蠶豆病ppt素材課件教學(xué)提綱

1、蠶豆病PPT素材課件惡心、嘔吐、面色蒼白惡心、嘔吐、面色蒼白 皮膚及鞏膜黃染皮膚及鞏膜黃染 紅細(xì)胞紅細(xì)胞 1.981012/L 血紅蛋白血紅蛋白53g/L 血清總膽紅素血清總膽紅素85.5mol/L 尿蛋白（尿蛋白（+） 尿膽紅素尿膽紅素() 尿膽素原尿膽素原(+) 尿液鏡下未見紅細(xì)胞尿液鏡下未見紅細(xì)胞 黃疸黃疸紅細(xì)胞膜不完整，已破裂紅細(xì)胞膜不完整，已破裂紅細(xì)胞含量少紅細(xì)胞含量少含量明顯增加含量明顯增加血紅蛋白量減少血紅蛋白量減少排尿呈醬油樣色排尿呈醬油樣色游離膽紅素增加游離膽紅素增加溶血性黃疸溶血性黃疸蠶豆病蠶豆病腸肝循環(huán)增多腸肝循環(huán)增多蠶豆病簡介n蠶豆病是一種6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-

2、PD）缺乏所導(dǎo)致的疾病，表現(xiàn)為在遺傳性葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-PD）缺陷的情況下，食用新鮮蠶豆后突然發(fā)生的急性血管內(nèi)溶血。 易發(fā)人群n多見于兒童，男性患者約占90%以上。 臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)n早期有惡寒、微熱、頭昏、倦怠無力、食欲缺乏、腹痛，繼之出現(xiàn)黃疸、貧血、血紅蛋白尿，尿呈醬油色，此后體溫升高，倦怠乏力加重，可持續(xù)3日左右。與溶血性貧血出現(xiàn)的同時，出現(xiàn)嘔吐、腹瀉和腹痛加劇，肝臟腫大，肝功能異常，約50%患者脾大。嚴(yán)重病例可見昏迷、驚厥和急性腎衰竭，若急救不及時常于12日內(nèi)死亡。 二、設(shè)計實驗進(jìn)一步明確診斷 紅細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測定（紫外法）（一）實驗器材和試劑1.實驗器材

3、 恒溫水循環(huán)紫外分光光度計，可見分光光度計，離心機(jī)。2.試劑（1）0.5mol/L Tris-HCl MgCl2緩沖溶液（pH8.0）：稱取Tris12.1g,MgCl26H2O 4.06g,加入160mL蒸餾水溶解，用HCl調(diào)pH至8.0，然后加入蒸餾水至200mL。（2）2 mmol/L煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)：稱取NADP 21.3mg，溶于10mL蒸餾水中。4 可保存20天左右。（3）6mmol/L葡萄糖6磷酸二鈉(G6PNa2)：稱取21.5mg G6PNa22H2O，溶于10mL蒸餾水中。4 可保存20天左右。（4）溶血劑：取巰基乙醇0.1mL，10% EDTA 2.0

4、mL，6mmol/L NADP 0.4mL，加蒸餾水至總體積200mL。（5）血紅蛋白氧化劑（Drabkin試劑）：稱取K3Fe(CN)6 0.2g，KCN 0.052g，NaHCO3 1.0g，加蒸餾水至1000mL，置棕色瓶內(nèi)避光保存，可保存20天。（6）0.9% NaCl，ACD抗凝劑。（二）實驗操作流程n1、洗滌紅細(xì)胞 取靜脈血2.0mL，放入含0.4mLACD抗凝劑的試管中，混勻。吸取0.2mL抗凝血放入試管中，加入4mL預(yù)冷的生理鹽水，輕輕搖勻，2500r/min離心5min,傾去上清，重復(fù)三次。n2、溶血液的制備 向紅細(xì)胞沉淀中加入溶血劑2.0mL，震蕩1min，4放置10min

5、以上。3、NADPH的測定 取石英比色杯兩只，標(biāo)為“測定”及“空白”，按下表操作：試劑體積蒸餾水（uL）0.5mol/L Tris-HCl MgCl2緩沖溶液（uL）6mmol/L G6P-Na2 (uL)2mmol/L NADP+ (uL)2040300300300混勻后放入帶恒溫水循環(huán)（25）的紫外分光 光度計中，預(yù)熱10min然后在“測定”中加入溶血液60uL,“空白”中加入溶血劑60uL，混勻以“空白”調(diào)“0”,1min后開始測340nm吸光度（A340），每2min紀(jì)錄吸光度一次，至10min止，比較每2minA值的變化情況，若相近則表明酶促反應(yīng)平穩(wěn)。以10minA值的變化（A340

6、）計算NADPH的產(chǎn)量。4.溶血液中血紅蛋白含量的測定 取試管一支，按下表操作：試劑體積Drabkin(mL)溶血液(mL)0.33.0混勻，室溫放置15min，以Drabkin試劑調(diào)零，讀取540nm的吸光度（A540）。（三）注意事項n1.洗滌紅細(xì)胞時禁止劇烈震蕩，避免溶血。n2.測定NADPH時讀取吸光度的時間要準(zhǔn)確。（四）結(jié)果分析n1.NADPH產(chǎn)量的計算 NADPH在340nm處，其每微摩爾的吸光系數(shù)（）為6.220，故10min內(nèi)NADPH的產(chǎn)量計算公式為：nNADPH產(chǎn)量（mol）=n2.血紅蛋白含量的計算 血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白以后，在540nm處，其毫摩爾吸光細(xì)數(shù)（）為4

7、4，故溶血液中血紅蛋白的含量計算公式為：n血紅蛋白含量（mmol）=22. 6340A44540A3.G6PD比活性（U/g Hb）的計算G6PD比活性單位（U/g Hb）=11645001000101004402. 0110122. 6540340AA85.49540340AA【參考范圍】正常值：大于2.8U/gHb三、從生化代謝解釋患兒的臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結(jié)果 n紅細(xì)胞膜的破壞紅細(xì)胞膜的破壞n膽色素代謝異常膽色素代謝異常 紅細(xì)胞膜的破壞紅細(xì)胞膜的破壞n葡萄糖磷酸戊糖途徑葡萄糖磷酸戊糖途徑葡萄糖葡萄糖 6 磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 5 磷酸核糖磷酸核糖NADPH + H+磷酸化磷酸化5 磷酸核

8、糖磷酸核糖磷酸磷酸戊糖途徑戊糖途徑NADPH + H+5 磷酸核糖磷酸核糖NADPH + H+5 磷酸核糖磷酸核糖NADPH + H+5 磷酸核糖磷酸核糖NADPH + H+NADPH維持維持GSH(谷胱甘肽）的正常含量和還原狀態(tài)谷胱甘肽）的正常含量和還原狀態(tài)G6PD (6 磷酸葡萄糖脫氫酶）磷酸葡萄糖脫氫酶）起關(guān)鍵作用起關(guān)鍵作用n還原型谷胱甘肽 體內(nèi)重要的抗氧化劑 保護(hù)紅細(xì)胞膜蛋白的完整性 紅細(xì)胞膜的破壞紅細(xì)胞膜的破壞單核吞噬細(xì)胞識別吞噬血紅蛋白珠蛋白氧化破壞紅細(xì)胞氧化破壞紅細(xì)胞單核吞噬細(xì)胞識別吞噬氧化破壞紅細(xì)胞血紅蛋白單核吞噬細(xì)胞識別吞噬氧化破壞紅細(xì)胞珠蛋白血紅蛋白單核吞噬細(xì)胞識別吞噬氧化

9、破壞紅細(xì)胞血紅素血紅素珠蛋白珠蛋白血紅蛋白血紅蛋白單核吞噬細(xì)單核吞噬細(xì)胞識別吞噬胞識別吞噬氧化破壞氧化破壞紅細(xì)胞紅細(xì)胞 單核吞噬細(xì)單核吞噬細(xì)胞識別吞噬胞識別吞噬血紅蛋白血紅蛋白珠蛋白珠蛋白氧化破壞氧化破壞紅細(xì)胞紅細(xì)胞氧化破壞氧化破壞紅細(xì)胞紅細(xì)胞單核吞噬細(xì)單核吞噬細(xì)胞識別吞噬胞識別吞噬紅細(xì)胞紅細(xì)胞血紅蛋白血紅蛋白單核吞噬細(xì)單核吞噬細(xì)胞識別吞噬胞識別吞噬紅細(xì)胞紅細(xì)胞珠蛋白珠蛋白血紅蛋白血紅蛋白單核吞噬細(xì)單核吞噬細(xì)胞識別吞噬胞識別吞噬紅細(xì)胞紅細(xì)胞血紅素血紅素珠蛋白珠蛋白血紅蛋白血紅蛋白單核吞噬細(xì)單核吞噬細(xì)胞識別吞噬胞識別吞噬紅細(xì)胞紅細(xì)胞膽色素代謝異常膽色素代謝異常血紅素血紅素運(yùn)送到肝運(yùn)送到肝與血清蛋

10、白結(jié)合與血清蛋白結(jié)合游離膽紅素游離膽紅素結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素排出體外排出體外 進(jìn)入腸道膽素原膽素原膽素膽素腸肝循環(huán)膽紅素膽紅素擴(kuò)散進(jìn)入組織擴(kuò)散進(jìn)入組織 組織黃染組織黃染 黃疸黃疸排尿呈醬油樣色排尿呈醬油樣色溶血性貧血溶血性貧血 面色蒼白面色蒼白說明n1720為一個版本n2231為另一個版本n 參考一下看哪個你比較容易理解然后就用哪個實驗室檢查檢查項目檢查值正常值紅細(xì)胞 1.981012/L 4.05.01012/L血紅蛋白 53g/L 120160g/L血清總膽紅素 85.5mol/L 3.417.1mol/L結(jié)合膽紅素 13.7mol/L 總量的20%未結(jié)合膽紅素 71.8mol/L 總量的

11、80%G6PD磷酸戊糖途徑NADPH磷酸戊糖維持谷胱甘肽的還原性核酸生物合成原料紅細(xì)胞90%95% 糖酵解通路 2.3二磷酸甘油酸旁路5%10% 磷酸戊糖途徑NADPH 唯一谷胱甘肽阻止氧化血紅蛋白，從而保護(hù)紅細(xì)胞膜的完整性，如若缺乏，此時的紅細(xì)胞易于破裂 Hb 具有攜氧能力MHb 高鐵血紅蛋白 Fe3+ 不具有攜氧能力 NADPH高鐵血紅蛋白還原酶 GSHMHbHb膽紅素鐵卟啉類化合物的降解產(chǎn)物80%以上來自衰老紅細(xì)胞破壞所釋放的血紅蛋白的分解自由通過生物膜產(chǎn)生毒性作用血紅蛋白珠蛋白AA再利用血紅素膽紅素膽紅素分類項目項目游離膽紅素游離膽紅素結(jié)合膽紅素結(jié)合膽紅素別名別名間接膽紅素血膽紅素直接

12、膽紅素肝膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合與葡萄糖醛酸結(jié)合未結(jié)合結(jié)合與重氮試劑反應(yīng)與重氮試劑反應(yīng)慢或間接反應(yīng)迅速直接反應(yīng)水中溶解度水中溶解度小大經(jīng)腎隨尿排出經(jīng)腎隨尿排出不能能通透細(xì)胞膜對腦的通透細(xì)胞膜對腦的毒性作用毒性作用大無G6PD缺乏NADPH嚴(yán)重缺乏谷胱甘肽難以保持還原狀態(tài)NADPH高鐵血紅蛋白還原酶活性低 紅細(xì)胞膜完整性破壞紅細(xì)胞裂解血紅蛋白大量溢出膽紅素生成量增加Hb大量氧化成MHb，Hb含量減少黃疸n皮膚，鞏膜及黏膜等組織黃染n惡心，嘔吐n全身無力n面色蒼白溶血性黃疸 由于紅細(xì)胞的大量破壞，在單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生膽紅素過多，超過了肝細(xì)胞的攝取，轉(zhuǎn)化和排泄膽紅素的能力，造成血液中未結(jié)合膽紅素濃度

13、顯著增高所致。高未結(jié)合膽紅素血癥由于肝對膽紅素的攝取，轉(zhuǎn)化，排泄增多，過多的膽紅素進(jìn)入膽道系統(tǒng)，腸肝循環(huán)增多，使得 尿中的尿素原和尿膽素含量增多，糞膽素與糞膽原也增加。溶血性黃疸大量紅細(xì)胞破裂血中未結(jié)合膽紅素增加腸肝循環(huán)增多大量血紅蛋白溢出尿蛋白（+） 潛血(+) 尿膽紅素() 尿膽素原(+) 尿液鏡下未見紅細(xì)胞 惡心、嘔吐、面色蒼白 排尿呈醬油樣色 糞膽素原項目檢查值正常值體溫3837.5脈搏150次/分80次/分呼吸40次/分20次/分血壓80/60mmHg120/90mmHg紅細(xì)胞大量破裂四、要想探討該病發(fā)生的分子基礎(chǔ)，可以用哪些技術(shù)檢測什么目的基因？（選答） 基因結(jié)構(gòu)分析法我組討論認(rèn)為

14、：要想探討該病發(fā)生的分子基礎(chǔ) ，需要對目的基因進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)分析，即DNA序列檢測DNA序列測定方法直接法間接法：對于未知片段，或片段過長，用幾種方法（RFLP；PCR-RFLP；SSCP）來粗略的估計待分析基因的一級結(jié)構(gòu)是否與對照基因相同雙脫氧末端終止法（Sanger法）化學(xué)裂解法（Maxam-Gilbert法）DNA的自動化測序DNA序列測定方法DNA鏈的方向是鏈的方向是5 5 3 3 交替的磷酸基團(tuán)和戊交替的磷酸基團(tuán)和戊糖構(gòu)成了糖構(gòu)成了DNA的骨架的骨架 (backbone)。（構(gòu)成（構(gòu)成DNA）OHOCH2OHOH脫氧核糖脫氧核糖(deoxyribose)雙脫氧末端終止法（雙脫氧末端終止

15、法（Sanger法）法）nSanger法是根據(jù)雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)在DNA合成過程中不能形成3,5-磷酸二磷酸二酯鍵酯鍵而導(dǎo)致鏈延伸終止的原理，利用四種ddNTP代替部分脫氧核苷酸（dNTP）作為底物進(jìn)行DNA合成，從而獲得在不同部位終止反應(yīng)的大小不同的DNA鏈，結(jié)合高分辨率變性聚丙烯凝膠電泳分離，就可以對DNA序列進(jìn)行分析。TAATCTGCAGGC35加入引物；32P-dATP,dGTP,dTTP；DNA聚合酶3TAATCTGCAGGC553primerddGTPddATPddTTPddCTPATTAGATTAGACGAATTAATTAGAATATTATTAGACGTATTAGAC

16、ATTAGACGTCATTAGACGTCCATTAGACGTCCGATTAGATTAGACGAATTAATTAGAATTATTAGACGTATTAGACGTCATTAGACGTCCATATTAGAC聚丙烯酰胺凝膠電泳GATCGCCTGCAGATTA35ATTAGACGTCCG五、患者體型瘦小與該病癥是否有關(guān)，為什么？（選答） 患者體型瘦小與該病癥患者體型瘦小與該病癥有有關(guān)關(guān) 蠶豆病是因為體內(nèi)缺乏蠶豆病是因為體內(nèi)缺乏G6PD， G6PD主要影響主要影響體內(nèi)的磷酸戊糖途徑體內(nèi)的磷酸戊糖途徑 該途徑主要生成兩種重要的該途徑主要生成兩種重要的物質(zhì)即物質(zhì)即5-磷酸核糖磷酸核糖和和NADPH5-磷酸核糖影

17、響：磷酸核糖影響：1：核酸的合成：核酸的合成 2：體內(nèi)己糖和戊糖的代謝：體內(nèi)己糖和戊糖的代謝 3：37碳原子糖類物質(zhì)的相互轉(zhuǎn)化碳原子糖類物質(zhì)的相互轉(zhuǎn)化NADPH影響：影響：1：體內(nèi)以體內(nèi)以NADPH作為供氫體合成多種活性物質(zhì)如膽固醇作為供氫體合成多種活性物質(zhì)如膽固醇 脂脂肪酸肪酸 和一些非必需氨基酸和一些非必需氨基酸2： NADPH可作為羥化酶的輔酶，參與體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化作用可作為羥化酶的輔酶，參與體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化作用3： NADPH參與吞噬細(xì)胞的殺菌作用參與吞噬細(xì)胞的殺菌作用4：維持：維持GSH的正常水平的正常水平 GSH可以保護(hù)體內(nèi)蛋白質(zhì)或酶免遭可以保護(hù)體內(nèi)蛋白質(zhì)或酶免遭氧化氧化 使蛋白質(zhì)或酶處于

18、活性狀態(tài)使蛋白質(zhì)或酶處于活性狀態(tài)磷酸戊糖途徑中生成多余的核糖轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸果糖和3-磷酸甘油醛進(jìn)入糖酵解途徑，G6PD缺乏使得糖代謝受到影響。脂酸可以合成甘油三酯，其主要功能是儲存和氧化能量，機(jī)體難以合成甘油三酯則消耗原有儲備的甘油三酯，使得機(jī)體消瘦。同時體內(nèi)的一些生物活性物質(zhì)功能發(fā)生障礙，如膽固醇不能直接氧化但能轉(zhuǎn)化為膽汁酸，類固醇激素 維生素D3參與物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，膽汁酸具有促進(jìn)脂類消化和吸收的作用。維生素D3主要參與體內(nèi)血鈣和血磷的調(diào)節(jié)。生物轉(zhuǎn)化作用可以對體內(nèi)大部分非營養(yǎng)物質(zhì)盡心代謝轉(zhuǎn)化，或使有毒物質(zhì)的毒性減低或消除，增強(qiáng)這些非營養(yǎng)物質(zhì)的水溶性和極性，從而易于從膽汁或尿液中排除。 GSH可以保護(hù)體內(nèi)蛋白質(zhì)或酶免遭氧化 使蛋白質(zhì)或酶處于活性狀態(tài)，蛋白質(zhì)一方面可以作為營養(yǎng)物質(zhì)