實驗四___膠體金試紙條檢測技術

1、實驗四實驗四 膠體金試紙條診斷技術膠體金試紙條診斷技術一、簡一、簡 介介 膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術研制而成，該技術是析技術研制而成，該技術是9090年代初在免疫年代初在免疫滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術，最先用于人絨毛膜促性腺激疫學檢測技術，最先用于人絨毛膜促性腺激素（素（HCGHCG）的測定和乙型肝炎病毒表面抗原的測定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAgHBsAg）等檢測。等檢測。p膠體金膠體金（Colloidal goldColloidal gold）是氯金酸是氯金酸（HAuClHAu

2、Cl4 4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作的水溶膠，氯金酸在還原劑的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。質量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球質量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無棱角。形，大小均一，無棱角。質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀各異。各異。膠體金的質量判定標準膠體金的質量判定標準p膠體金標記的原理：膠體金標記的原理：膠體金在堿性條件下帶膠體金在堿性條件下帶負電荷，與蛋白質分子的正電荷基團藉靜電負電荷，與蛋白質

3、分子的正電荷基團藉靜電吸引而形成牢固結合。吸引而形成牢固結合。p膠體金標記技術膠體金標記技術（Immunogold labeling Immunogold labeling techniquetechnique）是以膠體金作為示蹤標記物應是以膠體金作為示蹤標記物應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。二、膠體金試紙條診斷技術的原理二、膠體金試紙條診斷技術的原理 以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細血管作用，滴加在膜條一端的液體慢的毛細血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結合，并利慢向另一端滲

4、移，通過抗原抗體結合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應，檢測抗原用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應，檢測抗原/ /抗體?？贵w。最常用的是雙抗夾心法檢測抗原最常用的是雙抗夾心法檢測抗原膠體金試紙條示意圖膠體金試紙條示意圖檢測線檢測線質檢線質檢線吸收墊吸收墊樣品墊樣品墊硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜連接墊連接墊（膠體金墊）（膠體金墊）背襯背襯（底板）（底板）p測定時將試紙條下端浸入液體測定時將試紙條下端浸入液體標本中，下端吸水材料即吸取標本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動，流經(jīng)液體向上端移動，流經(jīng)C C處時使處時使干片上的干片上的免疫金復合物免疫金復合物復溶，復溶，并帶動其向膜條滲移。并帶動其向膜條滲移。

5、測測 定定p若標本中有待測特異抗原，即若標本中有待測特異抗原，即可與免疫金復合物中的抗體結可與免疫金復合物中的抗體結合，此抗原抗體復合物流至測合，此抗原抗體復合物流至測試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜上顯出紅色上顯出紅色反應線條反應線條（T T）。）。測測 定定測測 定定p過剩的免疫金復合物繼續(xù)前行，過剩的免疫金復合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相抗小鼠至參照區(qū)與固相抗小鼠IgGIgG結合結合（免疫金復合物中的單克隆抗（免疫金復合物中的單克隆抗體為小鼠體為小鼠IgGIgG），），而顯出紅色而顯出紅色質質控線條控線條（R R）。）。測測 定定p陰性標本則無反應線條，而僅顯示質控線條

6、陰性標本則無反應線條，而僅顯示質控線條。膠體金快速診斷技術的特點膠體金快速診斷技術的特點 p簡捷快速：簡捷快速：操作簡單，一般只要操作簡單，一般只要5 5-10min -10min 就就會出結果，而其它方法如會出結果，而其它方法如ELISAELISA需要需要1 1-2h-2h，PCR PCR 需要時間更長。需要時間更長。p結果易于判定：結果易于判定：陰、陽性呈色很明顯，肉眼陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。很容易判斷。p特異性好：特異性好：因為該技術大多用單克隆抗體標因為該技術大多用單克隆抗體標記，這決定了它具有很好的特異性。記，這決定了它具有很好的特異性。p病毒性疾?。翰《拘约膊。簜魅拘苑ㄊ夏也?、禽流感、傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬細小病毒、豬瘟等。新城疫、犬細小病毒、豬瘟等。p寄生蟲疾病：寄生蟲疾?。貉x病、旋毛蟲病、囊蟲血吸蟲病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。病、恙蟲病。p細菌性疾?。杭毦约膊?/p>