G+G+細(xì)菌細(xì)菌 G G細(xì)菌細(xì)菌 肽聚糖 層厚 層薄類脂 極少脂多糖外膜缺有 壁質(zhì)間隙 很薄較厚細(xì)胞狀態(tài)僵硬僵硬或柔韌 酸消化的效果 原生質(zhì)體原生質(zhì)球?qū)θ玖虾涂股氐拿舾行?很敏感 中度敏感第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)(二)細(xì)胞膜 細(xì)胞膜又稱細(xì)胞質(zhì)膜, 位于胞壁之內(nèi)，緊包于細(xì)胞質(zhì)，它由雙層磷脂和蛋白質(zhì)鑲嵌排列而成。其化學(xué)組成主要為脂類、蛋白質(zhì)和核糖核酸。它具有半透性，與細(xì)胞壁一起維持細(xì)胞的通透性，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)與營(yíng)養(yǎng)、調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外環(huán)境平衡的功能。(三)細(xì)胞質(zhì) 細(xì)胞質(zhì)是細(xì)菌的基礎(chǔ)物質(zhì)，呈溶膠狀態(tài)，為細(xì)菌

6、進(jìn)行新陳代謝的重要場(chǎng)所。基本成分為水(細(xì)菌質(zhì)量70%是水)、蛋白質(zhì)、核酸（核糖核酸及去氧核糖核酸）和脂類，也含有少量的糖和無(wú)機(jī)鹽。并含有一系列的酶系統(tǒng)。進(jìn)行合成、分解、氧化、還原反應(yīng)，更新細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和成分，維持菌體的生長(zhǎng)、代謝等活動(dòng)。第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu) (四)核質(zhì) 細(xì)菌的細(xì)胞核沒(méi)有核膜、核仁，沒(méi)有固定形態(tài)，這是原核生物和真核生物的主要區(qū)別。 由于細(xì)菌的核比較原始, 故一般細(xì)菌的核稱原始形態(tài)的核戓稱擬(類)核。細(xì)菌核物質(zhì)的主要成分是脫氧核糖核酸(DNA), 它實(shí)際上是與高等生物細(xì)胞核功能相似的核物質(zhì), 故又稱染色質(zhì)體或細(xì)菌染色體, 還有蛋白質(zhì)、磷脂、糖元和酶類等。它控制著細(xì)菌的各種遺

7、傳性狀，在繁殖活動(dòng)中起著重要作用，細(xì)菌的裂殖，首先從細(xì)胞核開(kāi)始，然后再形成細(xì)胞膜和細(xì)胞壁。第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)(五)細(xì)胞壁外部結(jié)構(gòu) 有些細(xì)菌細(xì)胞壁外有多種結(jié)構(gòu)，主要包括莢膜、菌毛、鞭毛和芽胞等，其功能主要是提供保護(hù)、黏附物體和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。在無(wú)菌醫(yī)療器械生產(chǎn)中具有意義的是芽胞結(jié)構(gòu)。第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu) 某些細(xì)菌，生長(zhǎng)到一定時(shí)期或當(dāng)外環(huán)境條件惡劣時(shí)，菌體失去大部分水分，細(xì)胞漿逐漸濃縮，形成圓形或橢圓形的特殊結(jié)構(gòu)，稱芽胞。芽胞可位于中央或末端，有的比菌體大，有的比菌體小，這些特征在產(chǎn)芽胞的菌中具有鑒別意義。第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)第二節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu) 因此，在日常的消毒滅菌

8、中，均選擇芽胞菌作為生物指示劑。 如輻照滅菌中，選擇短小桿菌芽胞；熱力滅菌中，以嗜熱脂肪桿菌芽胞作為判定滅菌效果的指標(biāo)。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)一、細(xì)菌的生長(zhǎng)條件(一) 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是細(xì)菌新陳代謝和生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有水、氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子等，細(xì)菌依靠這些物質(zhì)合成菌體成分，獲得所需能量及調(diào)節(jié)新陳代謝。細(xì)菌是單細(xì)胞生物，營(yíng)養(yǎng)的攝取和吸收，主要依靠細(xì)胞膜的功能來(lái)完成。(二)酸堿度 一般細(xì)菌的生長(zhǎng)最適酸堿度(pH)為7.27.6，少數(shù)菌需在較酸或較堿的環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)(三)溫度 溫度是細(xì)菌生長(zhǎng)的重要因素之一，各種細(xì)菌的適宜溫

9、度范圍相差很大，據(jù)此而有嗜熱(52)、嗜溫及嗜冷菌之分。大多為嗜溫菌(1540)，一般細(xì)菌的培養(yǎng)采用37。各國(guó)藥典規(guī)定需氧、厭氧菌30-35 ;霉菌20-25 。我國(guó)藥典2015版終于與國(guó)際接軌。(四)氣體 與細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖有關(guān)的氣體主要有氧氣和二氧化碳。第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)一、微生物的分離和純培養(yǎng) 了解了細(xì)菌生長(zhǎng)的條件，即可采用人工的方法培養(yǎng)細(xì)菌，以利更好地研究、控制微生物。如車(chē)間內(nèi)空氣中微生物的測(cè)定，醫(yī)療用品初始污染菌的計(jì)數(shù)，生產(chǎn)人員手等衛(wèi)生學(xué)調(diào)查以及制造環(huán)境的菌譜調(diào)查，即是利用細(xì)菌的生長(zhǎng)條件和特性，進(jìn)行的人工培養(yǎng)。 微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且無(wú)處不在。因此，在微生物的研究及應(yīng)

10、用中，不僅需要通過(guò)分離純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時(shí)注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，防止其他微生物的混入。在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時(shí)防止其被其他微生物污染的技術(shù)被稱為無(wú)菌技術(shù)(aseptic technique) 它是保證微生物學(xué)研究正常進(jìn)行的關(guān)鍵。第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)(一) 培養(yǎng)方法 細(xì)菌的培養(yǎng)只需提供充分的營(yíng)養(yǎng)，合適的pH、溫度和必要的氣體環(huán)境，細(xì)菌即可生長(zhǎng)繁殖。通常培養(yǎng)的方法是將細(xì)菌接種適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，37溫箱培養(yǎng)1824 h，即可用肉眼觀察細(xì)菌生長(zhǎng)的情況。 用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、稀釋倒平板法(pour plate method)2、涂布平板法

11、(spread platemethod)3、平板劃線分離法(streak plate method)4、稀釋搖管法(dilutlon shake culture method)第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)(二)培養(yǎng)基 按其用途可分為下列4大類。1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含細(xì)菌所需要的基本營(yíng)養(yǎng)成分，可供多數(shù)細(xì)菌使用。主要有牛肉膏(0.3)、蛋白胨(1)、氯化鈉 (0.5)、磷酸鹽和水等配制而成，pH 7.27.6，此為液體培養(yǎng)基。若加入凝固劑，如23瓊脂，使其固態(tài)化，即為固體培養(yǎng)基，細(xì)菌經(jīng)接種后可形成肉眼可見(jiàn)的菌落。如營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。 若加0.10.5瓊脂，則為半固體培養(yǎng)基。常用于觀察細(xì)菌動(dòng)力或保存菌種；如普通

12、肉湯半固體培養(yǎng)基。第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)2、 營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如血液、腹水、葡萄糖等，以供某些細(xì)菌的特殊營(yíng)養(yǎng)要求。如血平板等。3、選擇培養(yǎng)基：利用細(xì)菌對(duì)某類化學(xué)物質(zhì)敏感性不同，選擇性抑制某些細(xì)菌，而有利于欲選細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離的目的。如水質(zhì)檢查中的品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基等。4、鑒別培養(yǎng)基：各細(xì)菌具不同的生化反應(yīng)特性，可利用鑒別培養(yǎng)基加以區(qū)別，如糖發(fā)酵試驗(yàn)用的含糖含指示劑培養(yǎng)基，硫化氫生成試驗(yàn)用的醋酸鉛培養(yǎng)基等。第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)按培養(yǎng)基狀態(tài)可分為下列3類。1、固體培養(yǎng)基(solid medium)在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)

13、即為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏等。 2、半固體培養(yǎng)基(semisolid medium)半固體培養(yǎng)基中凝固劑的含量比固體培養(yǎng)基少，培養(yǎng)基中瓊脂含量一般為0.2%0.7%。半固體培養(yǎng)基常用來(lái)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定等。3、液體培養(yǎng)基(liquid medium) 液體培養(yǎng)基中未加任何凝固劑。在用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，通過(guò)振蕩或攪拌可以增加培養(yǎng)基的通氣量，同時(shí)使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)分布均勻。液體培養(yǎng)基常用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)以及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究。 第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)(三)細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況 將細(xì)菌接種到液體培

14、養(yǎng)基中，大多數(shù)的細(xì)菌生長(zhǎng)呈現(xiàn)均勻渾濁的狀態(tài)，少數(shù)呈鏈狀的細(xì)菌可呈沉淀生長(zhǎng)，專性需氧菌多生長(zhǎng)在液體表面，形成菌膜。 在半固體培養(yǎng)基上，無(wú)動(dòng)力(無(wú)鞭毛)的細(xì)菌可沿穿刺線生長(zhǎng)，呈明顯的線形，周?chē)囵B(yǎng)基仍透明澄清。有鞭毛的細(xì)菌可向穿刺線四周運(yùn)動(dòng)彌散，呈羽狀或云霧狀渾濁生長(zhǎng)，穿刺線模糊不清。故半固體培養(yǎng)基可用于檢查細(xì)菌有無(wú)動(dòng)力。第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng) 單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群落，我們稱之為菌落。一般情況下，1個(gè)菌落由1個(gè)單獨(dú)細(xì)菌經(jīng)不斷分裂繁殖堆積而成，故1個(gè)菌落屬1個(gè)細(xì)菌的后代，是純種。 由于細(xì)菌種類、菌齡以及培養(yǎng)基的

15、成分等因素的不同，菌落的形態(tài)、大小、色澤也不一樣。因此，菌落的形態(tài)特征是識(shí)別各種細(xì)菌的主要依據(jù)之一。另外，根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目，也可計(jì)算樣品(水、物體表面、空氣等)中的活細(xì)菌數(shù)（cfu/mL）。 菌落形成單位（CFU，Colony-Forming Units）指單位體積中的細(xì)菌群落種數(shù)。第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)第四節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查 根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色反應(yīng)性可大致決定其種屬，因此，細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查是細(xì)菌分類和鑒定的基礎(chǔ)。如革蘭染色后，可分辨出細(xì)菌是革蘭陽(yáng)性菌還是陰性菌，是球菌還是桿菌，能否形成芽胞(因芽胞壁厚、折光性強(qiáng)、不易著色等，故可在顯微鏡下加以識(shí)別)。所以，此法

16、可協(xié)助查明車(chē)間、醫(yī)療用品及各種操作環(huán)節(jié)的常見(jiàn)污染菌。如污染了形成芽胞的細(xì)菌，由于該型菌類抵抗力強(qiáng)，必須采用滅菌劑進(jìn)行滅菌處理。稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查一、檢查工具顯微鏡 一般形態(tài)學(xué)檢查中，最常用的是顯微鏡。它是采用自然光或燈光為光源，其波長(zhǎng)0.4 m，在最佳的條件下，顯微鏡分辨率為波長(zhǎng)的一半，即為0.2m。而肉眼所能看到的最小影像為0.2 mm 。故在普通顯微鏡下用油鏡放大1000倍，可將0.2m的微粒放大成0.2mm，能使人眼所見(jiàn)。一般細(xì)菌都大于0.2m，在普通顯微鏡下均可清楚看到。為提高觀察效果，觀察更小的微生物，還可用暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡及電子顯微鏡等。 第

17、四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查二、不染色標(biāo)本的檢查 為觀察生活狀態(tài)下細(xì)菌的形態(tài)及運(yùn)動(dòng)情況，可直接采用不染色標(biāo)本。一般常用懸滴法(將涂有標(biāo)本凹玻片覆以蓋玻片)或壓滴法(將菌液放于載玻片上，以蓋玻片壓住)，用普通顯微鏡觀察。如用暗視野或相差顯微鏡則效果更好。檢查動(dòng)力時(shí)，須注意區(qū)別細(xì)菌真正的運(yùn)動(dòng)與分子運(yùn)動(dòng)(或稱原地顫動(dòng)的布朗運(yùn)動(dòng))。三、染色標(biāo)本的檢查 如上所述，細(xì)菌形態(tài)、排列以及特殊結(jié)構(gòu)等，各菌各有其特點(diǎn)，這對(duì)鑒別細(xì)菌具有一定幫助，但必須借助光學(xué)顯微鏡和染色方法，因?yàn)榫w是無(wú)色半透明，而且某些部分如鞭毛等，不經(jīng)染色是看不到的。第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查 細(xì)菌的蛋白質(zhì)是兼性電解質(zhì)，在不同的pH時(shí)可帶不同的電荷，在等

18、電點(diǎn)時(shí)所帶陽(yáng)電與陰電相等。細(xì)菌的導(dǎo)電點(diǎn)較低，革蘭陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)為pl 23，陰性菌為pl 45， 故在近于中性的環(huán)境中，多帶陰電，易與帶陽(yáng)電的堿性染料結(jié)合而著色。因此，細(xì)菌染色多用堿性苯胺染料，如美藍(lán)、堿性復(fù)紅、龍膽紫等。 染色法分為單染與復(fù)染兩種。單染只用1種染料染色，如美藍(lán)、復(fù)紅，可觀察細(xì)菌大小、形態(tài)與排列形狀，但由于細(xì)菌均染成同一顏色，不能鑒別。復(fù)染采用2種以上染料染色，可將菌染成不同顏色，便于鑒別細(xì)菌。常用者有革蘭染色法(Grams Stain)等。 第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查附：革蘭染色法附：革蘭染色法涂片涂片：用紗布擦凈玻璃片，以無(wú)菌接種環(huán)取一小滴無(wú)菌生理鹽水，然后用無(wú)菌接種環(huán)挑取少數(shù)

19、菌苔(落)或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)物(不必加鹽水)，在玻璃片中央涂成一薄膜。干燥：干燥：涂片后放室溫中自然干燥。固定：固定：將玻片迅速通過(guò)火焰3次(其目的是殺死細(xì)菌)，使菌體與玻片粘附牢固，以及改變對(duì)染料的通透性。初染：初染：滴加結(jié)晶紫染液于已固定的玻片上，染1 min，水洗。媒染：媒染：滴加碘液，作用1 min，水洗。脫色：脫色：加95酒精于涂片上，輕輕搖動(dòng)78次，使均勻脫色至涂面無(wú)紫色或稍成淡紫色，立即水洗。第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查復(fù)染：復(fù)染：用石炭酸復(fù)紅稀釋液染0.5min，水洗，用濾紙吸干。于涂片上滴加少許香柏油，鏡檢。鏡檢：鏡檢：用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，先以低倍鏡對(duì)光，光線宜強(qiáng)，并開(kāi)大光圈升高集光器

20、。從側(cè)面轉(zhuǎn)動(dòng)選擇油鏡頭，將油鏡頭浸于涂片油內(nèi)，然后由接目鏡中觀察物象，觀察時(shí)可先調(diào)粗調(diào)節(jié)器，當(dāng)看到物像時(shí)，再旋轉(zhuǎn)細(xì)調(diào)節(jié)器，直至物像清晰為止。結(jié)果：結(jié)果：菌體呈紫色者為革蘭陽(yáng)性；呈紅色者為革蘭陰性。 (注：顯微鏡是較貴重的儀器設(shè)備，宜輕巧操作，并按說(shuō)明書(shū)規(guī)定的方法使用和保養(yǎng)。油鏡是顯微鏡中最寶貴的部分，用后一定要立即用擦鏡紙拭去油漬。若油干涸，可用二甲苯少許涂于擦鏡紙上，擦去油，并將物鏡轉(zhuǎn)換成八字形，存放于箱內(nèi)。)第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查革蘭染色液的配制第l液：結(jié)晶紫染色液(0.5結(jié)晶紫水溶液) 稱取2g結(jié)晶紫，放入研缽中，加96乙醇4ml，研磨后加400ml蒸餾水即成。第2液：盧戈(Lugol)

21、液。 碘 5 g 碘化鉀 l0 g 蒸餾水 400 ml 5碳酸氫鈉水溶液 l00 ml 貯于棕色瓶中保存，3 星期以上如變質(zhì)，要重新配制。第3液(退色劑)：純酒精或95酒精。第4液(復(fù)染液)：一般用10倍稀釋萋?tīng)枏?fù)紅液。 1、堿性復(fù)紅酒精飽和液(稱取堿性復(fù)紅8.16 g，溶于95酒精 l00 ml)； 2、萋?tīng)柺克釓?fù)紅液(由堿性復(fù)紅酒精飽和液l0ml加5石炭酸水溶液90 ml而成)； 3、10倍稀釋萋?tīng)枏?fù)紅液(由萋?tīng)柼克釓?fù)紅液1份加蒸餾水9份配制而成)。第四節(jié) 細(xì)菌形態(tài)的檢查附：復(fù)紅美藍(lán)芽胞染色法1、染色液： (1) 萋納石炭酸復(fù)紅液。 堿性復(fù)紅酒精飽和液(配法同前) 10 ml 5%石炭

22、酸水溶液 90 ml (2)脫色劑：95%乙醇。 (3)復(fù)染液：呂氏堿性美藍(lán)溶液。 取美藍(lán)0.3 g，溶于95%酒精30 ml中，再加入蒸餾水100 ml及10%氫氧化鉀水溶液01 ml即成。2、染色法： (1) 將涂片在火焰上固定，滴加染色液加熱染5 min, (2) 水洗，用脫色劑脫色2 min (3) 以復(fù)染液復(fù)染1 min，水洗，待干鏡檢。 (4) 結(jié)果：菌體呈藍(lán)色；芽胞呈紅色。第五節(jié) 微生物在自然界的分布 微生物適應(yīng)環(huán)境的能力很強(qiáng)，在自然界里分布極為廣泛，土壤、空氣、水、動(dòng)植物體表以及與外界相通的腔道中，均存在著微生物。 一、土壤中的微生物 土壤里，尤其是開(kāi)發(fā)后的土壤，因含有多種適宜

23、微生物生長(zhǎng)繁殖的有機(jī)物、水分、空氣、無(wú)機(jī)鹽及適當(dāng)?shù)乃釅A度，故能生存多種微生物。土壤中的微生物包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌、螺旋體、病毒等。其中以細(xì)菌含量為最多，占7090%。其次為放線菌和霉菌。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每克肥土含有菌幾億至幾十億個(gè)，每克貧瘠的土中也含有幾百萬(wàn)至幾千萬(wàn)個(gè)。人和動(dòng)物腸道內(nèi)排泄的微生物可污染土壤。在土壤中的微生物生存時(shí)間較長(zhǎng)，如具特殊構(gòu)造的芽胞菌(如破傷風(fēng)桿菌、炭疽桿菌等)生存時(shí)間可達(dá)數(shù)年或數(shù)十年。土壤中的微生物是空氣、水中以及環(huán)境污染的最重要的來(lái)源之一。第五節(jié) 微生物在自然界的分布 二、空氣中的微生物 空氣中的微生物主要來(lái)源于土壤或人、動(dòng)物的呼吸道、口腔。其數(shù)量隨人的密度、活動(dòng)程度(塵

24、土被攪動(dòng)的情況) 以及溫度、濕度、風(fēng)力等因素而異?？諝庵幸蛉狈I(yíng)養(yǎng)物，微生物在其中不能繁殖與久留，只有抵抗力較強(qiáng)的微生物如芽胞桿菌、八疊球菌、葡萄球菌以及真菌(如青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等)存活時(shí)間較長(zhǎng)。 空氣攜帶細(xì)菌主要有2 種方式；一是細(xì)菌可附著在塵土上(細(xì)微顆粒)，長(zhǎng)時(shí)間浮游在空氣中；其二，細(xì)菌在人咳嗽、噴嚏、唱歌、講話、呼吸時(shí)通過(guò)口腔、鼻腔部噴出的飛沫(大多數(shù)飛沫為48m)可長(zhǎng)時(shí)間浮游在空氣中，飛沫的水分蒸發(fā)后便成飛沫核，直徑縮至 l2m，附著的微生物隨氣流懸浮不定?？諝庵形⑸锸轻t(yī)療用品制造中引起污染的重要來(lái)源之一。因此必須做好空氣的清潔衛(wèi)生和消毒管理工作。第五節(jié) 微生物在自然界的分布

25、 三、水中的微生物 河水、池塘水、湖水，甚至地下水均含有微生物。在水中發(fā)現(xiàn)的微生物種類繁多，細(xì)菌分類學(xué)上的47科中就有39科細(xì)菌在水中找到。水中微生物大部分來(lái)自土壤，一部分來(lái)源于空氣和動(dòng)植物體。在多雨季節(jié)，地面的微生物被沖入河水中，此時(shí)水中的微生物含量大增。一般來(lái)講，地面水因受土壤、人們生活污水、人畜排泄物等污染的機(jī)會(huì)多，故含有的細(xì)菌也較多。池塘和貯水池的水，由于日光中紫外線的作用，微生物隨固形顆粒下沉，加之有機(jī)物缺乏，原生物的吞食及噬菌體的作用，使細(xì)菌數(shù)逐漸減少，這叫水的自凈作用。水源的污染程度，通常根據(jù)大腸桿菌的數(shù)目和細(xì)菌總數(shù)的多少來(lái)判定。測(cè)知水源的污染程度，對(duì)于我們選擇水源，用于醫(yī)療用品

26、的生產(chǎn)具有重要意義。第五節(jié) 微生物在自然界的分布四、正常人體常見(jiàn)的微生物 在人的皮膚和與外界相通的粘膜腔道中，都有微生物的生長(zhǎng)繁殖。這些存在于人體各部位的微生物，它們與宿主長(zhǎng)期保持著共生與互生的關(guān)系，通常稱它們?yōu)檎＞夯蛘Ｈ梭w常居菌。 在正常情況下，正常菌群的存在對(duì)人體是有益的。如大腸中大腸桿菌，可以合成核黃素、VB12、維生素K及多種氨基酸等人體不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還能干擾和抵抗其它病原微生物對(duì)宿主的侵入。但某些正常菌群，在人體抗力下降，或當(dāng)一 些微生物異位侵入某些組織時(shí)，都可以引起人體疾病，這些細(xì)菌通常稱條件致病菌?，F(xiàn)將人體各部位存在的主要菌群分述如下。第五節(jié) 微生物在自然界的分布皮膚

27、菌叢 人皮膚上的細(xì)菌體，與個(gè)人衛(wèi)生及環(huán)境情況有關(guān)。雖然人們經(jīng)常清潔皮膚，但由于人類不斷參加生產(chǎn)活動(dòng)，頻繁接觸周?chē)晃廴镜沫h(huán)境和物體，存在于皮膚深層(如毛囊、汗腺、皮脂腺)的微生物又不易除去，因而在人體排汗降溫時(shí)，會(huì)不斷向外排放細(xì)菌污染環(huán)境（圖4）。 圖4 皮膚上微生物寄生示意圖第五節(jié) 微生物在自然界的分布 因此，對(duì)于從事醫(yī)療用品生產(chǎn)的人員來(lái)講，特別是直接接觸醫(yī)療用品的部分，必須經(jīng)常定時(shí)清除皮膚表面的微生物（每2小時(shí)消毒一次）。一般皮膚常見(jiàn)菌叢有金黃色和白色葡萄球菌、大腸桿菌、類白喉?xiàng)U菌、八疊球菌、變形桿菌及真菌等。臉、頸部的皮膚，由于手的媒介常污染口鼻部的微生物。皮膚的脂肪和蠟質(zhì)分泌物內(nèi)，常有

28、親脂性酵母。而頭皮及光潔無(wú)毛的皮膚上可能存在各種癬菌和霉菌。第五節(jié) 微生物在自然界的分布呼吸道菌叢 正常人的氣管、支氣管和肺部基本上是無(wú)菌的；鼻腔常見(jiàn)的細(xì)菌為金黃色和白色葡萄球菌，類白喉?xiàng)U菌，草綠色鏈球菌，鼻咽部含菌較多，常見(jiàn)者為草綠色鏈球菌和革蘭陰性球菌，并有少數(shù)類白喉?xiàng)U菌和葡萄球菌。一些病原微生物如肺炎雙球菌、腦膜受雙球菌、溶血性鏈球菌、流感桿菌也常存在于恢復(fù)期患者或健康帶菌者鼻咽部。所以，有上呼吸道感染癥狀的人(咽炎、支氣管炎、卡他癥狀如咳嗽、噴嚏)均不宜進(jìn)潔凈工作室?？谇痪鷧?口腔中有適宜的溫度，并含有食物殘?jiān)?、脫落上皮和粘液等，是微生物生長(zhǎng)繁殖的良好場(chǎng)所?？谇恢械募?xì)菌種類很多，且數(shù)量

29、變化也大。常見(jiàn)的為革蘭陽(yáng)性球菌、奈氏球菌、乳酸桿菌、梭狀芽胞桿菌、螺旋體、白色念珠菌、類白喉?xiàng)U菌。正常談話時(shí)，常見(jiàn)噴出的細(xì)菌是腐生的綠色鏈球菌類。第五節(jié) 微生物在自然界的分布 胃腸道菌叢 健康人無(wú)食物的胃內(nèi)通常無(wú)菌。唾液及鼻咽分泌物中的細(xì)菌隨食物進(jìn)入胃中，或被胃酸殺滅，或很快進(jìn)入腸道。小腸中菌量很少，主要是腸球菌。大腸因含有已被消化的食物殘?jiān)哂羞m宜的酸堿度和溫度，適宜于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。糞便中細(xì)菌量占糞重量的三分之一，且微生物種類很多。少數(shù)健康人腸道中帶有病原菌，如痢疾桿菌，傷寒桿菌和其他病原性沙門(mén)氏菌。這些帶菌者能傳染他人。故帶菌者也不宜進(jìn)潔凈車(chē)間。人體細(xì)菌分布列于表1。 表表l 正常人體

30、微生物的分布部位正常人體微生物的分布部位 部 位 主 要 微 生 物 的 種 類口腔白色葡萄球菌、綠色鏈球菌、類白喉?xiàng)U菌、梭形桿菌、螺旋體、真菌胃一般無(wú)菌腸大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌、葡萄球菌、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、破傷風(fēng)桿菌、真菌、腺病毒等鼻咽腔葡萄球菌、綠色鏈球菌、類白喉?xiàng)U菌、卡答兒球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、副大腸桿菌、變形桿菌、腺病毒尿道（男）前尿道：白色葡萄球菌、類白喉?xiàng)U菌（女）無(wú)菌或少數(shù)革蘭陽(yáng)性球菌皮膚葡萄球菌、類白喉?xiàng)U菌、大腸桿菌、變形桿菌、真菌陰道乳酸桿菌、白色念珠菌、類白喉?xiàng)U菌、大腸桿菌外耳道葡萄球菌、類白喉?xiàng)U菌、綠濃桿菌、非病原性抗酸菌眼結(jié)膜白色葡萄球菌、類白喉

31、桿菌、結(jié)膜干燥桿菌等第五節(jié) 微生物在自然界的分布 了解細(xì)菌在自然界的分布，對(duì)于理解一次性醫(yī)療用品生產(chǎn)過(guò)程的衛(wèi)生學(xué)管理，樹(shù)立無(wú)菌觀念具有十分重要的意義。到處有菌，迫使我們?cè)谏a(chǎn)過(guò)程中，需要采取一切方法避免細(xì)菌的污染(無(wú)菌操作)，采取一切有效措施進(jìn)行滅菌(綜合措施的消毒滅菌如紫外線、化學(xué)消毒劑熏蒸以及潔凈廠房建造等) ，只有這樣才能生產(chǎn)出符合衛(wèi)生要求的產(chǎn)品。第六節(jié) 無(wú)菌醫(yī)療器械相關(guān)術(shù)語(yǔ) 無(wú)菌無(wú)菌是指物體或任一介質(zhì)中沒(méi)有活的微生物的存在，即無(wú)論用何種方法，檢不出活的微生物。滅菌用物理和化學(xué)的方法殺滅一切活的微生物（包括病原微生物和非病原微生物，繁殖型或芽孢型微生物）。滅菌劑能殺滅一切微生物的藥物，如臭氧、甲醛等。消毒采用物理或化學(xué)的方法，消除或殺滅外環(huán)境（傳播媒介）中的病原微生物或其他有害微生物。消毒劑用于殺滅微生物的化學(xué)藥物，如碘伏、乙醇、新潔爾滅等。第六節(jié) 無(wú)菌醫(yī)療器械相關(guān)術(shù)語(yǔ) 潔凈室（區(qū)）（潔凈廠房）需要對(duì)塵埃及微生物含量進(jìn)行控制的房間（區(qū)域），其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對(duì)該室（區(qū)域）內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。人員凈化用室人員在進(jìn)入潔凈室（區(qū)）前按一定程序進(jìn)行凈化的輔助用室。物料凈化用室物料在進(jìn)入潔凈室（區(qū)）前按一定程序進(jìn)行凈化的輔助用室。第七節(jié) 幾種常見(jiàn)的消毒滅菌法一、紫外線法殺菌原理與作用 紫外線可分為長(zhǎng)波段、中波段、短波段3組。以短波段250265nm的