石河子大學(xué)國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新性計(jì)劃項(xiàng)目中期檢查表

1、石河子大學(xué)“國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃”項(xiàng)目中期檢查表項(xiàng)目名稱高抗氧化活性沙棗多酚的篩選及穩(wěn)定性研究項(xiàng)目編號(hào)091075910項(xiàng)目成員李曉燕 馬曉麗 張建軍 夏吉飛 吳春燕指導(dǎo)教師劉紅 教授成果形式研究報(bào)告或論文立項(xiàng)時(shí)間2009年 11 月 31 日 2010年 12月 31 日項(xiàng)目進(jìn)展情況：自項(xiàng)目批準(zhǔn)以來(lái)，該項(xiàng)目組成員按照項(xiàng)目任務(wù)書(shū)的計(jì)劃安排，進(jìn)行了明確的分工，各項(xiàng)工作一直有序進(jìn)行。一、第一階段：2009.122010.1進(jìn)一步豐富文獻(xiàn)資料，進(jìn)行系統(tǒng)分析，詳細(xì)制定項(xiàng)目研究方案。二、第二階段：2010.22010.61. 多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。2、不同生長(zhǎng)期沙棗果葉中沙棗多酚含量的測(cè)定及消長(zhǎng)規(guī)律研

2、究。三、第三階段：2010.62010.81、對(duì)沙棗多酚對(duì)羥自由基能力的研究。2、對(duì)D-301大孔樹(shù)脂進(jìn)行預(yù)處理以及靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)的研究。研究成果概述:一、多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制1、測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取沒(méi)食子酸溶液和沙棗提取液的稀釋液各1.0 ml， 分別與各顯色試劑混合均勻并定容至25 ml，室溫避光放置，以1.0 ml蒸餾水代替樣品作空白，在440860nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，得到?jīng)]食子酸和沙棗提取液經(jīng)顯色反應(yīng)后的吸收光譜，選擇測(cè)定的最佳波長(zhǎng)為765nm。2、顯色體系中各試劑的用量Folin-Ciocalteau試劑與10%Na2CO3比例準(zhǔn)確移取1ml沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，加入0.50 ml Fol

3、in-Ciocalteau試劑，加入不同體積10% Na2CO3 溶液，經(jīng)顯色反應(yīng)后加水定容至25ml，放置反應(yīng)一段時(shí)間后，于分光光度計(jì)上測(cè)定吸光值。表 1 10% Na2CO3體積（mL）1.002.003.004.005.00吸光度值0.1870.2330.2960.3230.334結(jié)果表明，F(xiàn)olin-Ciocalteau試劑與10%Na2CO3比例為1：10。 Folin-Ciocalteau試劑用量取1.00ml沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，加入0. 503.50ml Folin-Ciocalteau試劑，加入相同體積的10%Na2CO3 溶液，經(jīng)顯色反應(yīng)后加水定容至25ml，放置反應(yīng)一段時(shí)間

4、后，測(cè)定吸光值。表 2Folin-Ciocalteau用量0.501.001.502.002.503.003.50吸光度值0.2720.1860.1850.1860.1920.1770.124當(dāng)Folin-Ciocalteau試劑用量為0.50ml時(shí)，吸光度值最大。3、顯色時(shí)間將各比色試劑混合均勻后，室溫避光放置，每隔30min時(shí)間測(cè)定其吸光值，確定比色體系顯色反應(yīng)完全所需要的時(shí)間。表 3顯色時(shí)間（min）306090120150吸光度值0.4950.5030.5040.5050.505隨著時(shí)間的增加，吸光度值增加，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為60min時(shí)，吸光度值增加趨勢(shì)最大，隨后保持平穩(wěn)。因此選擇60mi

5、n作為反應(yīng)時(shí)間。4、多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確稱取真空干燥（60干燥4h）至恒重的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品適量置于100mL棕色容量瓶中，用水溶解并定容至100mL，搖勻，作為對(duì)照品溶液。將配制好的沒(méi)食子酸溶液配成濃度為4.43g·mL-1、8.86g·mL-1、17.72g·mL-1、35.44g·mL-1、70.88g·mL-1、88.60g·mL-1的溶液。分別取上述不同濃度溶液2mL加到25mL容量瓶中，然后依次加入2mL蒸餾水，0.5mL 2mol/L福林酚試劑，5mL 10%Na2CO3溶液，用水定容至25mL。室溫下反應(yīng)1h，在765

6、nm下測(cè)定吸光度。由吸光度對(duì)濃度進(jìn)行回歸得方程：A=0.0091c-0.014（R=0.9996），曲線在4.43g·mL-188.60g·mL-1范圍內(nèi)對(duì)照品沒(méi)食子酸的量與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。表 4 不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度沒(méi)食子酸濃度（g·mL-1）4.438.8617.7235.4470.8888.60吸光度值0.0150.0630.1570.3160.6270.785 二、不同生長(zhǎng)期沙棗葉中沙棗多酚含量的測(cè)定及消長(zhǎng)規(guī)律研究在前期的研究基礎(chǔ)上，確定超聲輔助提取沙棗多酚的最佳提取方案:固液比為1:12， 溶劑為70%的乙醇溶液，超聲法提取3次（溫度為25

7、），每次20min。表5 不同生長(zhǎng)期沙棗葉中多酚含量數(shù)據(jù)表時(shí)間/月0.511.522.533.5含量（mg/ml）0.0450.2490.420.6290.7250.7110.705時(shí)間/月44.555.566.57含量（mg/ml）0.6790.6160.5870.5720.4210.2820.273由上圖可知，沙棗葉中多酚的含量，隨生長(zhǎng)期的不同而不同，整體趨勢(shì)為先增大后減小。葉子6月份達(dá)到最大值。三、沙棗多酚對(duì)羥自由基能力的研究在25ml容量瓶中依次加入1.0mL，7.5mmoL/mL鄰二氮菲溶液，5.0mL PBS(PH=7.4),1.0mLFeSO4溶液，1.0mL，0.1%H2O2,

8、蒸餾水定容至25mL作損傷管。取7.5mmoL/mL鄰二氮菲溶液，5.0mL PBS, 1.0mLFeSO4溶液定容至25mL作未損傷管。取7.5mmoL/mL鄰二氮菲溶液，5.0mL PBS，1.0mLFeSO4溶液，1mL提取液，1mL0.1%H2O2定容至25mL作加藥管。根據(jù)下面公式計(jì)算提取液對(duì)羥自由基的清除率。 清除率=（A藥-A損傷）/A未損傷-A損傷表 6不同生長(zhǎng)期沙棗葉中多酚清除羥自由基能力數(shù)據(jù)表時(shí)間/月0.511.522.5清除率0.0440.3770.6540.8800.938時(shí)間/月33.544.55清除率0.9750.9560.9200.8870.785表7 不同生長(zhǎng)期

9、沙棗果中多酚清除羥自由基能力數(shù)據(jù)表時(shí)間/月7891011清除率0.5940.8840.9500.9260.771實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)，沙棗葉和果中多酚清除羥自由基的能力先增強(qiáng)后減弱。四、大孔樹(shù)脂的分離純化1、大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理（1）取大孔吸附樹(shù)脂，用95%乙醇浸泡24h，然后濕法裝柱。（2）用95%乙醇沖洗層析柱（流速2BV/h，BV為樹(shù)脂體積數(shù)，下同），至流出液加2倍蒸餾水后不產(chǎn)生渾濁為止，再用大量蒸餾水洗至流出液澄清。（3）繼續(xù)用23BV的5%鹽酸溶液洗層析柱（流速46BV/h），并浸泡23h，再用蒸餾水以同樣的流速洗至中性。（4）用23BV的5%氫氧化鈉溶液洗層析柱（流速46

10、BV/h），浸泡23h后，再用蒸餾水以同樣的流速洗至中性，用95%乙醇浸泡備用。2、靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取經(jīng)預(yù)處理的樹(shù)脂2.00克，分別置于250mL具塞錐形瓶中，加入50mL一定濃度的沙棗多酚提取液，置于20搖床，120r/min振蕩吸附24h，測(cè)定溶液中沙棗多酚的濃度，按下式計(jì)算大孔樹(shù)脂的吸附量及吸附率： Q吸附量(c1c2)V/W Q吸附率c1c2/ c1式中：c1吸附前溶液濃度（mg·mL-1）c2吸附后溶液濃度（mg·mL-1）V溶液體積（ml）W樹(shù)脂重量（g）將吸附后的樹(shù)脂過(guò)濾，并用50mL蒸餾水沖洗樹(shù)脂，將其置于250mL的具塞錐形瓶中，加入50mL 60%的乙

11、醇溶液，置于20搖床，120r/min振蕩解吸24h，測(cè)定解吸液中沙棗多酚的濃度，按下式計(jì)算大孔樹(shù)脂的解吸量及解吸率：Q解吸量cV/WQ解吸率Q解吸量/ Q吸附量×100%式中：c解吸液濃度（mg·mL-1）V解吸液體積（ml）W樹(shù)脂重量（g）下一階段工作計(jì)劃：1、其它品種不同生長(zhǎng)期沙棗多酚抗氧化活性的研究2、對(duì)D-301大孔樹(shù)脂及硅膠分離純化沙棗多酚優(yōu)化條件的研究。3、進(jìn)行高抗氧化活性沙棗多酚穩(wěn)定性的研究4、整理數(shù)據(jù)，對(duì)前期所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并撰寫(xiě)研究論文和結(jié)題報(bào)告。經(jīng)費(fèi)使用情況：實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)：0.4萬(wàn)元 測(cè)試費(fèi)：0.09萬(wàn)元 專用玻璃儀器添置費(fèi)：0.08萬(wàn)元 資料費(fèi)、復(fù)印費(fèi)等：0.05萬(wàn)元 采樣交通費(fèi)：0.07萬(wàn)