馬鈴薯黑痣病室內抗性鑒定技術規(guī)程編制說明-內蒙古

1、馬鈴薯黑痣病室內抗性鑒定技術規(guī)程編制說明一、工作情況1. 任務來源根據(jù)國家自然科學基金（31460468）、內蒙古自治區(qū)科技計劃重點項目“馬鈴薯適宜品種選育研究 ”、內蒙古自治區(qū)重大科技專項 “馬鈴薯優(yōu)質多抗適應性強新品種培育 ”和內蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局文件精神，即 內市監(jiān)標準字 2019300 號文件通知，內蒙古農業(yè)大學提出“馬鈴薯黑痣病室內抗性鑒定技術規(guī)程”地方標準，經批準立項，由內蒙古農業(yè)大學園藝與植物保護學院植物病理教研室和內蒙古農業(yè)大學農學院馬鈴薯育種研究室共同負責起草工作。2.起草單位： 內蒙古農業(yè)大學、 中國農業(yè)科學院農業(yè)資源與農業(yè)區(qū)劃研究所、烏蘭察布市農業(yè)科學研究院。3.起

2、草人： 張笑宇、于卓、李得宙、于肖夏、盧艷麗、王鳳梧、張冬梅、李宇晨、劉雨薇、王野、馮亞艷、王麗瑋、邢星。二、制定本標準的目的、意義內蒙古西部地區(qū)是我國馬鈴薯主產區(qū)，土壤氣候條件適合馬鈴薯的生長，馬鈴薯產量高，適口性好，營養(yǎng)豐富。近幾年來，隨著馬鈴薯產業(yè)的發(fā)展，種植面積不斷增加，連作年限逐漸延長，馬鈴薯土傳病害的發(fā)生也越來越嚴重，已經成了制約馬鈴薯生產的主要障礙之一，尤其是馬鈴薯黑痣病 ( Rhizoctonia solani Kühn) ，已經上升為內蒙古地區(qū)的主要病害之一。在烏蘭察布地區(qū)調查黑痣病發(fā)生情況時，發(fā)現(xiàn)重病田馬鈴薯地下莖發(fā)病率達到 85以上，塊莖發(fā)病率達到 100。該病

3、常引起種薯腐爛、芽腐、莖腐、根腐和塊莖黑痣，致使馬鈴薯嚴重減產和品質變劣，產量損失達 50%。目前，主要利用傳統(tǒng)的化學藥劑進行防治，但效果不理想，不能從根本上控制該病害，且化學防治方法，使用不當會造成環(huán)境污染和殘留殘毒，易使植物產生抗藥性。生物防治方法具有高效、經濟和相對安全的特點，在土傳病害防治中具有突出的優(yōu)勢，但是生產中使用的很少。農業(yè)防治具有重要的作用， 但是單獨使用農業(yè)栽培措施，是很難控制該病害的。選育和利用抗病品種是最經濟有效的防治途徑，但需有效的抗性鑒定技術對種質資源進行準確評價。目前，關于馬鈴薯黑痣病抗病育種及其抗性材料的鑒定和篩選研究報道很少，還沒有相對成熟的抗性鑒定方法，馬鈴

4、薯資源的抗病性情況還不清楚，研究報道的多是田間抗性鑒定法，用時間較長，且易受環(huán)境條件的影響，導致抗性鑒定的結果不穩(wěn)定。室內抗性鑒定技術能初步篩選出極抗和極感病的品種，對田間抗性鑒定結果進行驗證，能加快鑒定的速度。室內抗性鑒定技術是在理想的條件下完成的，利用理想的材料，受環(huán)境影響小，抗性鑒定結果更準確。因此，將研究成果進行集成，制定有效的馬鈴薯抗黑痣病室內鑒定技術規(guī)程，篩選出抗性水平高且穩(wěn)定的馬鈴薯種質材料，為內蒙古地區(qū)的經濟發(fā)展做出應有的貢獻。三、本標準的編寫過程自 2009 年以來，本課題組開始了馬鈴薯品種對黑痣病抗性的室內和田間試驗，在 2009-2012 年，進行了馬鈴薯田間品種抗性鑒定

5、試驗， 得出了田間用小麥麩皮培養(yǎng)絲核菌培養(yǎng)物做接種體，培養(yǎng)物 2-4g單株接種能很好地鑒定馬鈴薯品種對黑痣病的抗病性。室內嘗試了薯片法、組培苗法、牙簽法等多種方法，最終選擇薯片法和組培苗法能快速準確的鑒定馬鈴薯品種對黑痣病菌的抗病性，薯片法和組培苗法和田間鑒定結果一致，方法準確可行。 2013-2018 年在武川縣、察右中旗、涼城縣、內蒙古農業(yè)大學農場進行了多年多點試驗驗證了試驗結果的可靠性。經過了多年多點的試驗研究，本課題組對試驗結果進行了組裝和集成，編制形成了“規(guī)程”草案。 2019年 10 月 10 日列入內蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局地方標準制訂項目計劃，在項目合同簽訂后，成立了標準起草小

6、組，制定了標準起草計劃及實施方案。又對標準的內容進行了細化研究，完成了效果穩(wěn)定、數(shù)據(jù)可靠、操作簡單的標準內容。于2019 年11 月，由標準起草小組共同完成了初稿的編寫，并征求了內蒙古農牧業(yè)科學院、內蒙古植保站、內蒙古農業(yè)大學同行專家的意見，形成了征求意見稿并上報自治區(qū)市場監(jiān)督管理局，于年 月 日在市場監(jiān)督管理網(wǎng)上公開征求意見。根據(jù)征得的修改意見，項目組再次對該標準進行修改完善，形成送審稿，定于年月日完成自治區(qū)農業(yè)標準化技術委員會組織召開的地方標準審定。四、制定標準的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標準的關系（一）標準編制原則和依據(jù)1、編寫格式按中華人民共和國國家標準GB/T1.1-2009 標

7、準化工作導則第 1 部分：標準的結構和編寫。2、主要技術指標來源于 2009 年2018 年課題組進行試驗研究的操作方法與結果。馬鈴薯黑痣病室內抗性鑒定技術的實施加快馬鈴薯黑痣病的抗性鑒定的步伐，在理想的環(huán)境下操作，結果準確可靠。制定標準的原則是在嚴格使用技術的前提下，盡量選擇健康的馬鈴薯塊莖，健壯一致的馬鈴薯組培苗，保證鑒定結果的可靠性。（二）與有關現(xiàn)行法律、法規(guī)、標準的關系依據(jù)中華人民共和國標準化法等部門規(guī)章。五、主要條款的說明，主要技術指標、參數(shù)、試驗驗證的論述利用抗病品種是防治該病害的最經濟有效的途徑。目前，在馬鈴薯種質資源中沒有發(fā)現(xiàn)免疫的品種，高抗的品種也很少，多數(shù)是感病品種，但是不

8、同品種間抗病性存在顯著差異。因此，對馬鈴薯品種進行抗性鑒定是可行的。但是該病的抗病性屬于多基因控制的數(shù)量遺傳性狀，抗性表達易受環(huán)境因素影響，年度間環(huán)境因素變化，不同的地理環(huán)境、不同的土壤理化性狀都會造成抗性級別的變化。因此，田間進行抗性鑒定必須經過多年多點的試驗，勞動強度大，結果不準確，經初步鑒定的材料，還應進行重復鑒定，同時應加大鑒定植株的群體數(shù)量和足夠的重復，以消除群體內個體差異的影響，提高接種鑒定結果的準確性。且品種多年種植容易產生種性退化。即使田間有很好的鑒定方法，最好用室內的方法進行驗證，以減輕勞動量，減少環(huán)境因素影響，增加鑒定結果的準確性。因此，對馬鈴薯抗黑痣病的室內鑒定方法研究是

9、非常必要的。1、2009 至 2010 年進行了田間試驗， 2009 年試驗田設在呼和浩特市園藝科技示范園區(qū)網(wǎng)棚內。單株接種量設 2g、3g、 4g、5g 共 4 個處理 。 2010 年試驗田設在內蒙古農業(yè)大學農場，單株接種量 2g，試驗設計、接種方法、田間管理措施同 2009 年。田間鑒定結果如表 1。表 12009 和 2010 年田間接種塊莖抗病性鑒定結果2009 年2010 年兩 年 平品種接種量 2 g、3 g 和 4g 的平均相相對抗兩年綜合評均 病 情抗性評價病情指數(shù)抗性評價指數(shù)對抗病指數(shù)病指數(shù)底西芮0.77MR29.250.61MRMR25.17隴薯 6號0.60MR29.0

10、70.61MRMR33.23黑美人0.68MR37.070.51MSMR- MS33.52隴薯 5號0.61MR40.820.46MSMR- MS38.98J07-60.50MS15.560.79MRMS- MR31.38J 08-10.49MS22.430.70MRMS -MR35.20澀皮紅0.53MS34.940.53MSMS39.46克新 1 號0.51MS34.000.55MSMS40.11隴薯 3號0.52MS39.000.48MSMS42.18紫花白0.50MS37.50.50MSMS42.29青薯 1860.57MS43.950.41MSMS42.25LK990.47MS37.

11、640.50MSMS43.49水洗紅0.64MR54.760.27HSMR- HS44.53J08-30.41MS37.90.49MSMS47.012、馬鈴薯脫毒組培苗接種黑痣病菌毒素對幼苗進行抗性鑒定將在 MS 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 12cm 左右的馬鈴薯脫毒組培苗移入裝有黑痣病菌毒素的試管中，每試管 1 株，置 4000lx、 25光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，光照 16h/d，培養(yǎng) 8d 按照病情分級標準進行病級調查，計算病情指數(shù)和相對抗病指數(shù)，根據(jù)相對抗病指數(shù)進行抗性評價。結果，組培苗接種毒素抗性鑒定結果和兩年塊莖田間接種鑒定結果正相關，平均病情指數(shù)的相關系數(shù)為 r =0.6741* 。馬鈴薯脫毒組培苗是

12、理想的材料，不帶有任何病原菌的影響，且馬鈴薯品種以組培苗的形式保存更方便，隨時可以取材進行試驗，克服塊莖保存的環(huán)境條件影響及休眠和生芽的限制，結果準確可靠，且大大減少了勞動量和鑒定的時間。表 2組培苗接種毒素抗性鑒定試驗結果相對抗抗性病情相對抗抗性品種病情指數(shù)評價品種病指數(shù)評價病指數(shù)指數(shù)底西芮23.080.64MR隴薯 7 號45.050.29MS黑美人25.590.60MRJ08-145.240.29MS隴薯 3 號26.110.59MRJ08-450.620.21MSLK9931.020.51MR澀皮紅51.720.19HS克新 1 號35.940.44MSJ07-252.310.18HS

13、紫花白42.340.34MSJ08-254.860.14HS費烏瑞它43.180.32MS夏坡蒂56.860.11HS隴薯 6號43.750.31MSJ07-558.820.08HS青薯 18645.510.29MS水洗紅62.750.02HS隴薯 5號45.330.29MS大西洋63.730.00HS3、薯片接菌法鑒定馬鈴薯塊莖抗病性選健康的馬鈴薯塊莖，先用0.5%的 KMO 4進行表面消毒，無菌操作切成厚約0.6cm 的薯片，放在盛有 500ml 滅菌水瓊脂的鐵磁盤中， 將 PDA 培養(yǎng)基培養(yǎng) 4d 的馬鈴薯黑痣病菌菌餅倒放在薯片上，然后用透明塑料膜封口，置25恒溫培養(yǎng)箱內暗培養(yǎng)，48h 用十字交叉法測量病斑大小， 根據(jù)病斑擴展情況鑒定馬鈴薯塊莖的抗病性。結果，馬鈴薯薯片接種試驗結果和兩年塊莖田間接種平均病情指數(shù)的相關系數(shù) r=0.4551* ，鑒定結果一致。經過前期的大量試驗研究馬鈴薯黑痣病的發(fā)生程度和營養(yǎng)情況有關，因此用此方法進行品種抗性鑒定，結果準確可靠。表 3馬鈴薯薯片接種試驗結果品種48h 病斑面積品種48h 病斑面積 (cm2)底西芮0.53J08-11.75LK990.68費烏瑞它1.84紫花白0.73J