胃癌發(fā)生發(fā)展中可溶型Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表達(dá)及其意義

1、胃癌發(fā)生發(fā)展中可溶型的表達(dá)及其意義 【摘要】探討基因蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：應(yīng)用免疫組化、特定組織蛋白提取及印跡雜交技術(shù)，對(duì)例正常胃黏膜，例癌前病變和例胃癌組織中的表達(dá)情況加以分析。結(jié)果：正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織的陽性率分別為5、5、7；的陽性率分別為20、7、6。印跡雜交顯示：胃癌細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白以分子量的可溶型（）為主，伴少量的膜型（）。結(jié)論：在正常胃黏膜和癌前病變、胃癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度差異有顯著性（）；在胃癌組織和正常胃黏膜、癌前病變中的表達(dá)強(qiáng)度差異有顯著性（）。 【關(guān)鍵詞】胃癌基因表達(dá)免疫逃逸細(xì)胞凋亡 ：，：，：，5，57，20，76，2 / 11：，（）：，（），（）

2、；胃癌是發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。（）是腫瘤壞死因子（）一神經(jīng)生長因子（）受體超家族成員，它通過與其配件（，）相互作用，調(diào)控細(xì)胞的生存和凋亡。研究表明：系統(tǒng)的異常表達(dá)，不僅參與胃癌過程中細(xì)胞凋亡異常的調(diào)節(jié)，而且與胃上皮細(xì)胞癌變及免疫逃逸有關(guān)。本文通過檢測正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織的表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 材料和方法 組織來源例正常胃黏膜、例癌前病變和例胃癌組織（人正常胃黏膜和胃癌手術(shù)切除）標(biāo)本選自本室與中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科共建瘤庫。標(biāo)本在術(shù)后內(nèi)獲取，液氮速凍后，保存。 主要試劑兔抗人、抗體（，）購自北京中山生物技術(shù)公司；增強(qiáng)化學(xué)熒光蛋白檢測

3、（）試劑盒系英國公司產(chǎn)品；試劑盒為美國公司產(chǎn)品。 方法 冰凍組織切片將冰凍切片機(jī)（型）的操作箱用乙醇擦洗數(shù)次，以滅活蛋白酶；溫度降至左右，然后按常規(guī)方法做以上組織的冰凍切片。 免疫組織化學(xué)染色將上述切片做染色，組織病理學(xué)觀察，選擇病變典型的切片用冷丙酮固定，保存，用于免疫組織化學(xué)染色?？箍贵w的工作濃度均為。以食道鱗狀上皮為陽性對(duì)照。免疫組織化學(xué)染色的步驟按文獻(xiàn)所述方法進(jìn)行。 特定組織的蛋白提取冰凍組織的連續(xù)切片，染色，組織病理學(xué)觀察。若有多種組織存在，則按本研究室建立的特定組織選擇法進(jìn)行蛋白提取。選擇切片總體積約××，立即用加樣器吸頭將其移至含×，超聲破碎，加熱，

4、離心，取上清，用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行蛋白濃度然后調(diào)整濃度至，保存?zhèn)溆谩?蛋白分析取蛋白樣本，在中電泳分離，蛋白按常規(guī)行電轉(zhuǎn)移，恒流，過夜。固相支持物為硝酸纖維素膜。脫脂奶粉（，），封閉，以稀釋度為的、抗體與膜上靶蛋白孵育。辣根過氧化物酶偶聯(lián)的豬抗兔抗體（，）作用后，用熒光顯色系統(tǒng)曝光顯色。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)。 結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果顯示：在正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織的陽性率分別為5、5、7，在正常胃黏膜的表達(dá)顯著高于癌前病變和胃癌組織（）；在正常胃黏膜、癌前病變、胃癌組織陽性率分別為20、7、6，在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常胃黏膜和癌前病變（）。的表達(dá)部位基本以細(xì)胞為主，表現(xiàn)為

5、細(xì)胞漿呈棕黃色染色顆粒。印跡雜交顯示：胃癌細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白以分子量的可溶型（）為主，伴少量的模型（），見表1。表1Fas和Fasl在不同組織中的表達(dá)情況 討論 惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多階段的過程，一般表現(xiàn)為正常上皮、不典型增生、原位癌、浸潤癌，同時(shí)腫瘤的發(fā)生是多基因變異積累的過程。近年研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡的抑制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。由系統(tǒng)及其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子構(gòu)成了細(xì)胞凋亡的重要通路，在此通路上任一環(huán)節(jié)的缺失都可導(dǎo)致癌細(xì)胞逃逸細(xì)胞凋亡，從而實(shí)現(xiàn)無限增殖。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：癌前病變、胃癌組織細(xì)胞陽性表達(dá)率顯著低于正常胃黏膜，提示胃癌細(xì)胞下調(diào)；癌前病變、胃癌組織細(xì)胞陽性表達(dá)率顯著高于正

6、常胃黏膜，提示胃癌細(xì)胞上調(diào)。因此證實(shí)了胃癌組織細(xì)胞中存在系統(tǒng)平衡失調(diào)，導(dǎo)致系統(tǒng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑發(fā)生異常，可能是胃黏膜癌變過程中細(xì)胞凋亡抑制的重要機(jī)制之一。另外，印跡雜交顯示：胃癌細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白以分子量的可溶型（）為主，伴少量的膜型（）。胃癌細(xì)胞中缺乏膜型的表達(dá)意味著將不能與或其重組體相結(jié)合觸發(fā)凋亡。這提示：胃癌細(xì)胞可能通過大量分泌來封閉細(xì)胞外基質(zhì)中以及免疫活性細(xì)胞表達(dá)的，以阻止后者與自身含膜內(nèi)死亡區(qū)域（，）的接觸，從而使胃癌細(xì)胞獲得免疫逃逸能力，使胃癌細(xì)胞得以持續(xù)增殖。在胃癌發(fā)生發(fā)展各階段中均有表達(dá)，但在表達(dá)程度上存在一定差異，即癌前病變、胃癌組織陽性表達(dá)率顯著低于正常胃黏膜，表明表達(dá)異?？赡茉谖赴┌l(fā)生過程中起一定作用。在癌前病變和胃癌組織黏膜間的表達(dá)差異無顯著性，說明的出現(xiàn)很可能是各類胃癌及癌前病變的重要生物學(xué)特性之一。對(duì)的表達(dá)、功能及其可調(diào)性的分子機(jī)制的研究對(duì)胃癌的早期診斷和預(yù)后判斷及基因治療等方面具有重要意義。 【參考文獻(xiàn)】 ，： ，： ，： 巖，劉寧，劉佳，等冰凍