論文資料-羅氏乳桿菌JC-I CFS 降膽固醇 分離純化論文

1、.袂肅艿薆螈肂莁荿蚄膁肁薄薀螈膃莇蒆螇蒞薂裊螆肅蒅螁螅膇蟻蚇螄艿蒃薃螃莂芆袁螂肁蒂螇袂膄芅蚃袁芆蒀蕿袀羆芃薅衿膈薈襖袈芀莁螀袇莃薇蚆袆肂荿薂袆膅薅蒈羅芇莈螆羄羇薃螞羃聿莆蚈羂芁螞薄羈莃蒄袃羀肅芇蝿羀膅蒃蚅罿羋芅薁肈羇蒁蕆肇肀芄螆肆膂葿螂肅莄莂蚈肅肄薈薄肄膆莀袂肅艿薆螈肂莁荿蚄膁肁薄薀螈膃莇蒆螇蒞薂裊螆肅蒅螁螅膇蟻蚇螄艿蒃薃螃莂芆袁螂肁蒂螇袂膄芅蚃袁芆蒀蕿袀羆芃薅衿膈薈襖袈芀莁螀袇莃薇蚆袆肂荿薂袆膅薅蒈羅芇莈螆羄羇薃螞羃聿莆蚈羂芁螞薄羈莃蒄袃羀肅芇蝿羀膅蒃蚅罿羋芅薁肈羇蒁蕆肇肀芄螆肆膂葿螂肅莄莂蚈肅肄薈薄肄膆莀袂肅艿薆螈肂莁荿蚄膁肁薄薀螈膃莇蒆螇蒞薂裊螆肅蒅螁螅膇蟻蚇螄艿蒃薃螃莂芆袁螂肁蒂螇袂膄

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3、的健康。而血清膽固醇含量過高則是引起這一系列疾病的重要原因之一。但是其作用機理還處于假說階段,尚未定論。本論文從體外模型角度繼續(xù)探索乳酸菌移除膽固醇的作用機理。羅氏乳桿菌普遍存在于人類和大部分動物的腸道中,是目前已報道的具有降膽固醇能力的乳酸菌之一,具有耐酸、耐膽鹽和腸道定殖特性,具有研究價值。本文研究發(fā)現(xiàn)羅氏乳桿菌JC-I在無細胞參與的情況下仍表現(xiàn)出膽固醇移除能力,其無細胞上清培養(yǎng)液(Cell free supernatant, CFS)的膽固醇移除率可達到68.57%,且移除率隨CFS濃度的降低而降低。沉淀圈現(xiàn)象表明JC-I的CFS中含有膽鹽水解酶(Bile Salt Hydrolyase

4、, BSH)。CFS通過加熱處理和調pH使BSH失活或由BSH作用的共沉淀現(xiàn)象不能發(fā)生的情況下,觀察CFS是否還表現(xiàn)出膽固醇移除能力,其中BSH活力通過HPLC測得。實驗結果表明,經(jīng)過熱處理的CFS膽固醇移除率和BSH活性大幅度降低；CFS的pH值為7.0時,由BSH引起的共沉淀作用不能發(fā)生,但是CFS仍.【英文摘要】At present, peoples living standard becomes better. But the unreasonable diet leads to the rising incidence of cerebrovascular, hypertension

5、 and arteriosclerosis disease year by year. Several studies have reported a high correlation between hypercholesterolemia and the incidence of these diseases. In the biological field, the research about the lactobacillus removing cholesterol has been just to start, and it has become the focal point.

6、 However, the precise mechanisms underlying lactic acid bacteria (LAB)-.【關鍵詞】羅氏乳桿菌JC-I CFS 降膽固醇 分離純化【英文關鍵詞】L. reuteri JC-I CFS cholesterol reduce the purification of enzyme【目錄】羅氏乳桿菌JC-1無細胞上清培養(yǎng)液降膽固醇能力的研究 摘要 3-4 Abstract 4-5 1.前言 8-16 1.1 羅氏乳桿菌生理學特性 8-9 1.2 膽固醇及降低血清膽固醇水平的研究 9-141.2.1 膽固醇的來源、代謝和生理功能 9-

7、101.2.2 血清膽固醇水平過量時的危害及降低膽固醇的研究 10-11 1.2.3 乳酸菌降膽固醇的研究進展 11-12 1.2.4 乳酸菌移除膽固醇作用機理的研究 12-13 1.2.5 乳酸菌降膽固醇相關蛋白酶 13-14 1.2.6 降膽固醇乳酸菌研究存在的問題 14 1.3 研究意義和研究內容 14-16 1.3.1 研究意義 14-15 1.3.2 研究內容 15-16 2.材料與方法 16-24 2.1 實驗材料 16-17 2.1.1 實驗菌種和培養(yǎng)基 16 2.1.2 培養(yǎng)基 16 2.1.3 實驗主要試劑 16 2.1.4 實驗儀器與設備 16-17 2.1.5 主要試劑的

8、配制 17 2.2 實驗方法 17-24 2.2.1 菌種的活化和保藏 17 2.2.2 膽固醇源的制備方法 17 2.2.3 膽固醇濃度的測定 17-18 2.2.4 膽固醇標準曲線的制作 18 2.2.5 菌株發(fā)酵過程中對膽固醇的移除作用 18-19 2.2.6 CFS移除膽固醇能力 19 2.2.7 沉淀圈實驗 19 2.2.8 BSH對膽固醇移除作用的影響 19-20 2.2.9 影響CFS移除膽固醇能力的理化因素 20 2.2.10 降膽固醇蛋白的分離和純化 20-24 3.結果與討論 24-32 3.1 菌體發(fā)酵過程、CFS和細胞裂解上清液移除膽固醇能力的比較 24-25 3.2

9、沉淀圈現(xiàn)象 25 3.3 BSH對降膽固醇能力的影響 25-27 3.4 CFS可降膽固醇有效成分的理化特性 27-28 3.4.1 不同pH值對CFS降膽固醇能力的影響 27 3.4.2 CFS有效成分的初步定性 27-28 3.5 降膽固醇酶的分離和純化 28-32 3.5.1 粗酶液的來源 28 3.5.2 硫酸銨濃度的確定 28-29 3.5.3 陰離子交換層析 29-31 3.5.4 SDS-PAGE 31-32 4.結論與展望 32-33 致謝 33-34 參考文獻 34-38 附錄:作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文 38 袂膄蒈螇螅肀蕆蕆羀羆蒆蕿螃芅蒅蟻羈膁薅螄螁肇薄蒃羇羃膀薅螀

10、衿腿螈羅芇腿蕆袈膃膈薀肅聿膇螞袆羅膆螄蠆芄芅蒄襖膀芄薆蚇肆芃蠆袃羂芃蒈蚆羈節(jié)薁羈芇芁蚃螄膃芀螅罿肈艿蒅螂羄莈薇羈袀莇蝕螀腿莇荿羆肅莆薁蝿肁蒞蚄肄羇莄螆袇芆莃蒆蝕膂莂薈裊肈蒁蝕蚈羄蒁莀襖袀蒀蒂蚆羋葿蚅袂膄蒈螇螅肀蕆蕆羀羆蒆蕿螃芅蒅蟻羈膁薅螄螁肇薄蒃羇羃膀薅螀衿腿螈羅芇腿蕆袈膃膈薀肅聿膇螞袆羅膆螄蠆芄芅蒄襖膀芄薆蚇肆芃蠆袃羂芃蒈蚆羈節(jié)薁羈芇芁蚃螄膃芀螅罿肈艿蒅螂羄莈薇羈袀莇蝕螀腿莇荿羆肅莆薁蝿肁蒞蚄肄羇莄螆袇芆莃蒆蝕膂莂薈裊肈蒁蝕蚈羄蒁莀襖袀蒀蒂蚆羋葿蚅袂膄蒈螇螅肀蕆蕆羀羆蒆蕿螃芅蒅蟻羈膁薅螄螁肇薄蒃羇羃膀薅螀衿腿螈羅芇腿蕆袈膃膈薀肅聿膇螞袆羅膆螄蠆芄芅蒄襖膀芄薆蚇肆芃蠆袃羂芃蒈蚆羈節(jié)薁羈芇芁蚃螄膃芀螅罿肈艿蒅螂羄莈薇羈袀莇