南醫(yī)大藥物分析第02章藥物的鑒別實驗

1、Identification test）依據(jù)藥典進行的藥物分析主要有三大項：依據(jù)藥典進行的藥物分析主要有三大項： 鑒別、檢查和含量測定鑒別、檢查和含量測定藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，僅適用于貯藏在有標簽容器中的藥物，用僅適用于貯藏在有標簽容器中的藥物，用以證實是否為其所標示的藥物。以證實是否為其所標示的藥物。 這些試驗方法不能賴以鑒別未知物這些試驗方法不能賴以鑒別未知物 nChP 2010凡例對凡例對藥物鑒別的定義藥物鑒別的定義：鑒：鑒別項下規(guī)定的試驗方法，僅反映該藥別項下規(guī)定的試驗方法，僅反映該藥品某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)的品某些物理、化學(xué)或生

2、物學(xué)等性質(zhì)的特征，不完全代表該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的特征，不完全代表該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。確證。（一）性狀：（一）性狀：反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)( (mp. bp. . 等等) )。（二）一般鑒別試驗（二）一般鑒別試驗（General identification test）：）：證實其是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。僅證實其是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。僅供確認單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物供確認單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時，除另有規(guī)定外，

3、應(yīng)不適用?；蛴懈蓴_物質(zhì)存在時，除另有規(guī)定外，應(yīng)不適用。 無機藥物無機藥物 陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)陰離子和陽離子的特殊反應(yīng) 有機藥物有機藥物 典型的官能團反應(yīng)典型的官能團反應(yīng) （三）專屬鑒別試驗（三）專屬鑒別試驗（Specific identification test）：）：根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同學(xué)特性的不同, ,選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來鑒來鑒別藥物的真?zhèn)蝿e藥物的真?zhèn)?。例如，?jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗，證實某一藥物例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗，證實某一藥物為鈉鹽，但不能辨認是氯化

4、鈉、苯甲酸鈉或者是其為鈉鹽，但不能辨認是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實被鑒別的物質(zhì)到它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上，底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上，再進行專屬鑒別試驗，方可確認。再進行專屬鑒別試驗，方可確認。（一）溶液的濃度（一）溶液的濃度 （二）溶液的酸堿度（二）溶液的酸堿度 （三）溶液的溫度（三）溶液的溫度 （四）共存物質(zhì)干擾（四）共存物質(zhì)干擾 （五）反應(yīng)介質(zhì)（五）反應(yīng)介質(zhì) （六）試驗時間（六）試驗時間 （一）反應(yīng)靈敏度和空白試驗（一）反應(yīng)靈敏度和空白試驗1. .反應(yīng)靈敏度反應(yīng)靈敏度（Sensiti

5、vity） *最低檢出量（最低檢出量（Minimum detectable quantity）（又稱檢出限量）：（又稱檢出限量）：以以m m表示，就是應(yīng)用某一反表示，就是應(yīng)用某一反應(yīng)，在一定的條件下，能夠觀測出的供試品的最應(yīng)，在一定的條件下，能夠觀測出的供試品的最小量，其單位通常用微克（小量，其單位通常用微克（g）表示。）表示。 *最低檢出濃度（最低檢出濃度（Minimum detectable concentration）：以）：以1:G或或1:V表示，是應(yīng)用表示，是應(yīng)用于某一反應(yīng)，在一定條件下，能夠觀測出供于某一反應(yīng)，在一定條件下，能夠觀測出供試品的最低濃度試品的最低濃度。 2. 空白試驗

6、（空白試驗（Blank test）:就是在與供試就是在與供試品鑒別試驗完全相同的條件下，除不加供品鑒別試驗完全相同的條件下，除不加供試品外，其它試劑同樣加入進行的試驗。試品外，其它試劑同樣加入進行的試驗。 （二）提高靈敏度的方法（二）提高靈敏度的方法1.加入與水不相溶的有機溶劑加入與水不相溶的有機溶劑 2.改進觀測方法改進觀測方法 鑒別方法鑒別方法物理鑒別法物理鑒別法物理常數(shù)如沸點、熔點、相對密度、比旋度等均可物理常數(shù)如沸點、熔點、相對密度、比旋度等均可作為鑒別藥物的依據(jù)，常用于純度較高的原料藥的作為鑒別藥物的依據(jù)，常用于純度較高的原料藥的鑒別。如可可堿、氨茶堿、磷酸可待因等，測定熔鑒別。如可

7、可堿、氨茶堿、磷酸可待因等，測定熔點是一種簡便、專屬的鑒別方法。對于某些熔點過點是一種簡便、專屬的鑒別方法。對于某些熔點過高、對熱不穩(wěn)定、熔點不敏銳的藥物，可通過加入高、對熱不穩(wěn)定、熔點不敏銳的藥物，可通過加入試劑，使藥物與試劑反應(yīng)生成衍生物再測定熔點的試劑，使藥物與試劑反應(yīng)生成衍生物再測定熔點的方法易于測定方法易于測定制備衍生物測定熔點法。制備衍生物測定熔點法。 1. .干法干法 焰色試驗焰色試驗 加熱分解加熱分解 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。在適當?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試

8、品分在適當?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體解，生成有特殊氣味的氣體。 （二）化學(xué)鑒別法（二）化學(xué)鑒別法2. .濕法濕法 呈色或褪色反應(yīng)呈色或褪色反應(yīng) 沉淀生成反應(yīng)沉淀生成反應(yīng) 熒光反應(yīng)熒光反應(yīng) 氣體生成反應(yīng)氣體生成反應(yīng) 三氯化鐵呈色反應(yīng)三氯化鐵呈色反應(yīng)-酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基異羥肟酸鐵反應(yīng)異羥肟酸鐵反應(yīng)-多為芳酸及其酯類、酰胺類多為芳酸及其酯類、酰胺類 茚三酮呈色反應(yīng)茚三酮呈色反應(yīng)-脂肪氨基脂肪氨基 重氮化重氮化- -偶合顯色反應(yīng)偶合顯色反應(yīng)-芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基氨基氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反

9、應(yīng) 常見的呈色反應(yīng)常見的呈色反應(yīng)與重金屬離子的沉淀反應(yīng)與重金屬離子的沉淀反應(yīng)-如巴比妥類藥物如巴比妥類藥物與銅鹽、鈷鹽、銀鹽生成沉淀的反應(yīng)；與銅鹽、鈷鹽、銀鹽生成沉淀的反應(yīng)； 與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)- -多為生多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽；物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽； 其它沉淀反應(yīng)。其它沉淀反應(yīng)。 常見的呈色反應(yīng)有：常見的呈色反應(yīng)有：大多數(shù)的大多數(shù)的胺（銨）類胺（銨）類藥物、藥物、酰脲類酰脲類藥物以及某些藥物以及某些酰胺酰胺類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥

10、物，可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體生硫化氫氣體 含碘有機藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣含碘有機藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。 常有氣體生成的藥物常有氣體生成的藥物（三）（三）光譜鑒別法光譜鑒別法1紫外光譜鑒別法紫外光譜鑒別法 (p76)(p76) 同時測定、核對同時測定、核對max和和min； 規(guī)定一定濃度的供試液在規(guī)定一定濃度的供試液在max處的吸收度；處的吸收度； 規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法；規(guī)定吸收波長和

11、吸收系數(shù)法； 規(guī)定吸收波長和吸收度比值法；規(guī)定吸收波長和吸收度比值法； 經(jīng)化學(xué)處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。經(jīng)化學(xué)處理后，測定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。 2. .紅外光譜紅外光譜 鑒別法鑒別法標準圖譜對照法：標準圖譜對照法：中國藥典中國藥典（2010年版年版)對照品法：對照品法：USP (32)。 JP(15)采用對照品鑒別法、對采用對照品鑒別法、對照光譜鑒別和吸收波數(shù)鑒別法。照光譜鑒別和吸收波數(shù)鑒別法。BP(2009)采用對照品法和對照采用對照品法和對照光譜法光譜法（專屬性很強、（專屬性很強、 應(yīng)用較廣）應(yīng)用較廣）適用范圍適用范圍：組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥；特別是組分單一、結(jié)構(gòu)明確

12、的原料藥；特別是其他方法不易區(qū)分的同類藥物。其他方法不易區(qū)分的同類藥物。2.1. .試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法和溶液法；試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法和溶液法；2.2. .原料藥鑒別原料藥鑒別 注意多晶現(xiàn)象；注意多晶現(xiàn)象； 2.3. .制劑的鑒別制劑的鑒別 采取提取分離、適當干燥、壓片繪采取提取分離、適當干燥、壓片繪制圖譜。制圖譜。（1 1）有機溶劑直接提取，去除輔料干擾測定）有機溶劑直接提取，去除輔料干擾測定IRIR（2 2）有機酸，有機堿的對應(yīng)鹽，加入酸或堿沉淀，）有機酸，有機堿的對應(yīng)鹽，加入酸或堿沉淀，分離干燥測定分離干燥測定IRIR（3 3）主成分有機酸，加堿溶解，過濾，加酸沉

13、淀分）主成分有機酸，加堿溶解，過濾，加酸沉淀分離干燥測定離干燥測定IR IR （4 4）無輔料或輔料干擾少，可直接測定。）無輔料或輔料干擾少，可直接測定。（5 5）輔料無干擾，待測組分的晶型變化，可用對照）輔料無干擾，待測組分的晶型變化，可用對照品經(jīng)同法處理后的光譜對比。品經(jīng)同法處理后的光譜對比。（6 6）待測成分的晶型不變化，輔料存在干擾，可參）待測成分的晶型不變化，輔料存在干擾，可參照原料藥的表征光譜，在指紋區(qū)選擇數(shù)個不受輔料干照原料藥的表征光譜，在指紋區(qū)選擇數(shù)個不受輔料干擾的待測成分作為特征的鑒別譜帶。擾的待測成分作為特征的鑒別譜帶。3. 近紅外光譜法近紅外光譜法4. 原子吸收法（原子吸

14、收法（AAS）5. 核磁共振法（核磁共振法（NMR） 6.6. 質(zhì)譜法（質(zhì)譜法（MSMS）7.7. X X射線粉末衍射法（射線粉末衍射法（XRDXRD）（四）色譜鑒別法（四）色譜鑒別法 1. .薄層色譜鑒別法薄層色譜鑒別法 采用對照品（或標準品）比較采用對照品（或標準品）比較法，要求二者的法，要求二者的R Rf f值一致值一致 ；2. .高效液相色譜鑒別法高效液相色譜鑒別法 要求供試品和對照品色要求供試品和對照品色譜峰的保留時間比值一致；含量測定方法為內(nèi)標譜峰的保留時間比值一致；含量測定方法為內(nèi)標法法 ； 3. .氣相色譜鑒別法氣相色譜鑒別法 4. .紙色譜鑒別法紙色譜鑒別法 逐漸被薄層色譜法

15、所取代逐漸被薄層色譜法所取代 5. .高效毛細管電泳高效毛細管電泳（五）顯微鑒別法（五）顯微鑒別法 顯微鑒別主要用于中藥及其制劑的鑒別。顯微鑒別主要用于中藥及其制劑的鑒別。（六）生物學(xué)方法（六）生物學(xué)方法 對于某些有特殊生物效應(yīng)的藥物，可根據(jù)藥物的特對于某些有特殊生物效應(yīng)的藥物，可根據(jù)藥物的特殊生理活性將藥物通過各種途徑給予微生物、動物或殊生理活性將藥物通過各種途徑給予微生物、動物或動物的離體器官，觀察藥理作用以鑒別藥物，多用抗動物的離體器官，觀察藥理作用以鑒別藥物，多用抗生素、中藥及生化藥物的鑒別。生素、中藥及生化藥物的鑒別。 生物學(xué)法通常為生物效應(yīng)鑒定和基因鑒別；用于效生物學(xué)法通常為生物效

16、應(yīng)鑒定和基因鑒別；用于效價測定的同時亦可用于定性鑒別。價測定的同時亦可用于定性鑒別。1. .儀器方法的數(shù)量大大增加，尤其是儀器方法的數(shù)量大大增加，尤其是IR和和HPLC；2. .制劑廣泛采用制劑廣泛采用IRIR法鑒別；法鑒別；（七）藥物鑒別方法的新動向（七）藥物鑒別方法的新動向二、鑒別試驗與原理二、鑒別試驗與原理（一）有機氟化物（一）有機氟化物取供試品約取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄，照氧瓶燃燒法（附錄VIIC）進）進行有機破壞行有機破壞, ,用水用水20ml與與0.01mol/L氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，待燃燒完全后，充分振搖；取吸收液為吸收液，待燃燒完全后，充分振搖

17、；取吸收液2ml，加茜素氟藍試液，加茜素氟藍試液0.5ml，再加，再加12%醋酸鈉的稀醋醋酸鈉的稀醋酸溶液酸溶液0.2ml，用水稀釋至，用水稀釋至4 ml，加，加硝酸亞鈰硝酸亞鈰試液試液0.5ml，即顯，即顯藍紫色藍紫色；同時做空白對照試驗。；同時做空白對照試驗。 反應(yīng)式見反應(yīng)式見p72 （二）有機酸鹽（二）有機酸鹽1、水楊酸鹽、水楊酸鹽 加三氯化鐵試液加三氯化鐵試液1 1滴，即滴，即顯紫色顯紫色; ;加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。酸銨試液中溶解。 2、醋酸鹽、醋酸鹽 加硫酸和乙醇后，加熱，即分解發(fā)生加硫酸和乙醇后，

18、加熱，即分解發(fā)生醋酸乙酯醋酸乙酯的香氣；的香氣；取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液1滴，溶液呈深滴，溶液呈深紅色紅色, ,加稀無機酸，加稀無機酸，紅色即退去紅色即退去。3. .苯甲酸鹽苯甲酸鹽 取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液，即生成取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液，即生成赭赭色沉淀色沉淀；加稀鹽酸，變?yōu)榘咨恋?；加稀鹽酸，變?yōu)榘咨恋?；取供試品，置干燥試管中，加硫酸后，加熱，不炭取供試品，置干燥試管中，加硫酸后，加熱，不炭化，但析出化，但析出苯甲酸苯甲酸，在試管?nèi)壁凝結(jié)成白色升華物。，在試管內(nèi)壁凝結(jié)成白色升華物。 4. .枸櫞酸鹽枸櫞酸鹽 加稀硫酸數(shù)滴加

19、稀硫酸數(shù)滴, , 加熱至沸，加高錳酸鉀試液數(shù)滴振加熱至沸，加高錳酸鉀試液數(shù)滴振搖，搖，紫色即消失紫色即消失；溶液分成兩份，；溶液分成兩份，1份中加硫酸汞試份中加硫酸汞試液液1滴滴, ,另另1份中逐滴加入溴試液，均生成份中逐滴加入溴試液，均生成白色白色沉淀；沉淀；取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在管的內(nèi)壁成管的內(nèi)壁成銀鏡銀鏡。取供試品溶液，加醋酸成酸性后，加硫酸亞鐵試取供試品溶液，加醋酸成酸性后，加硫酸亞鐵試液液1滴和過氧化氫試液滴和過氧化氫試液1滴，待溶液滴

20、，待溶液退色退色后，用氫氧后，用氫氧化鈉試液堿化，溶液即化鈉試液堿化，溶液即顯紫色顯紫色。5. .酒石酸鹽酒石酸鹽 （四）托烷生物堿類（四）托烷生物堿類 取供試品約取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇得黃色的殘渣，放冷，加乙醇23滴濕潤，加固體滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小顆，即顯氫氧化鉀一小顆，即顯深紫色深紫色。（。（VitaliVitali反應(yīng)）反應(yīng)）（三）芳香第一胺類（三）芳香第一胺類 取供試品約取供試品約50mg，加稀鹽酸，加稀鹽酸1ml, ,必要時緩緩煮沸必要時緩緩煮沸使溶解，放冷，加使溶解，放冷，加0.1mol/L亞

21、硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性加堿性萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。橙黃到猩紅色沉淀。（五）常見無機離子的鑒別（五）常見無機離子的鑒別1. .鈉鹽鈉鹽焰色反應(yīng)焰色反應(yīng) 火焰顯黃色火焰顯黃色 取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。液，即生成黃色沉淀。 2. .鉀鹽鉀鹽焰色反應(yīng)：焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混焰色反應(yīng)：焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混存時，須隔藍色玻璃透視存時，須隔藍色玻璃透視 ；取供試品，加熱熾灼，除去可能含有的銨鹽，取供試品，加熱熾灼，除去可能含有的銨鹽，放冷后，

22、加水溶解，再加放冷后，加水溶解，再加0.1%四苯硼鈉溶液與四苯硼鈉溶液與醋酸，即生成白色沉淀。醋酸，即生成白色沉淀。3. .鈣鹽鈣鹽燃燒火焰顯磚紅色燃燒火焰顯磚紅色 取供試品溶液（取供試品溶液（120），加甲基紅指示液），加甲基紅指示液2滴，滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于鹽酸?？扇苡邴}酸。焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)：鋇的火焰光譜在可見光區(qū)有焰色反應(yīng)：鋇的火焰光譜在可見光區(qū)有533.56、513、488 nm幾條主要譜線，其中以幾條主要譜線，其

23、中以533.56 nm波長的波長的譜線最強譜線最強, , 故鋇鹽的燃燒火焰顯黃綠色，用綠色玻璃故鋇鹽的燃燒火焰顯黃綠色，用綠色玻璃透視火焰顯藍色。透視火焰顯藍色。取供試品溶液，加稀硫酸，即生成白色沉淀；分離取供試品溶液，加稀硫酸，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。4. .鋇鹽鋇鹽 白色白色 Ba2+SO42- BaSO4 5. .銨鹽銨鹽取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍，并能使藍，并能使硝酸亞汞硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯試液濕潤的濾紙顯黑色黑色。 黑色 （六）無機酸根（六）無機酸根1. .氯化物氯化物 1) ) 取供試液品溶液，加硝酸使成酸取供試液品溶液，加硝酸使成酸性后性后, ,加硝酸銀試液加硝酸銀試液, ,即生成白色凝乳狀