臨床免疫組化實用大全

1、免疫組化定義： 免疫組化，是應用免疫學根本原理抗原抗體反響，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反響使標記抗體的顯色劑熒光素、酶、金屬離子、同位素顯色來確定組織細胞抗原多肽和蛋白質(zhì)，對其進展定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(shù)(immunohistochemistry或免疫細胞化學技術(shù)(immunocytochemistry。)臨床常用免疫組化指標的意義臨床病理工作中， 我們常用到 “腫瘤細胞免疫組化耐藥預后標記， 但是許多單位只寫陽性結(jié)果， 不寫臨床意義， 其結(jié)果對臨床幫助不大， 因為許多醫(yī)生不懂得這些結(jié)果的意義， 因此建議大家在出此類報告時， 把“腫瘤細胞免疫組化耐藥預后標記的意

2、義打印在報告中，以增加病理報告的使用價值。1、惡性月中瘤免疫組化耐藥預后標記，全套 4項：P-gP, GSTtt ,TOPOH, Ki-67。2、乳癌免疫組化耐藥預后標記，全套 7項：P-gp, GSTtt ,TOPOH, Ki-67, ER, PR， C-erbB-2。3、意義：標記物-作用 -陽性部位-臨床意義多藥耐藥基因蛋白 P-Gp -藥泵作用-胞膜 / 胞漿 -陽性率越高，對以下藥物耐藥性越強：阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、米托蒽醌、花堿、新堿、紫彬醇、泰素帝。谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶GST九-解毒作用-胞漿-陽性率越高，對以下藥物耐藥性越強：阿霉素、順鉑、氮芥、環(huán)磷酰胺、瘤可寧。拓撲異構(gòu)酶H

3、 TOPOH-靶點作用-胞核-陽性率越高，對以下藥物越有效：意環(huán)類抗生素和鬼臼毒素類，如 VP16、替尼泊甘、玫瑰樹堿、新霉素、柔紅霉 素、表阿霉素、阿霉素、VM26。陽性率高者對VP16尤其有效。雌激素受體ER -性激素作用-胞核 - 陽性率越高，腫瘤對分泌治療越有效，預后越好。孕激素受體(PR) -性激素作用-胞核 - 陽性率越高， 腫瘤對分泌治療越有效， 預后越好。C-erbB-2-癌基因產(chǎn)物-胞漿 -陽性率越高，腫瘤惡性程度越高。ER、 PR 陽性而C-erbB-2也陽性者，用三苯氧胺治療效果不好。Ki-67- 細胞增殖標志-胞核 -陽性率越高，腫瘤增殖越快，惡性程度越高。Ki-67

4、為細胞增值的一種標記，在細胞周期 G1、 S、 G2、 M 期均有表達， G0 期 缺如，具和許多月中瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移、預后密切相關(guān)。PA(增埴細胞核抗原)。CEA 多數(shù)腺癌表達CEARb (retinoblastoma)!網(wǎng)膜母細胞瘤)基因是月中瘤抑制基因，調(diào)節(jié)細胞周期。P53在免疫組化中均為突變型，陽性率越高，預后約差。野生型半衰期很短Nm23 是轉(zhuǎn)移抑制基因，其陽性表達和腫瘤轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)。目前已被廣泛應用于乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、喉癌等多種惡性腫瘤的檢測。幾乎所有的研究都說明， nm23 蛋白高表達患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率相對較低，存活期相對較長。E-Ca， E 鈣粘附蛋

5、白，介導細胞間粘連作用的跨膜糖蛋白，其功能喪失引起細胞之間連接的破壞，主要用于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面的研究。PS2雌激素調(diào)節(jié)蛋白，其表達和ER表達有關(guān)，可作為分泌治療和預后判斷的指標之一。CK18,低分子量角蛋白，主要標記各種單層上皮包括腺上皮，而復層鱗狀上皮常陰性，主要用于腺癌診斷。CK19,分布于單層上皮和間皮，常用于腺癌診斷，肝細胞不表達，而膽管為陽 性反響Hep par 1,肝細胞抗原，正常肝細胞和高分化肝細胞癌陽性，低分化肝細胞癌多 弱陽性或陰性。CK20,用于胃腸道腺癌、卵巢黏液性月中瘤、皮膚Merkel細胞癌診斷。鱗癌、乳腺癌、肺癌、子宮膜和卵巢非黏液性腫瘤常陰性。CK7 卵巢、肺和

6、乳腺上皮常陽性，結(jié)腸、前列腺、胃腸道上皮陰性。Villin 絨毛蛋白，正常組織中， villin 通常只表達于有刷狀緣的細胞上，如胃腸道上皮細胞、胰腺和膽管上皮細胞以及腎實質(zhì)的上皮細胞中特別是近曲小管。Villin 在胃腸道癌、胰腺癌、膽囊癌和膽管癌組織中有很高的表達率，具有明顯腺樣構(gòu)造的腫瘤上沒有villin 表達，那么這個腫瘤為胃腸道、胰腺、膽囊或膽管來源的可能性極低。乳腺癌也經(jīng)常成為女性患者未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌要鑒別排除的一種疾病。 因為在轉(zhuǎn)移癌組織上觀察到明顯的 villin 免疫組化陽性染色，那么這個腫瘤就極不可能為乳腺來源。其他villin 免疫組化染色通常為陰性表達的腫瘤還有：如卵

7、巢漿液性癌、尿道移行細胞癌和前列腺癌。間皮瘤也經(jīng)常為 villin 陰性表達，因此在一些情況下 Villin 還可以作為鑒別間皮瘤和腺癌使用抗體的一種。但是也有一些非胃腸道來源的腫瘤可表達villin ，如子宮膜樣腺癌、卵巢粘液性癌、腎細胞癌和小局部肺癌。也有一些專家報道Villin 在局部宮頸膜腺癌病例中表達。肝癌的診斷Villin 免疫組化染色可以顯示出毛細膽管構(gòu)造，因此它也可能在表達局部肝癌的管狀構(gòu)造上很有用。 多克隆 CEA 是用于此目的的第一種試劑， 而且 CD10 (CALLA)在表達肝癌的該構(gòu)造上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10 (CALLA)在肝癌病例上的表達，

8、 相互之間并沒有任何的沖突， 因此如果疑心肝癌的可能性， 建議將這三種抗體共同使用以協(xié)助疑難病例的診斷。Villin 在神經(jīng)分泌腫瘤上的應用Villin 在神經(jīng)分泌腫瘤的研究上也很有幫助。眾所周知，類癌和胰腺的胰島細胞腫瘤具有相相似的形態(tài)學特征，僅在形態(tài)學上區(qū)分這兩種腫瘤幾乎是不可能的。Villin 在這種情況下特別有用，因為據(jù)文獻報道在85%的胃腸道類癌病例中有villin 的表達，但在胰島細胞腫瘤上未見陽性表達報道。 Villin 在類癌上的表達通常為胞膜陽性。另外，有一些證據(jù)說明 villin 在胃和下消化道的小細胞癌上的表達率比在其他部位的小細胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。

9、據(jù)文獻報道，大約有40%的肺類癌病例villin 陽性，在其他一些神經(jīng)分泌腫瘤上，如甲. word.zl-狀腺髓樣癌和少數(shù)的美克爾細胞瘤上也有villin 的表達。MRP1 多藥耐藥相關(guān)蛋白1，影響化療敏感性，和預后相關(guān)。MDR 多藥耐藥基因TS 胸苷合成酶，是5-FU 重要作用靶點，如果其高表達，陽性反映+ 以上，提示腫瘤細胞對5FU 耐藥。Syn 突觸素 神經(jīng)組織標志S-100 神經(jīng)組織標志，存在于神經(jīng)組織，垂體、 頸動脈體，腎上腺髓質(zhì)、唾液腺、少數(shù)間葉組織，常用于神經(jīng)鞘瘤、惡黑、脂肪肉瘤、軟骨腫瘤診斷。NSE 主要用于神經(jīng)分泌腫瘤診斷Chr,嗜銘素，腎上腺髓質(zhì)含量很高，鑒別腎上腺髓質(zhì)和皮

10、質(zhì)，用于神經(jīng)分泌月中瘤診斷。CKH 高分子角蛋白，主要標記鱗狀細胞腫瘤CKL 低分之角蛋白，主要標記單層上皮、腺上皮EMA 上皮膜抗原，糖蛋白，廣泛分布各種上皮及其腫瘤Vim 波形蛋白，間葉組織標志P504 甲?；o酶A 消旋酶檢測診斷前列腺癌的敏感性為 97， 特異性為100。AMACR的優(yōu)點在于它是癌癥特異性，只存在于癌癥組織。Rubin稱，AMACR亦可用作其他癌癥的診斷標志物。對各種癌癥細胞進展檢查后發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都過度表達AMACR ，以結(jié)腸直腸癌和前列腺癌表達最高。CD117 胃腸間質(zhì)瘤CD10 作為共同急性淋巴母細胞型白血病抗原，

11、主要表達于未成熟淋巴細胞，在Burkitt 淋巴癌， 慢性髓性白血病等造血系統(tǒng)疾病的診斷中具有應用價值。 近幾年來發(fā)現(xiàn)該抗原在造血系統(tǒng)外的某些腫瘤中有表達， 如子宮膜間質(zhì)肉瘤、 惡性黑色素瘤等?？贵w在對腎細胞癌進展診斷和鑒別時有一定的參考價值。CD15是一種細胞粘附分子，因其對霍奇金淋巴瘤(HD中的R-S細胞具有良好的標記作用，被認為是HD 的重要標志物。除HD 的鑒別診斷外，對胃癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、乳腺癌等腫瘤CD15 的表 達研究發(fā)現(xiàn)， CD15 表達隨癌細胞分化程度下降、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期增高而明顯增高。認為 CDl5 的表達是判斷腫瘤的開展、預測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預后的良好 指標。免疫

12、電鏡觀察顯示， CD15抗原主要分布于大腸癌細胞漿的界膜、質(zhì)網(wǎng)、高爾基體及近細胞核膜處， CD15可能是通過對所結(jié)合的鋪基構(gòu)型改變影響和 參與腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移過程。SMA 平滑肌肌動蛋白，標記平滑肌CD56 為神經(jīng)細胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細胞， 常用于星型細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)分泌腫瘤診斷，也是NK 細胞瘤的重要標志，也標記小細胞肺癌Des,結(jié)蛋白，廣泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌細胞和肌上皮細胞，高分化高表達、低分化低表達。MSA 肌特異性肌動蛋白，廣泛分布于幾乎所有肌型細胞中CD68 存在于骨髓和各神經(jīng)組織的巨噬細胞 用于粒細胞白血病、各種單核細胞來源腫瘤、包括惡性纖

13、維組織細胞瘤診斷首選。CD34 表達于早期淋巴造血干細胞、祖細胞、皮細胞、胚胎纖維母細胞和某些神經(jīng)組織細胞， 多用于標記血管皮細胞， 血管源性腫瘤的診斷， GIST 80-90%.CD31也標記血管皮。CD44是一種分布廣泛的跨膜糖蛋白分子，分CD44s和CD44v兩大類。CD44s主要作為透明質(zhì)酸受體，結(jié)合透明質(zhì)酸后影響腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。而CD44v 那么主要表達于轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞。道明等用免疫組化 LSAB 法檢測了 42 例食管鱗癌CD44v4 5 的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達率為 76 19 （16 21），而非轉(zhuǎn)移組的陽性率為42 86 （9 12），兩組間有顯著性差異。癌

14、巢周邊的癌細胞、肌間浸潤的癌細胞、有核分裂的癌細胞和癌栓中的 癌細胞及浸潤脈管壁的癌細胞均呈強陽性表達。 成武等檢測了 20 例正常胃粘膜上皮、 43 例異型增生和 85 例胃癌組織 CD44v6 的表達，結(jié)果正常胃粘膜無 表達，而異型增生和胃癌 組織陽性率分別為 30 2和74 1，其表達強度與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤生長方式、靜脈和淋巴管侵襲及遠處 轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以上結(jié)果均說明， CD44v的高表達構(gòu)成了腫瘤細胞的侵襲性與易轉(zhuǎn)移性。NESTIN,神經(jīng)干細胞中極為豐富Ost 成骨素，為骨化細胞分泌。AAT 抗胰蛋白酶纖維組織細胞來源腫瘤ACT 抗糜蛋白酶GFAP 膠質(zhì)纖維酸性蛋白 神經(jīng)

15、組織標志，多用于星形膠質(zhì)瘤診斷Tg 甲狀腺球蛋白，甲狀腺癌TG 陽性。CT 降鈣素 甲狀腺髓樣癌陽性。PH 甲狀旁腺素 甲狀旁腺腫瘤陽性N-myc表達增強的小細胞肺癌和神經(jīng)母細胞瘤對化療缺乏反響并進展快速；bcl-2:耐藥機理為抗凋亡作用，高表達者對多數(shù)抗癌藥物/放射治療耐受。腫瘤相關(guān)抗原72 （TGA72） 多種惡性上皮性腫瘤表達TGA72 ，尤其是乳腺癌、卵. word.zl-巢癌和結(jié)腸癌。正常上皮細胞、肉瘤、淋巴造血系統(tǒng)腫瘤通常TGA72 陰性。TGA72 抗體用于乳腺癌的研究較多，其高表達通常與腫瘤體積大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤細胞分化差及高增殖活性有關(guān)。腫瘤相關(guān)抗原(GA733) 編碼上皮糖蛋

16、白 40， 是一種上皮細胞黏附分子(EP-CAM) ，對上皮細胞的生長與分化起著重要作用。多種腫瘤可有GA733 表達，尤其是乳腺癌、結(jié)腸癌及肺癌等。Kubuschok等采用GA733對非小細胞肺癌手術(shù)切除淋巴結(jié)中隱匿性微轉(zhuǎn)移灶進展檢測， 發(fā)現(xiàn)隱匿灶的檢出是判斷總生存率的獨立預后因子。結(jié)腸癌GA733 表達形式與腫瘤預后有關(guān)，細胞膜及細胞漿的表達預后較基膜側(cè)的表達為差。TTF-1 甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1， TTF-1 表達于甲狀腺腺上皮和肺的上皮細胞中。在肺腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)， 大多數(shù)肺的小細胞癌、 原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腺癌、 少局部大細胞未分化肺癌、 大多數(shù)非典型神經(jīng)分泌腫瘤免疫組化結(jié)果顯示TTF-1

17、陽性， 而肺鱗癌及絕大多數(shù)典型類癌TTF-1 陰性。在甲狀腺乳頭狀腺癌中 TTF-1 亦陽性，而TTF 在其它組織表達陰性。據(jù)此認為 TTF-1 可用來鑒別肺腺癌與鱗癌，并有助于與肺轉(zhuǎn)移性腺癌的鑒別。TTF-1 在甲狀腺及其腫瘤中的表達TTF-1 主要表達在甲狀腺濾泡細胞中和甲狀旁腺的主細胞中，TTF-1 為甲狀腺分化和甲狀腺球蛋白分泌調(diào)節(jié)的根底物質(zhì)， 可促進甲狀腺過氧化物酶、碘/ 鈉的轉(zhuǎn)運， ?TTF-1 與血清 TSH 的活性有關(guān)， 活性的 TSH-R 可增強 TTF-1的表達。TTF-1 在良惡性甲狀腺組織中表達不同，正常甲狀腺和良性腺瘤表達多，甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌中表達少，未分化癌中

18、不表達， TTF-1 在惡性甲狀腺病變中的表達強度隨年齡增加而增強，而且病變存瘤期長，復發(fā)機率高。TTF-1 在肺癌中的表達75%的肺非小細胞癌NSCLCs陽性表達，腺癌（ACs）明顯高于鱗癌（SCC）, 90%以 上的原發(fā)性小細胞肺癌（SCLC欣達陽性，TTF-1在非小細胞肺癌NSCLCs）陽性 表達強度與病人的預后成呈負相關(guān)，可作為一項獨立的預后指標，肺的典型性類癌（TCS解為陰性，說明小細胞肺癌和非小細胞肺癌可能有一個不 同于 TCS 的共同起源的理論。臨床常見的免疫組化指標在乳腺癌診治中的應用近年來， 由于免疫組化實驗方法在各醫(yī)院病理科的迅速普及， 許多患者的術(shù)后標本可以進展免疫組化檢

19、查。 這對于患者的診斷、 分型以及術(shù)后的綜合治療有著重要的意義。本文就臨床上常見的一些指標及其意義進展綜訴。一、激素受體ER和孕激素受體PR人類最先發(fā)現(xiàn)乳腺癌細胞和激素的關(guān)系始于1896年。Bentson觀察到乳腺癌患者切除卵巢后可使乳腺癌細胞的生長受到抑制。1967年Jensen發(fā)現(xiàn)人類乳腺癌中含有 ER 。從此開場了真正意義上的乳腺癌分泌治療的研究。女性正常乳腺的細胞上存在ER和PR,雌激素和孕激素通過ER和PR對細胞功能進展調(diào)節(jié)。當細胞惡變時，腫瘤細胞可以局部地或全部保存正常的受體系統(tǒng)， 其功能與正常細胞相似。 這種腫瘤細胞的生長仍然依賴原來的激素環(huán)境調(diào)節(jié)， 稱為激素依賴性腫瘤，臨床上稱

20、為 ER 陽性乳腺癌。有些細胞在癌變過程中，其受體系統(tǒng)保存很少或完全喪失， 不能再作為激素的靶細胞， 其生長不再受激素的控制與調(diào)節(jié)， 臨床 上表現(xiàn)為ER陰性乳腺癌。Jensen®現(xiàn)ERB,很快又發(fā)現(xiàn)PR,并證明PR的合 成與雌激素和ER復合物在核發(fā)生的變化過程有關(guān)，PR的形成直承受ER的控制 和調(diào)節(jié)，故PR陽性的乳腺癌，ER大多為陽性。臨床上可以通過對雌激素受體ER和孕激素受體PR的檢測，得出月中瘤細胞激素受體含量的水平， 從而提示乳腺癌的預后信息和指導分泌治療。 據(jù)報道乳腺癌ER、PR檢測的陽性率分別為40%60%、30%左右。許多文獻均已證實，ER、PR變化與乳腺癌病人預后密切相

21、關(guān)，亦與其他公認的預后因素，如月中瘤分級、倍體性及分期有關(guān)。高分化月中瘤或臨床分期較低的月中瘤 ER、PR更可能陽性，受體陽性腫瘤細胞的明顯減少與細胞增殖分級增高、c-erbB-2癌基因擴增增加及EGFR 表達增加有關(guān)。免疫組化抗受體檢測可預測乳腺癌對激素治療的反響性。無ER或PR表達的月中瘤對激素治療通常反響性差， 而ER及PR陽性月中瘤那么對 激素治療反響性高。1974年美國BethesdeH際會議，綜合世界各國400多例各種方式的分泌治療報道，說明事先未經(jīng)激素受體測定的乳腺癌患者， 應用分泌治療有效率只有30%； 而經(jīng)ER 測定陽性者有效率達55%60，受體陰性者有效率58 。TAM 治

22、療無效的原因與ER 的異常構(gòu)造有關(guān)。其后多年病例不斷積累，報道的有效率根本在這一水平。1998年美國臨床腫瘤年會 ASCO 國際權(quán)威協(xié)作臨床研究報道37 000例乳腺癌患者的結(jié)果說明：乳腺癌術(shù)后輔助三苯氧胺 TAM治療可以明顯降低復發(fā)率、死亡率；TAM對絕經(jīng)后患者有效，絕經(jīng)前患者也有一定療效；ER陽性患者用TAM效果最好，ER不明的患者也有效；輔助化療后加用 TAM,能進一步提高療效；延長服藥時間能提高療效；服用 TAM明顯降低對測乳腺癌發(fā)生率；長期服用 TAM會增加患子宮膜癌的風險。二、PS2基因PS2蛋白是Masialowski于1982年從激素依賴性乳腺癌 MCF-7細胞株中提取出來 的

23、雌激素誘導蛋白之一，在乳腺癌中表達陽性率約為43%58%。PS2基因受雌 激素調(diào)節(jié)和控制，在雌激素誘發(fā)和控制下才能轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生PS2蛋白。換言之PS2依賴于 ER 的存在?？梢哉J為，PS2 基因的存在與ER、 PB 存在著密切正相關(guān)關(guān)系。Gion研究446例原發(fā)性乳腺癌，觀察PS2與ER、PR關(guān)系。結(jié)果68. 5% PS2 陽性病例，具ER、PB均陽性；而PS2陽性其ER、PR均陰性者缺乏3%。Gillesby 等報道ER +者中有59%, PR +者中有60% PS2呈陽性。大量研究說 明，PS2蛋白可以顯示功制性雌激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)，能更好的指導臨床抗雌激素治療。目前認為PS2對判斷預后及指導分泌

24、治療均有價值，陽性者預后好，復發(fā)率及死亡率均較低，且分泌治療有效。作為分泌治療效果預測的指標， PS2 可以補充ER、PR的缺乏，甚至有學者認為PS2更優(yōu)于ER、PR。如果將三者結(jié)合使用，可到達相當滿意的效果。當三項均陰性時，分泌治療很少有效，預后甚差。三、c-erbB-2癌基因c-erbB-2癌基因是乳腺組織細胞中較常見而易激活的原癌基因。在多種腺癌細胞中此癌基因均有高水平表達，報道最多的是乳腺癌。c-erbB-2癌基因的異常表達擴增見于25-30%的原發(fā)性乳腺癌病例，并且僅限于癌細胞，而不出現(xiàn)于正常乳腺上皮。c-erbB-2擴增與 雌、孕激素受體表達呈負相關(guān)，與月中瘤級別較高有關(guān)。c-er

25、bB-2基因表達陽性者可使ER陽性病人對分泌治療的反響率降至 20%;ER陰性病人分泌治療幾乎無效。c-erbB-2癌基因的擴增或過度表達還與乳腺癌的復發(fā)、轉(zhuǎn)移及生存期明顯相關(guān)。過度表達者其術(shù)后早期復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率增加 ,生存期縮短，淋巴結(jié)陽性的乳腺癌c-erbB-2 的過表達是預后不良的重要因素。 另有研究說明，孚L腺癌c-erbB-2表達陽性病例其瘤月中往往大于 2cm,因此推測其蛋白產(chǎn)物 p185 過量表達可能與腫瘤的生長速度有關(guān)。因而c-erbB-2 的強陽性表達可作為識別早期乳腺癌的有效指標。近年來有人提出" 四聯(lián)"檢測，包括ER、PR、PS2 以及c-erbB

26、-2。ER、PR、PS2陽性表達的乳腺癌激素治療的敏感性高，無c-erbB-2基因過度擴增的乳腺癌同樣治療敏感性增加。相反，前三者陰性而后者陽性的乳腺癌，通常其復發(fā)率、死亡率均高，預后差。四、p53抑癌基因p53是一種抑癌基因，是人類研究最多的基因，分野生型 Wtp53和突變型 Mtp53。Wtp53在正常組織含量低，半衰期短，僅 3060分鐘，而免疫組化的敏感性無法檢測如此微量的抗原成分。 當 p53 突變后， 能和進入組織的各種病毒蛋白、 Wtp53 蛋白、 正常等位基因蛋白和熱休克蛋白等結(jié)合形成穩(wěn)定的復合物，在組織的半衰期長， 含量逐漸積累， 為免疫組化的檢測提供了條件。 其陽性表達率約

27、2 5 % 3 5 %。 Wtp53在正常組織中能參與細胞從 G0期進入G1期的負調(diào)節(jié)。從而控制細胞的增生，同時誘導細胞的程序性死亡。當 p53 突變后那么喪失了啟動細胞凋亡的能力， 結(jié)果使腫瘤細胞數(shù)目增加， 從而使細胞呈現(xiàn)無休止生長而凋亡受到抑制。 在乳腺癌增生過程中有Mtp53 基因表達， 并隨著非典型增生程度的增加而增加。p53表達水平與細胞的高度增生及月中瘤細胞的分化程度有關(guān)，分化越低惡性程度越高的腫瘤， p53 基因水平越高。 p53 基因蛋白陽性和 ER 陰性的乳腺癌患者預后不良，生存期短。五、 nm23nm23又稱為抗轉(zhuǎn)移癌基因，是一種抑癌基因，產(chǎn)物是由152個氨基酸組成的蛋白質(zhì)

28、，與二磷酸核苷激酶 NDPK 的氨基酸序列具有高度同源性。人類nm23基因有2個亞型：nm23H1和nm23H2,兩者有88%同源性，nm23H1與乳腺癌的預后關(guān)系更密切。nm23蛋白具有NDPK功能，通過影響微管聚合而調(diào)節(jié)細胞運動，并通過影響 G 蛋白的信號傳遞而發(fā)揮負向調(diào)節(jié)作用，從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。但其作用并不依耐于 NDPK 的活性。有實驗結(jié)果說明，與轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)的是nm23/NDPK的表達水平而不是NDPK的活性。nm23是獨立預后指標，其表達與年齡、月中瘤大小、ER、PR和C-erbB-2無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、組織學分型、分級及臨床分期均有顯著關(guān)系，nm23 高表達者的預后明顯好于低

29、表達者。nm23表達降低的乳腺癌分化較低， ER 表達水平低，并常常出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預后不良。在乳腺癌進展過程中，nm23的表達水平降低。通過檢測nm23可以把腋淋巴結(jié)陽性病人中可能發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移和腋淋巴結(jié)陰性病人中有潛在高轉(zhuǎn)移傾向的病例篩選出來，進展相應的預防性治療，從而提高治療效果。六、多耐藥 MDR 基因腫瘤細胞耐藥是化療失敗的主要原因，引起耐藥的重要原因之一是多藥耐藥性，即腫瘤細胞接觸一種抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性后， 對多種構(gòu)造和作用機制不同的其它抗癌藥也產(chǎn)生耐藥性。多藥耐藥MDR基因的產(chǎn)物P糖蛋白P-gp是一種跨膜蛋白， 作為 “藥泵功能引起癌細胞產(chǎn)生耐藥， 它具有膜轉(zhuǎn)運蛋白的許多構(gòu)造特征，

30、一旦與抗癌藥物結(jié)合，在ATP 供能下，將藥物由胞泵出胞外，因而胞藥物濃度不斷下降， 以致無法發(fā)揮細胞毒作用， 出現(xiàn)耐藥性。 陽性表達的細胞對化療劑尤其是蒽環(huán)類和花堿類及阿霉素等化療劑，具有固有和獲得性耐藥。 P-gp表達可見于高度固有耐藥的腫瘤， 在這些腫瘤， P-gp 的高水平表達亦見于產(chǎn)生這些月中瘤的正常組織。對化療敏感的月中瘤通常P-gp表達 率低，那些對系統(tǒng)化療最敏感的實體瘤精原細胞瘤和胚胎性癌很少出現(xiàn)P-gp 表達，曾承受過化療患者發(fā)生的月中瘤常有P-gp表達增強。檢測P-gp表達有助于確定可能對常規(guī)化療耐藥的腫瘤， 從而提供適合于這些病人合理的替代治療方法， 對腫瘤病人選擇化療方案

31、和預后的判斷具有重要的臨床意義。七、血管皮細胞生長因子(VEGF)血管形成在腫瘤生長、 浸潤、 轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用， 它受到一系列促進和抑制因子的調(diào)節(jié),其中最重要的促進因子之一是腫瘤細胞在生長過程中分泌的VEGF ，它的編碼基因位于6P21.3由8個外顯子構(gòu)成，由于 mRNA不同的剪切形式，形成5種不同的VEGF,分別含有121、14S 16S 189 206個氨基酸，其中以VEGF165最重要,在各種細胞中表達占優(yōu)勢,VEGF121 和 VEGF189 在大局部表達VEGF 的組織和細胞中均能檢測到，VEGF145和VEGF206非常少見，其中VEGF206只在人胎肝 cDNA 庫中可以檢測到

32、。 VEGF 通過二硫鍵結(jié)合形成二聚體后才有活性，它的受體為酪氨酸蛋白激酶型膜受體，具有高度特異性。當 VEGF 與受體結(jié)合后，可以刺激血管皮細胞增殖，促進血管形成，并增加血管通透性,這樣腫瘤細胞一方面可以獲得充分的營養(yǎng)而迅速增殖， 另一方面也容易通過血管皮細胞進入血流從而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。 VEGF 主要由腫瘤細胞產(chǎn)生,小局部來自細胞間質(zhì),它是獨立預后指標，與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)無關(guān)，與 ER、PR呈負相關(guān)，高表達者易轉(zhuǎn)移復發(fā)，預后不良，且分泌治療和化療的效果差，建議對VEGF 高表達者聯(lián)合應用抗血管生成治療，如利用 VEGF 單抗阻斷與受體結(jié)合，重組VEGF 與 VEGF競爭受體，將VEGF 與小分

33、子毒性物質(zhì)結(jié)合，利用反義核酸技術(shù)抑制 VEGF 表達等等。七、腫瘤細胞增生標志物目前被廣泛采用的兩種增殖相關(guān)標志物是Ki-67及PA增埴細胞核抗原。PA增殖細胞核抗原 ： 是一種僅在增殖細胞中合成或表達的核多肽， 其表達與細胞周期有關(guān)。主要表達于增殖細胞的 S期、G1期和G2初期。Ki-67與PA一樣，為細胞增殖的一種標記， 在細胞凋亡中S、 G2 、 M 期均有表達， G0 期缺如。 Ki-67增殖指數(shù)上下與許多腫瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移以及預后密切相關(guān)。 Ki-67 與PA 免疫反響性與細胞增生的形態(tài)學特征關(guān)系密切，特別是與有絲分裂數(shù)及腫瘤分級相關(guān)。 在乳腺腫瘤中， 其表達還與其他分化及預后指標相關(guān)， 如與雌孕激素受體表達呈負相關(guān)，而與P53基因異常呈正相關(guān)。在乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、胃癌和一些淋巴瘤及肉瘤，采用 Ki-67 與 PA 免疫組化分析，均顯示有增殖證據(jù)，提