藥物處方制劑體內(nèi)評(píng)價(jià)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1一一. 制劑評(píng)價(jià)應(yīng)適應(yīng)新釋藥系統(tǒng)的發(fā)展制劑評(píng)價(jià)應(yīng)適應(yīng)新釋藥系統(tǒng)的發(fā)展二二. 藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)三三. 先進(jìn)、配套、規(guī)范的體內(nèi)藥物分析檢測(cè)技術(shù)是制劑先進(jìn)、配套、規(guī)范的體內(nèi)藥物分析檢測(cè)技術(shù)是制劑 處方體內(nèi)評(píng)價(jià)的基本手段處方體內(nèi)評(píng)價(jià)的基本手段四四. 藥物制劑設(shè)計(jì)和體內(nèi)評(píng)價(jià)考慮的問(wèn)題藥物制劑設(shè)計(jì)和體內(nèi)評(píng)價(jià)考慮的問(wèn)題五五. 研究室基本情況介紹研究室基本情況介紹第1頁(yè)/共74頁(yè) 一一 制劑評(píng)價(jià)應(yīng)適應(yīng)新釋藥系統(tǒng)的發(fā)展制劑評(píng)價(jià)應(yīng)適應(yīng)新釋藥系統(tǒng)的發(fā)展1. 新制劑和創(chuàng)新藥物研究同等重要新制劑和創(chuàng)新藥物研究同等重要 新化學(xué)實(shí)體藥物（新化學(xué)實(shí)體藥物（NCE） 成本高成本高 周期長(zhǎng)周期長(zhǎng)

2、難度大難度大 新釋藥系統(tǒng)（新釋藥系統(tǒng)（DDS） 投入少投入少 見效快見效快 投入產(chǎn)出比高投入產(chǎn)出比高 p 切合發(fā)展中國(guó)家國(guó)情，尤其適合我國(guó)國(guó)情；切合發(fā)展中國(guó)家國(guó)情，尤其適合我國(guó)國(guó)情；p 國(guó)外（著名制藥企業(yè)）愈加重視國(guó)外（著名制藥企業(yè)）愈加重視DDS研發(fā)；研發(fā)；p 技術(shù)含量高的藥物制劑產(chǎn)品也可以象創(chuàng)新化合物一樣，成為技術(shù)含量高的藥物制劑產(chǎn)品也可以象創(chuàng)新化合物一樣，成為 “重磅炸彈重磅炸彈”；p 有的藥物多年后新型制劑的有的藥物多年后新型制劑的“二次二次”開發(fā)上市，所產(chǎn)生的社會(huì)開發(fā)上市，所產(chǎn)生的社會(huì)和和 經(jīng)濟(jì)效益不亞于首次普通制劑。經(jīng)濟(jì)效益不亞于首次普通制劑。第2頁(yè)/共74頁(yè) 藥物：化學(xué)合成藥品、

3、生物技術(shù)藥品、中藥和天然產(chǎn)物藥物：化學(xué)合成藥品、生物技術(shù)藥品、中藥和天然產(chǎn)物 用藥：口服（用藥：口服（po）、靜注（）、靜注（iv）、）、 藥劑：藥劑：只有通過(guò)藥物制劑處方的設(shè)計(jì)評(píng)篩和制備，只有通過(guò)藥物制劑處方的設(shè)計(jì)評(píng)篩和制備， 才能成為直接用于人體的藥品；才能成為直接用于人體的藥品； 才能成為直接投放市場(chǎng)的商品。才能成為直接投放市場(chǎng)的商品。2. 藥劑研究的使命、責(zé)任，主要?jiǎng)恿徒?jīng)濟(jì)源泉藥劑研究的使命、責(zé)任，主要?jiǎng)恿徒?jīng)濟(jì)源泉第3頁(yè)/共74頁(yè) 藥物制劑可改善藥物的理化性質(zhì)，提高穩(wěn)定性，改善藥藥物制劑可改善藥物的理化性質(zhì)，提高穩(wěn)定性，改善藥 物溶解度；物溶解度； 改善藥物的體內(nèi)行為，增加藥物吸收

4、，優(yōu)化藥物改善藥物的體內(nèi)行為，增加藥物吸收，優(yōu)化藥物 的體內(nèi)的體內(nèi) 分布特征，延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間；分布特征，延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間； 提高藥物治療效果，降低藥物毒副作用；提高藥物治療效果，降低藥物毒副作用； 改善人體用藥的順應(yīng)性。改善人體用藥的順應(yīng)性。3. 達(dá)到實(shí)現(xiàn)安全、有效、穩(wěn)定、可控和用藥方便達(dá)到實(shí)現(xiàn)安全、有效、穩(wěn)定、可控和用藥方便第4頁(yè)/共74頁(yè)“重大新藥創(chuàng)制重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)科技重大專項(xiàng)“十一五十一五”計(jì)劃課題申報(bào)指南計(jì)劃課題申報(bào)指南 依據(jù)依據(jù)國(guó)家中長(zhǎng)期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要（國(guó)家中長(zhǎng)期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要（2006200620202020年）年）的部的部 署，國(guó)務(wù)院決定組織實(shí)施署，

5、國(guó)務(wù)院決定組織實(shí)施“重大新藥創(chuàng)制重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（以下簡(jiǎn)稱科技重大專項(xiàng)（以下簡(jiǎn)稱專專 項(xiàng)）。項(xiàng)）。 4. 4. 臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)技術(shù)平臺(tái)臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)技術(shù)平臺(tái)建設(shè)目標(biāo)建設(shè)目標(biāo)（略）略）建設(shè)內(nèi)容：建設(shè)內(nèi)容：l 天然產(chǎn)物活性成分及中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究；天然產(chǎn)物活性成分及中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究；l 天然藥物多成分藥代動(dòng)力學(xué)行為與血清藥理學(xué)、血清化學(xué)及多成分相天然藥物多成分藥代動(dòng)力學(xué)行為與血清藥理學(xué)、血清化學(xué)及多成分相 互作用的整合評(píng)價(jià)研究；互作用的整合評(píng)價(jià)研究；l 藥物代謝動(dòng)力學(xué)與代謝組學(xué)整合研究；藥物代謝動(dòng)力學(xué)與代謝組學(xué)整合研究；l 細(xì)胞分子水平的體外藥代動(dòng)力學(xué)高通量篩選與評(píng)

6、價(jià)技術(shù)研究；細(xì)胞分子水平的體外藥代動(dòng)力學(xué)高通量篩選與評(píng)價(jià)技術(shù)研究；l 代謝產(chǎn)物的快速鑒定、活性預(yù)測(cè)及活性代謝物的藥代動(dòng)力學(xué)研究；代謝產(chǎn)物的快速鑒定、活性預(yù)測(cè)及活性代謝物的藥代動(dòng)力學(xué)研究；l 藥物代謝相互作用的整體和離體研究，臨床藥物相互作用預(yù)測(cè)；藥物代謝相互作用的整體和離體研究，臨床藥物相互作用預(yù)測(cè)；l 生物技術(shù)藥物及基因治療藥物的藥代動(dòng)力學(xué)研究；生物技術(shù)藥物及基因治療藥物的藥代動(dòng)力學(xué)研究；l 難溶（不溶）藥物和新型藥物釋放系統(tǒng)的體內(nèi)外代謝動(dòng)力學(xué)研究；難溶（不溶）藥物和新型藥物釋放系統(tǒng)的體內(nèi)外代謝動(dòng)力學(xué)研究；l 藥代動(dòng)力學(xué)理論模型等方面的研究。藥代動(dòng)力學(xué)理論模型等方面的研究。 4. 藥物制劑處

7、方體內(nèi)評(píng)價(jià)藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)第5頁(yè)/共74頁(yè)5. 新型給藥系統(tǒng)（新型給藥系統(tǒng)（Drug Delivery System, DDS）：）： 靶向給藥靶向給藥 透皮給藥透皮給藥 粘膜給藥粘膜給藥 口服緩控釋口服緩控釋 速釋給藥速釋給藥 載體給藥載體給藥 生物技術(shù)給藥生物技術(shù)給藥第6頁(yè)/共74頁(yè) 二二 藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)1. 藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)與制劑體內(nèi)評(píng)價(jià)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)與制劑體內(nèi)評(píng)價(jià)化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則中： 原料藥與制劑； 藥代動(dòng)力學(xué)與制劑原料藥生物學(xué)性質(zhì)對(duì)制劑研究有重要指導(dǎo)作用：原料藥生物學(xué)性質(zhì)包括對(duì)生物膜的通透性，在生理環(huán)境下的穩(wěn)定性，原料藥的吸收、分布、代謝、

8、消除等藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，藥物的毒副作用及治療窗等。對(duì)于口服吸收較差的藥物，通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)闹苿┘夹g(shù)和處方，可能改善藥物的吸收。如藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果提示藥物口服吸收極差，可考慮選擇注射劑等劑型。緩釋、控釋制劑對(duì)藥物的半衰期、治療指數(shù)、吸收部位等均有一定要求，研發(fā)中需要特別注意。 第7頁(yè)/共74頁(yè)生物利用度（生物利用度（Bioavailability; BA）：）：指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度；指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度；是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度的指標(biāo)。是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度的指標(biāo)。絕對(duì)生物利用度：絕對(duì)生物利用度：以靜

9、脈制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對(duì)量。以靜脈制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對(duì)量。相對(duì)生物利用度：相對(duì)生物利用度：以其他非靜脈途徑給藥的制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體循以其他非靜脈途徑給藥的制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對(duì)量。環(huán)的相對(duì)量。第8頁(yè)/共74頁(yè)生物利用度可用下式表示：生物利用度可用下式表示： Fabs % =（ D（非靜脈）（非靜脈）/ D（iv）100% =（KeVd AUC（非靜脈）（非靜脈）/ KeVd AUC（iv）100% =（AUC（非靜脈）（非靜脈）/ AUC（iv）100%同樣：同樣： Frel % =（AUC

10、（非靜脈）（非靜脈）/ AUC（非靜脈）（非靜脈）100%l 認(rèn)為靜脈給藥的吸收率為認(rèn)為靜脈給藥的吸收率為100%；l 生物利用度是同一藥物或不同劑型中相同主藥的比較；生物利用度是同一藥物或不同劑型中相同主藥的比較；l 對(duì)同一受試個(gè)體來(lái)說(shuō)，可認(rèn)為消除速率常數(shù)（對(duì)同一受試個(gè)體來(lái)說(shuō)，可認(rèn)為消除速率常數(shù)（Ke）和分布容積（）和分布容積（Vd） 不變，所以生物利用度實(shí)驗(yàn)最好采用大動(dòng)物，在同一受試個(gè)體進(jìn)行交不變，所以生物利用度實(shí)驗(yàn)最好采用大動(dòng)物，在同一受試個(gè)體進(jìn)行交 叉比較實(shí)驗(yàn)。叉比較實(shí)驗(yàn)。第9頁(yè)/共74頁(yè)2. 藥物制劑生物利用度評(píng)估：藥物制劑生物利用度評(píng)估：由血漿濃度由血漿濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)定生物利用

11、度通常涉及三個(gè)主時(shí)間數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)定生物利用度通常涉及三個(gè)主要的參數(shù)，即：要的參數(shù)，即：Cmax Tmax AUC024680123450 8 16 24 32 40 48 56 64 血藥濃度（血藥濃度（ ug/ml ）服藥后時(shí)間（服藥后時(shí)間（h）最小毒副反應(yīng)濃度最小毒副反應(yīng)濃度最小有效濃度最小有效濃度CmaxTmaxAUCCmax: 血藥達(dá)峰時(shí)的濃度血藥達(dá)峰時(shí)的濃度 （血藥濃度峰值）（血藥濃度峰值）Tmax: 血藥濃度達(dá)峰時(shí)間血藥濃度達(dá)峰時(shí)間AUC: 藥藥-時(shí)曲線下面積時(shí)曲線下面積第10頁(yè)/共74頁(yè)由藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)指導(dǎo)設(shè)計(jì)預(yù)期臨床目的的藥物制劑由藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)指導(dǎo)設(shè)計(jì)預(yù)期臨床目的的藥物制劑某些藥

12、物的某些藥物的Tmax是關(guān)鍵參數(shù)；是關(guān)鍵參數(shù)；某些藥物的持續(xù)時(shí)間是關(guān)鍵參數(shù)；某些藥物的持續(xù)時(shí)間是關(guān)鍵參數(shù)；血濃度血濃度時(shí)間時(shí)間第11頁(yè)/共74頁(yè)生物等效性（生物等效性（Bioequivalence； BE）：）：生物利用度生物利用度生物等效性生物等效性 BA 和和BE 兩者均是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)。兩者均是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)。Cmax：Tmax：AUC：第12頁(yè)/共74頁(yè)原創(chuàng)藥（原創(chuàng)藥（Innovator Product）：）：是指已經(jīng)過(guò)全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其是指已經(jīng)過(guò)全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其安全有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。安全

13、有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。藥學(xué)等效性藥學(xué)等效性(Pharmaceutical equivalence)：如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，就可以認(rèn)為它們是藥學(xué)等效的。比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，就可以認(rèn)為它們是藥學(xué)等效的。藥學(xué)等效不一定意味著生物等效：藥學(xué)等效不一定意味著生物等效：因?yàn)檩o料的不同或生產(chǎn)工藝差異等，可能會(huì)導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的因?yàn)檩o料的不同或生產(chǎn)工藝差異等，可能會(huì)導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的改變。改變。第13頁(yè)/共74頁(yè)治療等效性治療等效性(Therapeutic equivalenc

14、e)：若兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的安全性和有效若兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。若兩制劑中所用輔料本身并不會(huì)導(dǎo)致有效性和安全性問(wèn)題，生物等效性若兩制劑中所用輔料本身并不會(huì)導(dǎo)致有效性和安全性問(wèn)題，生物等效性研究是證實(shí)兩制劑治療等效性最合適的辦法。研究是證實(shí)兩制劑治療等效性最合適的辦法。若藥物吸收速度與臨床療效無(wú)關(guān)若藥物吸收速度與臨床療效無(wú)關(guān),吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同可能達(dá)到治

15、療等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同（如同一藥物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑（如同一藥物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效。也可能治療等效。第14頁(yè)/共74頁(yè)藥代動(dòng)力學(xué)研究方法：藥代動(dòng)力學(xué)研究方法：即采用通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的生物樣本（如全血、血漿、血清或尿液）即采用通過(guò)測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的生物樣本（如全血、血漿、血清或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度中藥物濃度，獲得藥物濃度-時(shí)間曲線（時(shí)間曲線（C-T）來(lái)反映藥物從制劑中釋放）來(lái)反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動(dòng)態(tài)過(guò)程。并經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速吸收到體循環(huán)中的動(dòng)態(tài)過(guò)程

16、。并經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如曲線下面積（度有關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如曲線下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（）、達(dá)峰濃度（Cmax）、）、達(dá)峰時(shí)間（達(dá)峰時(shí)間（Tmax）等。）等。3. 藥物制劑藥物制劑BA研究方法：研究方法：藥效動(dòng)力學(xué)研究方法：藥效動(dòng)力學(xué)研究方法：在無(wú)可行的藥代動(dòng)力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時(shí)（如無(wú)靈敏的血在無(wú)可行的藥代動(dòng)力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時(shí)（如無(wú)靈敏的血藥濃度檢測(cè)方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性相關(guān)），可以考慮用明確藥濃度檢測(cè)方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性相關(guān)），可以考慮用明確的可分級(jí)定量的藥效學(xué)指標(biāo)通過(guò)效應(yīng)的可分級(jí)定量的藥效學(xué)指標(biāo)通過(guò)效應(yīng)-

17、時(shí)間曲線（時(shí)間曲線（Effect-Time curve）與）與參比制劑比較來(lái)確定生物等效性。參比制劑比較來(lái)確定生物等效性。以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等效性研究方法。一個(gè)完整的生物等效性研究包括的生物等效性研究方法。一個(gè)完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)生物樣本分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、統(tǒng)計(jì)分析、結(jié)果評(píng)價(jià)等方面的、統(tǒng)計(jì)分析、結(jié)果評(píng)價(jià)等方面的內(nèi)容。內(nèi)容。第15頁(yè)/共74頁(yè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作自身交叉對(duì)照：自身交叉對(duì)照： 清洗期（清洗期（Wash-out Period）：）： 受試動(dòng)物選擇：受試動(dòng)物選擇： 例數(shù)

18、：例數(shù)： 分組：分組： 動(dòng)物福利：動(dòng)物福利：第16頁(yè)/共74頁(yè)參比制劑參比制劑( Reference Product , R )：受試制劑受試制劑 ( Test Product，T )： 參比制劑和受試制劑含量差別不能超過(guò)參比制劑和受試制劑含量差別不能超過(guò)5%；參比和受試制；參比和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號(hào)、規(guī)格、保存條件、有效期。劑均應(yīng)注明研制單位、批號(hào)、規(guī)格、保存條件、有效期。給藥劑量：給藥劑量：生物樣品取樣：生物樣品取樣：藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算：藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算： 研究過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化：研究過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化： 第17頁(yè)/共74頁(yè)靶向給藥系統(tǒng)：靶組織分布：活性成分透皮給藥系統(tǒng)：藥物透

19、過(guò)皮膚吸收進(jìn)入血液循環(huán)從而治療疾病的新型給藥系統(tǒng)，其特點(diǎn)是可以避免口服給藥可能發(fā)生的肝臟首過(guò)效應(yīng)及胃腸滅活效應(yīng)，克服藥物口服生物利用度不高的問(wèn)題，可以維持恒定的血藥濃度或藥理效應(yīng)、延長(zhǎng)作用時(shí)間、減少毒副作用、增強(qiáng)用藥順應(yīng)性等。藥物、輔料等與皮膚的相互作用問(wèn)題；血藥的持續(xù)時(shí)間；生物利用度等。 緩控釋給藥：緩釋制劑的突釋問(wèn)題；體內(nèi)駐留時(shí)間( MRT )。粘膜給藥：生物利用度；輔料與粘膜的作用以及對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。載體給藥系統(tǒng)：載體材料對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的影響；活性藥物的測(cè)定；生物技術(shù)藥物：給藥技術(shù)相對(duì)滯后；生物技術(shù)藥物對(duì)給藥系統(tǒng)的依賴性很大；PD/PK研究；第18頁(yè)/共74頁(yè)三三. . 先進(jìn)、配套、規(guī)范的

20、體內(nèi)藥物分析檢測(cè)技術(shù)先進(jìn)、配套、規(guī)范的體內(nèi)藥物分析檢測(cè)技術(shù) 是制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)的基本手段是制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)的基本手段1. . 靈敏、專一的體內(nèi)藥物（被測(cè)組分）檢測(cè)技術(shù)方法的建立靈敏、專一的體內(nèi)藥物（被測(cè)組分）檢測(cè)技術(shù)方法的建立 與應(yīng)用成為藥學(xué)領(lǐng)域重要研究?jī)?nèi)容與應(yīng)用成為藥學(xué)領(lǐng)域重要研究?jī)?nèi)容l 新型化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物新型化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物l 生物技術(shù)藥物生物技術(shù)藥物l 高活性低劑量藥物高活性低劑量藥物如：如：低劑量結(jié)構(gòu)特殊的化學(xué)合成藥物；低劑量結(jié)構(gòu)特殊的化學(xué)合成藥物； 天然藥物中的糖類藥物；天然藥物中的糖類藥物； 生物技術(shù)藥品生物技術(shù)藥品 內(nèi)源性化合物藥物內(nèi)源性化合物藥物第19頁(yè)/共74頁(yè)SFDA：（一）生物

21、樣本分析方法的建立和確證（一）生物樣本分析方法的建立和確證 （PP6-11 / PP1-30） 1. 常用分析方法常用分析方法 2. 方法學(xué)確證（方法學(xué)確證（Method Validation） 2.1 特異性特異性(Specificity) 2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（Calibration Curve） 2.3 定量下限（定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ） 2.4 精密度與準(zhǔn)確度精密度與準(zhǔn)確度(Prcision and Accuracy) 2.5 樣品穩(wěn)定性樣品穩(wěn)定性(Stability) 2.6 提取回收率提取回收率 2.7

22、微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證 3. 方法學(xué)質(zhì)控方法學(xué)質(zhì)控 4. 分析數(shù)據(jù)的記錄與保存分析數(shù)據(jù)的記錄與保存 4.1 方法建立的數(shù)據(jù)方法建立的數(shù)據(jù) 4.2 樣品分析的數(shù)據(jù)樣品分析的數(shù)據(jù) 4.3 其他相關(guān)信息其他相關(guān)信息第20頁(yè)/共74頁(yè)靈敏度高：靈敏度高：2. 體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）分析測(cè)定方法的特點(diǎn)體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）分析測(cè)定方法的特點(diǎn)濃度低：濃度低：樣品來(lái)源有限樣品來(lái)源有限專一性專一性樣品量少：樣品量少：個(gè)體差異大：個(gè)體差異大：方法快捷：方法快捷：方法可靠：方法可靠：分析方法和檢測(cè)手段配套：分析方法和檢測(cè)手段配套： 第21頁(yè)/共74頁(yè)內(nèi)標(biāo)法定量方法內(nèi)標(biāo)法定量方法 ：提高分析方

23、法的可靠性；操作簡(jiǎn)便。提高分析方法的可靠性；操作簡(jiǎn)便。 在實(shí)際操作中，由于樣品處理步驟繁瑣，難于達(dá)到每次操作的完全在實(shí)際操作中，由于樣品處理步驟繁瑣，難于達(dá)到每次操作的完全 平行，因而會(huì)引入較大的誤差。平行，因而會(huì)引入較大的誤差。對(duì)內(nèi)標(biāo)化合物的基本要求：對(duì)內(nèi)標(biāo)化合物的基本要求：l 供選作內(nèi)標(biāo)的化合物，其理化性質(zhì)與被測(cè)組分應(yīng)相近；供選作內(nèi)標(biāo)的化合物，其理化性質(zhì)與被測(cè)組分應(yīng)相近；l 內(nèi)標(biāo)的色譜峰應(yīng)靠近被測(cè)組分的色譜峰，最好位于幾個(gè)被測(cè)組分色譜內(nèi)標(biāo)的色譜峰應(yīng)靠近被測(cè)組分的色譜峰，最好位于幾個(gè)被測(cè)組分色譜 峰的中間，但又能完全分離。峰的中間，但又能完全分離。l 內(nèi)標(biāo)濃度的選擇內(nèi)標(biāo)濃度的選擇 ：一般內(nèi)標(biāo)

24、加入量應(yīng)控制在使標(biāo)準(zhǔn)曲線中段的藥物與：一般內(nèi)標(biāo)加入量應(yīng)控制在使標(biāo)準(zhǔn)曲線中段的藥物與 內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值（注意不是濃度）比近似為內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值（注意不是濃度）比近似為1 。3. 體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）分析測(cè)定中的特殊問(wèn)題體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）分析測(cè)定中的特殊問(wèn)題l 對(duì)內(nèi)標(biāo)的純度要求：從實(shí)際應(yīng)用角度出發(fā)，不苛求內(nèi)標(biāo)具有高純度與對(duì)內(nèi)標(biāo)的純度要求：從實(shí)際應(yīng)用角度出發(fā)，不苛求內(nèi)標(biāo)具有高純度與 高含量，只要求在同一次測(cè)定中，標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品各管內(nèi)內(nèi)標(biāo)加入量高含量，只要求在同一次測(cè)定中，標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品各管內(nèi)內(nèi)標(biāo)加入量 相等。相等。 l 內(nèi)標(biāo)物能很好地溶解在樣品中，但不能與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。內(nèi)標(biāo)物能很好地溶解在樣品中，但不

25、能與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。l 供作內(nèi)標(biāo)的化合物不應(yīng)當(dāng)是體內(nèi)的內(nèi)源性成分，或藥物在體內(nèi)可能產(chǎn)供作內(nèi)標(biāo)的化合物不應(yīng)當(dāng)是體內(nèi)的內(nèi)源性成分，或藥物在體內(nèi)可能產(chǎn) 生的代謝物，并且最好不用患者可能同時(shí)使用的其他藥物。生的代謝物，并且最好不用患者可能同時(shí)使用的其他藥物。 第22頁(yè)/共74頁(yè)內(nèi)原性藥物分析內(nèi)原性藥物分析：生物機(jī)體內(nèi)天然固有的物質(zhì)，如生物遞質(zhì)類、激生物機(jī)體內(nèi)天然固有的物質(zhì)，如生物遞質(zhì)類、激 素類等。素類等。 內(nèi)源性物質(zhì)作為外源性藥物，如何區(qū)分于內(nèi)源性的干擾？?jī)?nèi)源性物質(zhì)作為外源性藥物，如何區(qū)分于內(nèi)源性的干擾？u 生物耗竭：生物耗竭：如：利血平對(duì)單胺遞質(zhì)的耗竭；如：利血平對(duì)單胺遞質(zhì)的耗竭； 注意：內(nèi)源性

26、物質(zhì)耗竭與生物機(jī)體生理機(jī)能變化關(guān)系。注意：內(nèi)源性物質(zhì)耗竭與生物機(jī)體生理機(jī)能變化關(guān)系。u 扣除本底：扣除本底：本底樣品的樣本數(shù)量；本底樣品的樣本數(shù)量； 內(nèi)源性物質(zhì)的分泌（時(shí)辰）節(jié)律性；內(nèi)源性物質(zhì)的分泌（時(shí)辰）節(jié)律性；u 同位素標(biāo)記：同位素標(biāo)記：將化合物用同位素標(biāo)記后給予動(dòng)物，以便區(qū)別于生物將化合物用同位素標(biāo)記后給予動(dòng)物，以便區(qū)別于生物 機(jī)體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)。機(jī)體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)。第23頁(yè)/共74頁(yè)間接分析測(cè)定方法間接分析測(cè)定方法：不是直接測(cè)定藥物的本身濃度，而是通過(guò)其它指標(biāo)不是直接測(cè)定藥物的本身濃度，而是通過(guò)其它指標(biāo) 相應(yīng)的變化，間接、定量的反映被測(cè)成分的量。相應(yīng)的變化，間接、定量的反映被測(cè)成分的量

27、。u 衍生化方法：衍生化方法：藥物藥物（不能直接測(cè)定或可測(cè)性差）（不能直接測(cè)定或可測(cè)性差）藥物衍生物藥物衍生物（新化合物直接測(cè)定）（新化合物直接測(cè)定）衍生化反應(yīng)；定量形成新的化合物衍生化反應(yīng)；定量形成新的化合物u 化學(xué)反應(yīng)方法：化學(xué)反應(yīng)方法：底物底物 產(chǎn)物產(chǎn)物在被測(cè)在被測(cè)藥物藥物的作用下的作用下（產(chǎn)物是依賴于被測(cè)組分（產(chǎn)物是依賴于被測(cè)組分定量形成的）定量形成的）（產(chǎn)物是可測(cè)的）（產(chǎn)物是可測(cè)的）u 生物反應(yīng)（效應(yīng)）方法：生物反應(yīng)（效應(yīng)）方法：生物效應(yīng)變化生物效應(yīng)變化在被測(cè)在被測(cè)藥物藥物的作用下的作用下生物效應(yīng)的變化是定量的；生物效應(yīng)的變化是定量的；生物效應(yīng)是定量可測(cè)的；生物效應(yīng)是定量可測(cè)的；（注

28、意：生物效應(yīng)的變化范圍）（注意：生物效應(yīng)的變化范圍）第24頁(yè)/共74頁(yè)4. 方法學(xué)確認(rèn)（評(píng)價(jià)、確證、考評(píng)、方法學(xué)確認(rèn)（評(píng)價(jià)、確證、考評(píng)、validation ）“生物樣品測(cè)定的關(guān)鍵是方法學(xué)的確證。方法學(xué)確證是整個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)研究生物樣品測(cè)定的關(guān)鍵是方法學(xué)的確證。方法學(xué)確證是整個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)研究的基礎(chǔ)。這是藥代動(dòng)力學(xué)研究有別于其它藥理毒理研究的特殊之處。所有的基礎(chǔ)。這是藥代動(dòng)力學(xué)研究有別于其它藥理毒理研究的特殊之處。所有藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果，都依賴于生物樣品的測(cè)定，只有可靠的方法才能得藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果，都依賴于生物樣品的測(cè)定，只有可靠的方法才能得出可靠的結(jié)果。在通過(guò)特異性、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)

29、定性等研究出可靠的結(jié)果。在通過(guò)特異性、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性等研究建立了檢測(cè)方法學(xué)，得到了標(biāo)準(zhǔn)曲線后，在檢測(cè)過(guò)程中還應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)建立了檢測(cè)方法學(xué)，得到了標(biāo)準(zhǔn)曲線后，在檢測(cè)過(guò)程中還應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)控，制備隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行測(cè)定，以確保檢測(cè)方法的可靠控，制備隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行測(cè)定，以確保檢測(cè)方法的可靠性。性?！?引自引自: 化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則第25頁(yè)/共74頁(yè)名詞解釋名詞解釋: :生物介質(zhì)：生物介質(zhì)：一種生物來(lái)源物質(zhì)，能夠以可重復(fù)的方式采集和處理。一種生物來(lái)源物質(zhì)，能夠以可重復(fù)的方

30、式采集和處理。 例如：全血、血漿、血清、尿、糞、例如：全血、血漿、血清、尿、糞、 各種組織等。各種組織等。準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確度：在確定的分析條件下，測(cè)得值與真實(shí)值的接近程度。在確定的分析條件下，測(cè)得值與真實(shí)值的接近程度。分析批：分析批：包括待測(cè)樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和包括待測(cè)樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC樣品的完整系列。樣品的完整系列。 一天內(nèi)可以完成幾個(gè)分析批，一個(gè)分析批也可以持續(xù)幾天完成。一天內(nèi)可以完成幾個(gè)分析批，一個(gè)分析批也可以持續(xù)幾天完成。精密度：精密度：在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測(cè)在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測(cè) 量值的分散程度。量值的分散程度

31、。重現(xiàn)性：重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定結(jié)果的分散程度，以及相同條件下分析方不同實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定結(jié)果的分散程度，以及相同條件下分析方 法在間隔一段短時(shí)間后測(cè)定結(jié)果的分散程度。法在間隔一段短時(shí)間后測(cè)定結(jié)果的分散程度。第26頁(yè)/共74頁(yè)重現(xiàn)性：重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定結(jié)果的分散程度，以及相同條件下分析方不同實(shí)驗(yàn)室間測(cè)定結(jié)果的分散程度，以及相同條件下分析方 法在間隔一段短時(shí)間后測(cè)定結(jié)果的分散程度。法在間隔一段短時(shí)間后測(cè)定結(jié)果的分散程度。介質(zhì)效應(yīng)：介質(zhì)效應(yīng)：由于樣品中存在干擾物質(zhì)，對(duì)響應(yīng)造成的直接或間接的影由于樣品中存在干擾物質(zhì)，對(duì)響應(yīng)造成的直接或間接的影 響。響。穩(wěn)定性：穩(wěn)定性：一種分析物在確定條件下，一定時(shí)

32、間內(nèi)在給定介質(zhì)中的化一種分析物在確定條件下，一定時(shí)間內(nèi)在給定介質(zhì)中的化 學(xué)穩(wěn)定性。學(xué)穩(wěn)定性。標(biāo)準(zhǔn)樣品：標(biāo)準(zhǔn)樣品：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立 標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。質(zhì)控樣品：質(zhì)控樣品：即即QC樣品，系指在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，系指在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的 樣品，用于監(jiān)測(cè)生物分析方法的重復(fù)性和評(píng)價(jià)每一分析樣品，用于監(jiān)測(cè)生物分析方法的重復(fù)性和評(píng)價(jià)每一分析 批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。第27

33、頁(yè)/共74頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)曲線：標(biāo)準(zhǔn)曲線：實(shí)驗(yàn)響應(yīng)值與分析物濃度間的關(guān)系。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)募訖?quán)和統(tǒng)實(shí)驗(yàn)響應(yīng)值與分析物濃度間的關(guān)系。應(yīng)采用適當(dāng)?shù)募訖?quán)和統(tǒng) 計(jì)檢驗(yàn)，用簡(jiǎn)單的數(shù)學(xué)模型來(lái)最適當(dāng)?shù)孛枋?。?biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)是連續(xù)的計(jì)檢驗(yàn)，用簡(jiǎn)單的數(shù)學(xué)模型來(lái)最適當(dāng)?shù)孛枋?。?biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)是連續(xù)的 和可重現(xiàn)的，應(yīng)以回歸計(jì)算結(jié)果的百分偏差最小為基礎(chǔ)。和可重現(xiàn)的，應(yīng)以回歸計(jì)算結(jié)果的百分偏差最小為基礎(chǔ)?；厥章剩夯厥章剩悍治鲞^(guò)程的提取效率，以樣品提取和處理過(guò)程前后分析物含量分析過(guò)程的提取效率，以樣品提取和處理過(guò)程前后分析物含量 百分比表示。百分比表示。選擇性：選擇性：分析方法測(cè)量和區(qū)分共存組分中分析物的能力。這些共存組分分析方法測(cè)量和區(qū)分共存組

34、分中分析物的能力。這些共存組分 可能包括代謝物、雜質(zhì)、分解產(chǎn)物、介質(zhì)組分等可能包括代謝物、雜質(zhì)、分解產(chǎn)物、介質(zhì)組分等定量范圍：定量范圍：包括定量上限包括定量上限（ULOQ）和定量下限和定量下限（LLOQ）的濃度范圍，的濃度范圍， 在此范圍內(nèi)采用濃度在此范圍內(nèi)采用濃度- -響應(yīng)關(guān)系能進(jìn)行可靠的、可重復(fù)的定響應(yīng)關(guān)系能進(jìn)行可靠的、可重復(fù)的定 量，其準(zhǔn)確度和精密度可以接受。量，其準(zhǔn)確度和精密度可以接受。內(nèi)標(biāo)方法：內(nèi)標(biāo)方法：指選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對(duì)照物質(zhì)加入待測(cè)樣品溶指選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對(duì)照物質(zhì)加入待測(cè)樣品溶 液中，以待測(cè)組分和對(duì)照物質(zhì)的響應(yīng)信號(hào)之比為定量依據(jù)，液中，以待測(cè)組分和對(duì)照物

35、質(zhì)的響應(yīng)信號(hào)之比為定量依據(jù)， 測(cè)定待測(cè)組分含量的方法。測(cè)定待測(cè)組分含量的方法。第28頁(yè)/共74頁(yè)體內(nèi)藥物分析方法的評(píng)價(jià)內(nèi)容：體內(nèi)藥物分析方法的評(píng)價(jià)內(nèi)容：（1） Selectivity:（2） Linear Range and Response Factor：（3） Inter-Day Precision and Accuracy: （4） Intra-Day Precision and Accuracy:（5） Dilution Integrity:（6） Sensitivity:（7） Recovery (Extraction Efficiency)：（8） Matrix Effects:（

36、9） Carryover Evaluation：（10） Stability:（11） Relative Retention:第29頁(yè)/共74頁(yè)受試驗(yàn)藥物標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖受試驗(yàn)藥物標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖正常生物樣品（空白）色譜圖正常生物樣品（空白）色譜圖 （6個(gè)不同來(lái)源的受試個(gè)體）個(gè)不同來(lái)源的受試個(gè)體）正常生物樣品外加受試藥物色譜圖正常生物樣品外加受試藥物色譜圖 （ 6個(gè)不同來(lái)源的受試個(gè)體：血漿種屬；血漿外加藥物濃度；內(nèi)標(biāo)濃度）個(gè)不同來(lái)源的受試個(gè)體：血漿種屬；血漿外加藥物濃度；內(nèi)標(biāo)濃度） 給藥后生物樣品色譜圖給藥后生物樣品色譜圖 （受試種屬；給藥途徑、劑量；生物樣品采集時(shí)間點(diǎn)）（受試種屬；給藥途徑、

37、劑量；生物樣品采集時(shí)間點(diǎn)）Selectivity:被測(cè)組分與內(nèi)源性物質(zhì)、試劑中雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物以及其它干擾物質(zhì)有被測(cè)組分與內(nèi)源性物質(zhì)、試劑中雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物以及其它干擾物質(zhì)有良好的分離良好的分離; ; 必須證明所測(cè)定的物質(zhì)是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不必須證明所測(cè)定的物質(zhì)是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測(cè)定。對(duì)于色譜法至少要考察得干擾樣品的測(cè)定。對(duì)于色譜法至少要考察6 6個(gè)不同來(lái)源空白生物樣品個(gè)不同來(lái)源空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對(duì)于質(zhì)譜法則應(yīng)著重考

38、察分析過(guò)程中的介質(zhì)效應(yīng)生物樣品色譜圖。對(duì)于質(zhì)譜法則應(yīng)著重考察分析過(guò)程中的介質(zhì)效應(yīng)。第30頁(yè)/共74頁(yè)必須用至少必須用至少6 6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線( (n = / 5););應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同的生物介質(zhì)應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同的生物介質(zhì); ;定量范圍要能覆蓋全部待測(cè)濃度定量范圍要能覆蓋全部待測(cè)濃度; ;不允許將定量范圍外推求算未知樣品的濃度。不允許將定量范圍外推求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)。 Linear Range and Response Factor：標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線線

39、性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍最低和最高濃度樣品的色譜圖標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍最低和最高濃度樣品的色譜圖空白生物樣品外加被試藥物空白生物樣品外加被試藥物(低、中、高三個(gè)濃度；低、中、高三個(gè)濃度； n5)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的反算經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的反算(back-calculated)測(cè)定濃度測(cè)定濃度第31頁(yè)/共74頁(yè)Inter-Day Precision and Accuracy:Intra-Day Precision and Accuracy:要求選擇要求選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇

40、在定量下限（低濃度選擇在定量下限（LLOQ）附近，其濃度在）附近，其濃度在LLOQ的的3倍以內(nèi)；倍以內(nèi)；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；中間選一個(gè)濃度。每一濃度每批至少測(cè)定中間選一個(gè)濃度。每一濃度每批至少測(cè)定5個(gè)樣品，為獲得批間精密度應(yīng)個(gè)樣品，為獲得批間精密度應(yīng)至少至少 連續(xù)測(cè)定連續(xù)測(cè)定3個(gè)分析批。個(gè)分析批。精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，）表示，RSD一般應(yīng)小一般應(yīng)小于于15%，在，在LLOQ附近附近RSD應(yīng)小于應(yīng)小于20%。準(zhǔn)確度一般應(yīng)在準(zhǔn)確度一般應(yīng)在85%115%范圍內(nèi)，在范圍內(nèi)，在LLOQ附近應(yīng)在附近

41、應(yīng)在80%120%范圍范圍內(nèi)。內(nèi)。 第32頁(yè)/共74頁(yè)P(yáng)recision of the method, defined by the percent relative standard deviation ( %RSD = （standard deviation）（mean）100)， was determined from the interpolated QC sample concentrations.Accuracy of the method, defined by the percent relative error ( %RE = （standard observed conce

42、ntrationnominal concentration） （ nominal concentration ）100)Precision and Accuracy第33頁(yè)/共74頁(yè)Dilution Integrity:目的是為解決在樣品測(cè)定過(guò)程中，出現(xiàn)超過(guò)最高定量上限目的是為解決在樣品測(cè)定過(guò)程中，出現(xiàn)超過(guò)最高定量上限的樣品的測(cè)定問(wèn)題。的樣品的測(cè)定問(wèn)題。采用與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的空白血漿，對(duì)超出定量上限的樣品采用與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的空白血漿，對(duì)超出定量上限的樣品進(jìn)行一定比例的稀釋，稀釋后的待測(cè)樣品濃度應(yīng)在所建立進(jìn)行一定比例的稀釋，稀釋后的待測(cè)樣品濃度應(yīng)在所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)。的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)。高濃

43、度樣品稀釋后，所測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不受稀高濃度樣品稀釋后，所測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不受稀釋的影響。釋的影響。第34頁(yè)/共74頁(yè)Dilution Integrity for xxDrugAcceptance Criteria-15%42500+15%57500Nominal Concentrations (ng/ml) 50000Acceptance Ratio47478 6/649950 47794 51204 4926553459mean:49858SD2239% RSD4.49%RE-0.284n6第35頁(yè)/共74頁(yè)Sensitivity:定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，要求至少

44、能滿足測(cè)定定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，要求至少能滿足測(cè)定35個(gè)個(gè)半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度，或半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度，或Cmax的的1/101/20時(shí)的藥物濃度，其時(shí)的藥物濃度，其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80%120%范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于應(yīng)小于20%。應(yīng)由。應(yīng)由至少至少5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試結(jié)果證明。個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試結(jié)果證明。 最低檢測(cè)濃度最低檢測(cè)濃度(X/ml)最低檢測(cè)量最低檢測(cè)量(X)最低定量下限最低定量下限(LLOQ)第36頁(yè)/共74頁(yè)Recovery (Extraction Efficiency)提取回收率提取回收率: : 應(yīng)考察高、中、低應(yīng)考察高、中、低3 3個(gè)

45、濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)一致、精密和可重現(xiàn)。當(dāng)一致、精密和可重現(xiàn)。 低低、中中、高高(3(3個(gè)濃度個(gè)濃度):):第37頁(yè)/共74頁(yè)Conc.(ng/ml)Peak Area Fortified SamplesMean Peak Area Fortified SamplesPeak Area Processed SamplesPercent RecoveryMean Percent RecoverySDL.A1AB1B1/ACDA2B2B2/AA3B3B3/AA4B4B4/AA5B5B5/AMA6EB6B6/ EGHA7B7B7/ EA8B8B8/ EA9B9B9

46、/ EA10B10B10/ EHA11IB11B11/ IKLA12B12B12/ IA13B13B13/ IA14B14B14/ IA15B15B15/ I萃取回收率萃取回收率:第38頁(yè)/共74頁(yè)Matrix Effects:在采用質(zhì)譜方法進(jìn)行體內(nèi)藥物定量檢測(cè)時(shí)在采用質(zhì)譜方法進(jìn)行體內(nèi)藥物定量檢測(cè)時(shí), ,應(yīng)進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn), ,觀察基質(zhì)對(duì)藥物測(cè)定的影響觀察基質(zhì)對(duì)藥物測(cè)定的影響. .基質(zhì)（基質(zhì)（matrix） 尚無(wú)統(tǒng)一的解釋，曾稱為尚無(wú)統(tǒng)一的解釋，曾稱為“一種分析物（一種分析物（analyte）的）的環(huán)境（環(huán)境（milieu）”，即指標(biāo)本中除分析物以外的一切組成。，即指標(biāo)本中除

47、分析物以外的一切組成。 生物介質(zhì)生物介質(zhì) 樣品處理樣品處理 加入待測(cè)藥物加入待測(cè)藥物 測(cè)測(cè)定定fortified samples: 標(biāo)準(zhǔn)樣品標(biāo)準(zhǔn)樣品 測(cè)定測(cè)定 analytical samples:(兩種測(cè)定方式的藥物濃度相等兩種測(cè)定方式的藥物濃度相等)第39頁(yè)/共74頁(yè)Matrix Factor (MF;基質(zhì)因子基質(zhì)因子): peak area (fortified samples) / / peak area (analytical samples含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品不含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品IS adjusted Matrix Factor (內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)因子): ratios

48、 of peak area(Drug/IS) (fortified samples)ratio of peak area (Drug/IS) (analytical samples)含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標(biāo)濃度樣品不含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標(biāo)濃度樣品第40頁(yè)/共74頁(yè)Carryover試驗(yàn)試驗(yàn)：Run Code藥物L(fēng)LOQ（信號(hào)）內(nèi)標(biāo)（信號(hào)）雙空白生物樣品1B1A1-一般是在分析測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量上限濃度的樣品之后，立即測(cè)定一般是在分析測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量上限濃度的樣品之后，立即測(cè)定 一個(gè)空白樣品（最好是雙空白生物樣品）。一個(gè)空白樣品（最好是雙空白生物樣品）。 要求：要求：空白生物樣品在被

49、測(cè)藥物和內(nèi)標(biāo)的出峰位置（或時(shí)間），沒(méi)空白生物樣品在被測(cè)藥物和內(nèi)標(biāo)的出峰位置（或時(shí)間），沒(méi) 有有 殘留現(xiàn)象；或殘留的相應(yīng)信號(hào)為殘留現(xiàn)象；或殘留的相應(yīng)信號(hào)為L(zhǎng)LOQ或內(nèi)標(biāo)信號(hào)的或內(nèi)標(biāo)信號(hào)的20%以下。以下。第41頁(yè)/共74頁(yè)Stability:（1）藥物母液（長(zhǎng)期或較長(zhǎng)時(shí)間）放置穩(wěn)定性）藥物母液（長(zhǎng)期或較長(zhǎng)時(shí)間）放置穩(wěn)定性（2）血漿樣品長(zhǎng)期放置穩(wěn)定性）血漿樣品長(zhǎng)期放置穩(wěn)定性（3）血漿樣品室溫放置穩(wěn)定性）血漿樣品室溫放置穩(wěn)定性（4）血漿樣品處理后（自動(dòng)進(jìn)樣器）穩(wěn)定性）血漿樣品處理后（自動(dòng)進(jìn)樣器）穩(wěn)定性（5）血漿樣品凍融穩(wěn)定性）血漿樣品凍融穩(wěn)定性樣品的濃度一般設(shè)為：低、中、高（三個(gè)濃度梯度）；樣品的濃

50、度一般設(shè)為：低、中、高（三個(gè)濃度梯度）； 常依樣品測(cè)定中的常依樣品測(cè)定中的QC樣品進(jìn)行試驗(yàn)。樣品進(jìn)行試驗(yàn)。原則上以研究過(guò)程的實(shí)際狀況為穩(wěn)定性考察的依據(jù)。原則上以研究過(guò)程的實(shí)際狀況為穩(wěn)定性考察的依據(jù)。標(biāo)明：藥物的濃度；藥物儲(chǔ)存的介質(zhì)（或溶媒）；標(biāo)明：藥物的濃度；藥物儲(chǔ)存的介質(zhì)（或溶媒）； 樣品放置（或儲(chǔ)存）的條件和環(huán)境；樣品放置（或儲(chǔ)存）的條件和環(huán)境； 放置的時(shí)間或處置的條件等。放置的時(shí)間或處置的條件等。第42頁(yè)/共74頁(yè)Relative Retention:評(píng)價(jià)和觀察分析系統(tǒng)的適宜性評(píng)價(jià)和觀察分析系統(tǒng)的適宜性(suitability)選定一個(gè)濃度的樣品選定一個(gè)濃度的樣品(QC中的一個(gè)濃度中的一

51、個(gè)濃度)進(jìn)行不同日期進(jìn)行不同日期( (批批) )的測(cè)定的測(cè)定計(jì)算出相對(duì)保留的可接受范圍計(jì)算出相對(duì)保留的可接受范圍 Retention Time (min.)天天( (批批) ) 藥物藥物 內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo) Relative Retention 1 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.01 3 4.10 4.06 1.01 3.98 3.94 1.01 4.10 4.06 1.01 4.12 4.06 1.01 3.98 3.94 1.01 3.98 3.94 1.0

52、1 4 3.98 3.94 1.01 . . . 7 4.02 3.97 1.02 . . . 10 4.02 3.94 1.02 . . . Mean Relative Retention 1.01 Acceptable Relative Retention Range -15% 0.859 +15% 1.16第43頁(yè)/共74頁(yè)5. 常用分析測(cè)試方法：常用分析測(cè)試方法：以以LC-MSn為主流的檢測(cè)分析手段：為主流的檢測(cè)分析手段： 選擇性選擇性、靈敏度明顯提高靈敏度明顯提高；方法學(xué)建立和樣品測(cè)試快。；方法學(xué)建立和樣品測(cè)試快。 藥物藥物 劑量劑量 檢測(cè)靈敏度檢測(cè)靈敏度 備注備注 8021 1 m

53、g /人人 25 pg/ml LXT-101 0.05 mg / kg 20 pg/ml 緩釋緩釋14天天 Leuprorelin 0.3 mg / kg 30 pg/ml 緩釋緩釋45天天 NTX 1.0 mg / kg 50 pg/ml 緩釋緩釋45天天 SNF 0.1 mg / kg 50 pg/ml BUSPHCl 5 mg /人人 25 pg/ml第44頁(yè)/共74頁(yè)生物技術(shù)制劑分析技術(shù)：生物技術(shù)制劑分析技術(shù)：生物技術(shù)藥物：生物技術(shù)藥物：分子量大，穩(wěn)定性差，半衰期短；分子量大，穩(wěn)定性差，半衰期短； 多次注射給藥，順應(yīng)性差；多次注射給藥，順應(yīng)性差； 對(duì)給藥系統(tǒng)的依賴性大。對(duì)給藥系統(tǒng)的依賴

54、性大。 藥物制劑中的穩(wěn)定化性，藥物制劑中的穩(wěn)定化性， 提高生物利用度問(wèn)題，提高生物利用度問(wèn)題， 延長(zhǎng)體內(nèi)時(shí)間，延長(zhǎng)體內(nèi)時(shí)間， 體內(nèi)、外評(píng)價(jià)問(wèn)題。體內(nèi)、外評(píng)價(jià)問(wèn)題。第45頁(yè)/共74頁(yè)sample poolingone point (36# & D2 ) 05101520250200400600800time（min)plasma drugconcentration（ug/ml)D236#36#-meanD2-mean快速樣品檢測(cè)方法：快速樣品檢測(cè)方法：適合于處方設(shè)計(jì)初期的評(píng)篩。適合于處方設(shè)計(jì)初期的評(píng)篩。第46頁(yè)/共74頁(yè)1. 藥物相互作用的類別藥物相互作用的類別 ( Types of D

55、rug Interactions )：藥物理化性質(zhì)相互作用：藥物理化性質(zhì)相互作用：藥劑學(xué)的相互作用藥劑學(xué)的相互作用 藥物效應(yīng)學(xué)的相互作用：藥物效應(yīng)學(xué)的相互作用：藥理、毒理的相互作用藥理、毒理的相互作用 藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用：藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用：ADME的相互作用的相互作用四四. 藥物制劑設(shè)計(jì)和體內(nèi)評(píng)價(jià)考慮的問(wèn)題藥物制劑設(shè)計(jì)和體內(nèi)評(píng)價(jià)考慮的問(wèn)題第47頁(yè)/共74頁(yè)（1） 藥物的理化藥物的理化性質(zhì)相互作用：性質(zhì)相互作用：兩種或兩種以上的藥物可以發(fā)生種種物理、化學(xué)反應(yīng)；兩種或兩種以上的藥物可以發(fā)生種種物理、化學(xué)反應(yīng)；藥物藥物之間、藥物賦形劑之間；藥物藥物之間、藥物賦形劑之間；產(chǎn)生沉淀：產(chǎn)生沉淀：沉淀

56、不明顯：沉淀不明顯：藥物制劑中的增溶劑被稀釋：藥物制劑中的增溶劑被稀釋： 第48頁(yè)/共74頁(yè)改變組織或受體的敏感性：改變組織或受體的敏感性：（2） 藥效學(xué)的藥效學(xué)的相互作用：相互作用：藥物合用時(shí)，一種藥物可以對(duì)另一藥物的血濃度沒(méi)有明顯影響，藥物合用時(shí)，一種藥物可以對(duì)另一藥物的血濃度沒(méi)有明顯影響，但可以改變后者的藥理效應(yīng)。但可以改變后者的藥理效應(yīng)。 對(duì)受體以外部位的影響：對(duì)受體以外部位的影響： 改變體液和電解質(zhì)的平衡：改變體液和電解質(zhì)的平衡：這種相互作用多發(fā)生在作用于心肌、這種相互作用多發(fā)生在作用于心肌、 神經(jīng)肌肉突觸傳遞及腎臟的藥物；神經(jīng)肌肉突觸傳遞及腎臟的藥物； 如：兩性霉素如：兩性霉素B和

57、排鉀利尿藥可增加強(qiáng)心甙的毒性；和排鉀利尿藥可增加強(qiáng)心甙的毒性； 保泰松、吲哚美辛可加重皮質(zhì)激素類的水鈉潴留等。保泰松、吲哚美辛可加重皮質(zhì)激素類的水鈉潴留等。 第49頁(yè)/共74頁(yè)（3）藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用：）藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用： 影響藥物的影響藥物的ADME以及藥物與血漿蛋白的結(jié)合。以及藥物與血漿蛋白的結(jié)合。影響藥物的吸收：影響藥物的吸收：腸蠕動(dòng)變化對(duì)藥物吸收的影響：腸蠕動(dòng)變化對(duì)藥物吸收的影響： 影響吸收部位酶或菌叢變化：影響吸收部位酶或菌叢變化： 口服地高辛以后，部分藥物可在腸道細(xì)菌的作用下轉(zhuǎn)化為無(wú)強(qiáng)心口服地高辛以后，部分藥物可在腸道細(xì)菌的作用下轉(zhuǎn)化為無(wú)強(qiáng)心 作用的雙氫地高辛和雙氫地高辛甙元

58、。但口服紅霉素等藥物后可作用的雙氫地高辛和雙氫地高辛甙元。但口服紅霉素等藥物后可 抑制腸道里這些細(xì)菌的轉(zhuǎn)化作用，使地高辛的轉(zhuǎn)化減少，在腸道抑制腸道里這些細(xì)菌的轉(zhuǎn)化作用，使地高辛的轉(zhuǎn)化減少，在腸道 里的吸收增加，血濃度升高，可引起中毒。里的吸收增加，血濃度升高，可引起中毒。第50頁(yè)/共74頁(yè)影響與血漿蛋白的結(jié)合：影響與血漿蛋白的結(jié)合：l 大多數(shù)藥物吸收后，在不同程度上可與血漿蛋白結(jié)合；大多數(shù)藥物吸收后，在不同程度上可與血漿蛋白結(jié)合；l 結(jié)合型與游離型藥物保持一定的動(dòng)態(tài)平衡；結(jié)合型與游離型藥物保持一定的動(dòng)態(tài)平衡；l 游離型藥物可轉(zhuǎn)運(yùn)、保持活性；游離型藥物可轉(zhuǎn)運(yùn)、保持活性；l 結(jié)合型藥物一般沒(méi)有藥理

59、活性；結(jié)合型藥物一般沒(méi)有藥理活性；l 當(dāng)游離型藥物的濃度降低時(shí)，被結(jié)合的藥物又能再分離出來(lái)；這種當(dāng)游離型藥物的濃度降低時(shí)，被結(jié)合的藥物又能再分離出來(lái)；這種機(jī)機(jī) 制有利于避免血藥濃度瞬間過(guò)高，也可以延長(zhǎng)藥物的治療作用時(shí)間。制有利于避免血藥濃度瞬間過(guò)高，也可以延長(zhǎng)藥物的治療作用時(shí)間。 D + P DP 與血漿蛋白的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)作用：與血漿蛋白的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)作用： 不同的藥物與血漿蛋白的結(jié)合力不同。當(dāng)兩種藥物合用時(shí)，結(jié)合力不同的藥物與血漿蛋白的結(jié)合力不同。當(dāng)兩種藥物合用時(shí)，結(jié)合力 強(qiáng)的藥物可把結(jié)合力弱的藥物置換出來(lái)，使后者游離型的藥物濃度強(qiáng)的藥物可把結(jié)合力弱的藥物置換出來(lái)，使后者游離型的藥物濃度 增加，引起

60、不良反應(yīng)。增加，引起不良反應(yīng)。 如：磺胺類、水楊酸類藥物保泰松，可以置換甲苯磺丁脲等口服降血如：磺胺類、水楊酸類藥物保泰松，可以置換甲苯磺丁脲等口服降血 糖藥，引起低血糖反應(yīng)；糖藥，引起低血糖反應(yīng)； 保泰松、羥基保泰松、水楊酸類、安妥明、苯妥英鈉可置換雙香保泰松、羥基保泰松、水楊酸類、安妥明、苯妥英鈉可置換雙香 豆素、華法林等抗凝血藥，引起凝血障礙、出血等。豆素、華法林等抗凝血藥，引起凝血障礙、出血等。 第51頁(yè)/共74頁(yè)大部分藥物進(jìn)入機(jī)體后主要在肝臟內(nèi)經(jīng)微粒體酶的催化而代謝；大部分藥物進(jìn)入機(jī)體后主要在肝臟內(nèi)經(jīng)微粒體酶的催化而代謝；藥物也可經(jīng)肝外代謝，如腎臟和血漿的酶對(duì)藥物也有轉(zhuǎn)化作用；藥物也可經(jīng)肝外