乳酸菌鏡檢方法及顯微鏡使用方法

1、乳酸菌鏡檢方法及顯微鏡使用方法-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1乳酸菌精簡方法及顯微鏡使用方法第一部分：乳酸菌鏡檢可以采用革蘭氏染色方法。第二部分：使用顯微鏡的油鏡進行鏡檢，下而是具體的染色方法和鏡檢方法，請參考。第一部分二乳酸菌革蘭氏染色方法1目的在乳酸菌發(fā)放之前，利用標(biāo)準(zhǔn)的革蘭氏染色法對即將發(fā)放的乳酸菌懸液或乳酸菌樣品進行檢測，觀察乳酸菌乳酸菌在顯微鏡下的形態(tài)。2原理通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后， 在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù) 合物，革蘭氏陽性菌山于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇 脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它 不

2、含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫 隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在墜內(nèi)，使其仍呈紫色：而革蘭氏陰性菌因 其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂 為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因 此 通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性 菌呈紅 色。3實驗用品準(zhǔn)備：滅菌玻片、10-lOOu 1 移液器、lO-lOOu 1 滅菌移液吸頭、lOOul- lOOOul 移 液器、lOOul-lOOOul 移液吸頭、接種環(huán)、酒精燈、打火機、革 蘭氏染色液、吸水 紙、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、計時器4操作：1 涂片：取滅過菌

3、的載玻片于實驗臺上，用移液槍吸取 10ul 待檢樣品滴在載 玻片的 中央，用燒紅冷卻后的接種環(huán)將液滴涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜 過大。2 干燥：將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加 熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標(biāo) 本烤枯而變 形。固定：固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標(biāo)本向上，在酒精燈火焰處 盡快的來回通過 2-3 次，共約 2-3 秒種，并不時以載玻片背面 加熱 觸及皮膚，不覺過燙為宜(不超過 6 (rc)，放置待冷后，進行染 色。初染：在涂片薄膜上滴加草酸銀結(jié)晶紫2 滴，使染色液覆蓋涂片，染色約Imino水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭

4、下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色 為止。媒染：用 100-1000U1 移液槍吸取約 300U1 碘液滴在涂片薄膜上，使染色液 覆蓋涂片染色約 Imino水洗：斜置載玻片，毎練冰龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無 斜置載玻片，脫色：滴加 95%乙醇脫色，至流岀的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時 20-30S,隨即水洗。復(fù)染：在涂片薄膜上滴加沙黃染液2 滴，使染色液覆蓋涂片，染色約 Imirio 10 水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無 色為止。11 干燥、觀察：用吸水紙吸掉水滴，待標(biāo)本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀 察，發(fā)現(xiàn) U 的物后滴一滴浸油在玻片上，用油鏡觀

5、察細菌的形態(tài) 及顏色，紫色的是革蘭 氏陽性菌，紅色的是革蘭氏陰性菌。5清場實驗結(jié)束后，將顯微鏡油鏡上的殘留的香柏油用擦鏡紙輕輕擦去，將載物臺移至最底處， 將燈光調(diào)到最暗并將其關(guān)閉電源，拔下電源插頭，罩上防塵罩第二部分顯微鏡使用方法以XSZ-3G型號的生物顯微鏡為例介紹顯微鏡操作規(guī)程及注意事項，乳酸菌形態(tài)觀察要用油鏡。XSZ-3G生物顯微鏡操作規(guī)程及注意事項1操作規(guī)程1.1安放右手握住鏡臂，左手托住鏡座，使鏡體保持直立。桌而要淸潔、平穩(wěn)，要選擇臨窗或 光線充足的 地方，距離桌邊3 “4厘米處。1. 2清潔檢査顯微鏡是否清潔，鏡身機械部分可用干凈軟布擦拭。透鏡要用擦鏡紙擦拭，如有 膠或粘污，可用少

6、量二屮苯清潔之。1. 3對光鏡筒升至距載物臺2厘米處，低倍鏡對準(zhǔn)通光孔。調(diào)節(jié)光亮度的旋鈕。1.4安裝標(biāo)木將玻片放在載物臺上，注意有蓋玻片的一面一定朝上。用彈簧夾將玻片固定，轉(zhuǎn)動平 臺移動器的旋鈕，使要觀察的材料對準(zhǔn)通光孔中央。1 5調(diào)焦調(diào)焦時，先旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦旋鈕慢慢降低鏡筒，并從側(cè)而仔細觀察，直到物鏡貼近玻片標(biāo)本，然后左眼 自目鏡觀察，左手旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦旋鈕抬升鏡簡，直到看清標(biāo)本物像時停止，再用細調(diào)焦旋鈕回調(diào)淸晰。1 6觀察鏡檢時應(yīng)將標(biāo)本按一左方向移動視野，直至整個標(biāo)本觀察完畢，以便不漏檢，不重復(fù)。低倍鏡觀察：觀察任何標(biāo)本時，都必須先使用低倍鏡，因為苴視野大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定要觀察 的部位。高倍鏡觀

7、察：從低倍鏡轉(zhuǎn)至高倍時，只需略微調(diào)動細調(diào)焦旋鈕，即可使物像淸晰。使用高倍鏡時 切勿使用粗調(diào)焦旋鈕，否則易壓碎蓋玻片并損傷鏡頭。汕鏡的觀察：先用低倍鏡及高倍鏡將被檢物體移至視野中央后，再換油鏡觀察。油鏡觀察前，應(yīng) 將顯微鏡亮度調(diào)整至最亮，光圈完全打開。使用汕鏡時，先在蓋玻片上滴加一滴香柏汕（鏡汕），然后降低鏡簡井從側(cè)而仔細觀察，直到油 鏡浸入香柏汕并貼近玻片標(biāo)本，然后用目鏡觀察，并用細調(diào)焦旋鈕抬升鏡筒，直到看淸標(biāo)本的焦段時停 止井調(diào)節(jié)淸晰。香柏汕滴加要適量。汕鏡使用完畢后一世要用擦鏡紙沾取二甲苯擦去香柏汕，井再用 干的擦鏡紙 擦去多余二甲苯。1. 7結(jié)束操作觀察完畢，移去樣品，扭轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器使鏡頭v字型偏于兩旁，擦抹干凈，將光亮度調(diào)至最暗，再關(guān) 閉電源按鈕，以防止下次開機時瞬間過強電流燒壞光源燈，并套上鏡套o2注意事項2.1光強的調(diào)節(jié)：一般情況下，染色標(biāo)本光線宜強，無色或未染色標(biāo)本光線宜弱：低倍鏡觀察光線 宜弱，高倍鏡觀察光線宜強。2. 2不應(yīng)在高倍鏡下直接調(diào)焦：鏡簡下降時.應(yīng)從側(cè)而觀察鏡筒和標(biāo)本間的間距：要了解物距的臨 界值。2. 3在進行高倍鏡頭的切換的時候，一泄要從低倍到高倍順序，否則容易打壞鏡頭，還 會污染低 倍物鏡。2.