島津SPD-15C 高效液相色譜的使用

1、高效液相色譜的使用島津SPD-15C使用方法使用方法By 孫毅孫毅一.操作準(zhǔn)備二.儀器組成三.操作過(guò)程四.注意事項(xiàng)目錄By 孫毅孫毅1.1流動(dòng)相的配制流動(dòng)相的配制一.操作準(zhǔn)備By 孫毅孫毅用高純度的試劑配制流動(dòng)相，用高純度的試劑配制流動(dòng)相，必要時(shí)照紫外分光光度法進(jìn)行必要時(shí)照紫外分光光度法進(jìn)行溶劑檢查，應(yīng)符合要求；水為溶劑檢查，應(yīng)符合要求；水為新鮮制備的高純水，可用超級(jí)新鮮制備的高純水，可用超級(jí)純水器制得或用重蒸餾水。對(duì)純水器制得或用重蒸餾水。對(duì)規(guī)定規(guī)定pH值的流動(dòng)相，應(yīng)使用精值的流動(dòng)相，應(yīng)使用精密密pH計(jì)進(jìn)行調(diào)節(jié)。配制好的流計(jì)進(jìn)行調(diào)節(jié)。配制好的流動(dòng)相應(yīng)通過(guò)動(dòng)相應(yīng)通過(guò)0.45m適宜的濾適宜的濾膜

2、濾過(guò)，用前脫氣。應(yīng)配制足膜濾過(guò)，用前脫氣。應(yīng)配制足量的流動(dòng)相及時(shí)待用。量的流動(dòng)相及時(shí)待用。一.操作準(zhǔn)備1.2樣品溶液的配制樣品溶液的配制樣品用規(guī)定溶劑配制成供試溶液。供試溶液在注入色樣品用規(guī)定溶劑配制成供試溶液。供試溶液在注入色譜儀前，一般應(yīng)經(jīng)譜儀前，一般應(yīng)經(jīng)0.45m或適宜的濾膜濾過(guò)。必要或適宜的濾膜濾過(guò)。必要時(shí)，在配制供試溶液前，樣品需經(jīng)提取凈化，以免對(duì)時(shí)，在配制供試溶液前，樣品需經(jīng)提取凈化，以免對(duì)色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染。色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染。 By 孫毅孫毅一.操作準(zhǔn)備1.3檢查儀器狀態(tài)檢查儀器狀態(tài)檢查色譜柱是否適用于本次試驗(yàn)，色譜柱進(jìn)出口檢查色譜柱是否適用于本次試驗(yàn)，色譜柱進(jìn)出口位置是否與流動(dòng)相

3、的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流位置是否與流動(dòng)相的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流動(dòng)相能否互溶，流動(dòng)相的動(dòng)相能否互溶，流動(dòng)相的pH值與該色譜柱是否相適值與該色譜柱是否相適應(yīng)，儀器是否完好，儀器的各開(kāi)關(guān)位置是否處于關(guān)斷應(yīng)，儀器是否完好，儀器的各開(kāi)關(guān)位置是否處于關(guān)斷的位置。的位置。By 孫毅孫毅LC-15C液相色液相色譜泵、譜泵、SPD-15C紫外紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器、可見(jiàn)檢測(cè)器、LCsolution 15c色譜工作站。色譜工作站。 儀器組成儀器組成二.儀器組成By 孫毅孫毅3.1接通電源接通電源三.操作過(guò)程將各儀器電源插頭插入插座將各儀器電源插頭插入插座內(nèi)，內(nèi)，按按power鍵鍵打開(kāi)泵和檢打開(kāi)泵和檢測(cè)器電

4、源測(cè)器電源，打開(kāi)泵（該儀器打開(kāi)泵（該儀器除梯度外可用單泵也可同時(shí)除梯度外可用單泵也可同時(shí)用雙泵，用單泵可僅開(kāi)一個(gè)用雙泵，用單泵可僅開(kāi)一個(gè)泵，用雙泵需兩個(gè)泵同時(shí)打泵，用雙泵需兩個(gè)泵同時(shí)打開(kāi)開(kāi)，雙泵操作與單泵操作基，雙泵操作與單泵操作基本一致本一致）。）。By 孫毅孫毅3.2泵的操作泵的操作三.操作過(guò)程打開(kāi)泵和檢測(cè)器電源，儀打開(kāi)泵和檢測(cè)器電源，儀器由紅燈轉(zhuǎn)換為綠燈，更器由紅燈轉(zhuǎn)換為綠燈，更換所需的流動(dòng)相，然后將換所需的流動(dòng)相，然后將排液閥旋鈕逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)180以打開(kāi)排液閥。以打開(kāi)排液閥。 按按“purge”鍵運(yùn)行，開(kāi)鍵運(yùn)行，開(kāi)始沖洗。如果排液閥旋鈕始沖洗。如果排液閥旋鈕旋轉(zhuǎn)的度數(shù)

5、超過(guò)旋轉(zhuǎn)的度數(shù)超過(guò)180，任，任何排出的流動(dòng)相都可能包何排出的流動(dòng)相都可能包含氣泡。這是正?，F(xiàn)象。含氣泡。這是正?，F(xiàn)象。 By 孫毅孫毅3.2泵的操作泵的操作三.操作過(guò)程等綠燈不再閃爍時(shí)代表等綠燈不再閃爍時(shí)代表清清洗完成，以順時(shí)針?lè)较虮M洗完成，以順時(shí)針?lè)较虮M量旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕，關(guān)閉量旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕，關(guān)閉排液閥。按排液閥。按“pump”鍵，鍵，開(kāi)始泵的運(yùn)行。開(kāi)始泵的運(yùn)行。 By 孫毅孫毅3.3工作站的使用工作站的使用三.操作過(guò)程雙擊桌面雙擊桌面Lcsolution 15c】圖標(biāo)，確認(rèn)已經(jīng)開(kāi)啟】圖標(biāo)，確認(rèn)已經(jīng)開(kāi)啟LC系統(tǒng)后，啟動(dòng)【系統(tǒng)后，啟動(dòng)【LC實(shí)時(shí)實(shí)時(shí)分析分析”工作站。啟動(dòng)【工作站。啟動(dòng)【LC實(shí)

6、時(shí)分析】工作站后，確實(shí)時(shí)分析】工作站后，確保分析儀器的所有單元（保分析儀器的所有單元（泵、柱溫箱和檢測(cè)器）都泵、柱溫箱和檢測(cè)器）都已連至系統(tǒng)控制器。確保已連至系統(tǒng)控制器。確保所有單元上都沒(méi)有顯示任所有單元上都沒(méi)有顯示任何錯(cuò)誤消息。何錯(cuò)誤消息。By 孫毅孫毅3.3工作站的使用工作站的使用三.操作過(guò)程設(shè)置系統(tǒng)配置，以便該系統(tǒng)與儀器的實(shí)際配置相匹配。設(shè)置系統(tǒng)配置，以便該系統(tǒng)與儀器的實(shí)際配置相匹配。僅當(dāng)?shù)谝淮螌H當(dāng)?shù)谝淮螌Csolution 15c連接到分析儀器，或儀器連接到分析儀器，或儀器的配置發(fā)生變化時(shí)，才需要下列設(shè)置。如果儀器的配置的配置發(fā)生變化時(shí)，才需要下列設(shè)置。如果儀器的配置沒(méi)有任何變化，

7、點(diǎn)擊沒(méi)有任何變化，點(diǎn)擊“視圖視圖”里的助手欄，點(diǎn)系統(tǒng)配置里的助手欄，點(diǎn)系統(tǒng)配置用單泵或雙泵進(jìn)行運(yùn)行。用單泵或雙泵進(jìn)行運(yùn)行。By 孫毅孫毅3.4儀器參數(shù)設(shè)置儀器參數(shù)設(shè)置三.操作過(guò)程點(diǎn)【文件】項(xiàng)下【新建方法文點(diǎn)【文件】項(xiàng)下【新建方法文件】，單擊件】，單擊“儀器參數(shù)視圖儀器參數(shù)視圖”下【正?！窟x項(xiàng)，可以在其中下【正?！窟x項(xiàng)，可以在其中輸入分析條件，例如輸入分析條件，例如LC停止時(shí)停止時(shí)間、泵間、泵A流速、檢測(cè)器流速、檢測(cè)器A波長(zhǎng)通波長(zhǎng)通道道 等。確保為每一檢測(cè)器設(shè)置等。確保為每一檢測(cè)器設(shè)置了【了【LC停止時(shí)間】【結(jié)束時(shí)間停止時(shí)間】【結(jié)束時(shí)間】。】。 【LC停止時(shí)間】是控制儀停止時(shí)間】是控制儀器的持續(xù)

8、時(shí)間。如果時(shí)間程序器的持續(xù)時(shí)間。如果時(shí)間程序或餾分收集時(shí)間程序都沒(méi)有設(shè)或餾分收集時(shí)間程序都沒(méi)有設(shè)置，則將其保留為置，則將其保留為0.01min。By 孫毅孫毅3.4儀器參數(shù)設(shè)置儀器參數(shù)設(shè)置三.操作過(guò)程如用單泵運(yùn)行，泵【模式】鉤如用單泵運(yùn)行，泵【模式】鉤選選“等濃度洗脫等濃度洗脫”（雙泵運(yùn)行（雙泵運(yùn)行勾選勾選“二元高壓梯度洗脫二元高壓梯度洗脫”），點(diǎn)【高級(jí)】選項(xiàng)卡中，點(diǎn)【高級(jí)】選項(xiàng)卡中“泵泵”選項(xiàng)，設(shè)置泵選項(xiàng)，設(shè)置泵A流速（一般為流速（一般為1.000ml/min）和壓力限制最大）和壓力限制最大值、最小值。如需雙泵（如梯值、最小值。如需雙泵（如梯度洗脫等），點(diǎn)【度洗脫等），點(diǎn)【LC時(shí)間程序時(shí)間程

9、序】設(shè)置梯度洗脫表，單擊】設(shè)置梯度洗脫表，單擊“下下載載”將設(shè)置傳輸?shù)絻x器，使用將設(shè)置傳輸?shù)絻x器，使用新名稱(chēng)保存方法文件。新名稱(chēng)保存方法文件。By 孫毅孫毅3.4.1進(jìn)樣進(jìn)樣設(shè)置設(shè)置三.操作過(guò)程確保顯示【就緒】，且【色譜確保顯示【就緒】，且【色譜圖視圖】中的基線穩(wěn)定后（一圖視圖】中的基線穩(wěn)定后（一般約需般約需1530分鐘）。單擊【分鐘）。單擊【LC實(shí)時(shí)分析】窗口助手欄上的實(shí)時(shí)分析】窗口助手欄上的“單次運(yùn)行單次運(yùn)行”圖標(biāo)，出現(xiàn)圖標(biāo)，出現(xiàn)“單單次運(yùn)行次運(yùn)行”屏幕，設(shè)置樣品名、屏幕，設(shè)置樣品名、樣品樣品ID、數(shù)據(jù)文件、數(shù)據(jù)描述、數(shù)據(jù)文件、數(shù)據(jù)描述、進(jìn)樣體積等，然后單擊【確、進(jìn)樣體積等，然后單擊【確定

10、】。定】。By 孫毅孫毅3.4.2檢測(cè)器調(diào)零檢測(cè)器調(diào)零三.操作過(guò)程檢測(cè)器調(diào)零：點(diǎn)擊檢測(cè)器調(diào)零：點(diǎn)擊“檢測(cè)器檢測(cè)器A零零點(diǎn)點(diǎn)”圖標(biāo)，使檢測(cè)器數(shù)值調(diào)零。圖標(biāo)，使檢測(cè)器數(shù)值調(diào)零。By 孫毅孫毅3.5進(jìn)樣進(jìn)樣三.操作過(guò)程吸取不少于吸取不少于20l的樣品，的樣品，放在進(jìn)樣口，向左打開(kāi)進(jìn)放在進(jìn)樣口，向左打開(kāi)進(jìn)樣閥，將樣品全部打入進(jìn)樣閥，將樣品全部打入進(jìn)樣口，樣口，再再向右打下進(jìn)樣閥向右打下進(jìn)樣閥，系統(tǒng)即自動(dòng)開(kāi)始采集數(shù)，系統(tǒng)即自動(dòng)開(kāi)始采集數(shù)據(jù)。單次分析開(kāi)始，并且據(jù)。單次分析開(kāi)始，并且【LC實(shí)時(shí)分析】窗口中的實(shí)時(shí)分析】窗口中的狀態(tài)從【就緒】變?yōu)椤具\(yùn)狀態(tài)從【就緒】變?yōu)椤具\(yùn)行】。行】。By 孫毅孫毅3.5進(jìn)樣進(jìn)樣

11、三.操作過(guò)程當(dāng)達(dá)到【儀器參數(shù)視圖】中指當(dāng)達(dá)到【儀器參數(shù)視圖】中指定的檢測(cè)器的【結(jié)束時(shí)間】時(shí)定的檢測(cè)器的【結(jié)束時(shí)間】時(shí)，自動(dòng)終止數(shù)據(jù)采集。如設(shè)定，自動(dòng)終止數(shù)據(jù)采集。如設(shè)定的【結(jié)束時(shí)間】要修改，可以的【結(jié)束時(shí)間】要修改，可以單擊【采集】助手欄中的【停單擊【采集】助手欄中的【停止】圖標(biāo)，也可以在【數(shù)據(jù)采止】圖標(biāo)，也可以在【數(shù)據(jù)采集】菜單的【更改分析時(shí)間】集】菜單的【更改分析時(shí)間】項(xiàng)目中，在數(shù)據(jù)采集過(guò)程更改項(xiàng)目中，在數(shù)據(jù)采集過(guò)程更改結(jié)束時(shí)間。一旦開(kāi)始數(shù)據(jù)采集結(jié)束時(shí)間。一旦開(kāi)始數(shù)據(jù)采集，【儀器參數(shù)視圖】設(shè)置變?yōu)?，【儀器參數(shù)視圖】設(shè)置變?yōu)橹蛔x，并且不能在【儀器參數(shù)只讀，并且不能在【儀器參數(shù)視圖】中更改結(jié)束

12、時(shí)間。視圖】中更改結(jié)束時(shí)間。By 孫毅孫毅3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理三.操作過(guò)程方法方法1單擊單擊“Lcsolution 15c”中的中的“再解析再解析”，“LC再再解析解析”開(kāi)始。開(kāi)始。 選擇【文件】菜單中的選擇【文件】菜單中的“選選擇項(xiàng)目文件夾擇項(xiàng)目文件夾”，然后選擇，然后選擇預(yù)測(cè)定的數(shù)據(jù)文件，數(shù)預(yù)測(cè)定的數(shù)據(jù)文件，數(shù)據(jù)文件即打開(kāi)。據(jù)文件即打開(kāi)。 By 孫毅孫毅3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理三.操作過(guò)程單擊助手欄中的【向?qū)А繄D標(biāo)，單擊單擊助手欄中的【向?qū)А繄D標(biāo)，單擊“program”點(diǎn)擊點(diǎn)擊【下一步】，設(shè)置正確的積分參數(shù)?！鞠乱徊健?，設(shè)置正確的積分參數(shù)。 記錄要識(shí)別的峰的保留時(shí)間，單擊【下一步】輸入

13、所需記錄要識(shí)別的峰的保留時(shí)間，單擊【下一步】輸入所需峰的詳細(xì)內(nèi)容，然后單擊【完成】。單擊化合物表右上峰的詳細(xì)內(nèi)容，然后單擊【完成】。單擊化合物表右上角【視圖】按鈕，查看【結(jié)果】。角【視圖】按鈕，查看【結(jié)果】。 單擊【單擊【LC數(shù)據(jù)】助手欄中的【應(yīng)用到方法】圖標(biāo)，出現(xiàn)數(shù)據(jù)】助手欄中的【應(yīng)用到方法】圖標(biāo)，出現(xiàn)屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并單擊【保屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并單擊【保存】。存】。 重復(fù)重復(fù)以上以上操作進(jìn)行下一次測(cè)定，直到檢驗(yàn)結(jié)束。操作進(jìn)行下一次測(cè)定，直到檢驗(yàn)結(jié)束。By 孫毅孫毅3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理三.操作過(guò)程方法方法2除上述辦法分析數(shù)據(jù)外，可除上述辦法分析數(shù)

14、據(jù)外，可以直接找到存儲(chǔ)數(shù)據(jù)文件的以直接找到存儲(chǔ)數(shù)據(jù)文件的文件夾，打開(kāi)文件，單擊文件夾，打開(kāi)文件，單擊【數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)】然后點(diǎn)擊然后點(diǎn)擊【峰表峰表】，在峰表中查看并記錄所需的在峰表中查看并記錄所需的保留時(shí)間，峰高，峰面積等保留時(shí)間，峰高，峰面積等信息。信息。By 孫毅孫毅3.7打印報(bào)告打印報(bào)告三.操作過(guò)程打印報(bào)告：在【打印報(bào)告：在【LC數(shù)據(jù)分析】點(diǎn)擊左下角的【報(bào)告數(shù)據(jù)分析】點(diǎn)擊左下角的【報(bào)告格式】出現(xiàn)格式】出現(xiàn)“操作人操作人”名，選名，選定定“操作人操作人”雙擊。然后點(diǎn)擊左下角【數(shù)據(jù)】，從【雙擊。然后點(diǎn)擊左下角【數(shù)據(jù)】，從【數(shù)據(jù)】中拖動(dòng)【數(shù)據(jù)文件】進(jìn)行打印報(bào)告。數(shù)據(jù)】中拖動(dòng)【數(shù)據(jù)文件】進(jìn)行打印報(bào)告。B

15、y 孫毅孫毅3.8清洗和關(guān)機(jī)清洗和關(guān)機(jī)三.操作過(guò)程分析完畢后，先關(guān)色譜工作站和檢測(cè)器，再用適分析完畢后，先關(guān)色譜工作站和檢測(cè)器，再用適當(dāng)經(jīng)濾過(guò)和脫氣的溶劑清洗色譜系統(tǒng)，一般用先當(dāng)經(jīng)濾過(guò)和脫氣的溶劑清洗色譜系統(tǒng)，一般用先用用2530%甲醇沖洗，然后用純甲醇沖洗，甲醇沖洗，然后用純甲醇沖洗，2530%甲醇一般沖洗甲醇一般沖洗 1530分鐘，純甲醇沖洗不得分鐘，純甲醇沖洗不得少于少于30分鐘，特殊情況應(yīng)延長(zhǎng)沖洗時(shí)間。分鐘，特殊情況應(yīng)延長(zhǎng)沖洗時(shí)間。關(guān)斷電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期，檢品關(guān)斷電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期，檢品，儀器完好狀態(tài)等。，儀器完好狀態(tài)等。By 孫毅孫毅注意事項(xiàng)四.注意事項(xiàng)1

16、. 色譜柱與進(jìn)樣器及其出口端與檢測(cè)器之間應(yīng)為無(wú)死體積連色譜柱與進(jìn)樣器及其出口端與檢測(cè)器之間應(yīng)為無(wú)死體積連接接，以免試樣擴(kuò)散影響分離。以免試樣擴(kuò)散影響分離。2. 新柱或被污染柱用適當(dāng)溶劑沖洗時(shí)，應(yīng)將其出口新柱或被污染柱用適當(dāng)溶劑沖洗時(shí)，應(yīng)將其出口端與檢測(cè)器脫開(kāi)，避免污染。端與檢測(cè)器脫開(kāi)，避免污染。3.壓力表無(wú)壓力顯示或壓力波動(dòng)時(shí)不能進(jìn)行分析，壓力表無(wú)壓力顯示或壓力波動(dòng)時(shí)不能進(jìn)行分析，應(yīng)檢查泵中氣泡是否已排除，各連接處有無(wú)漏液，應(yīng)檢查泵中氣泡是否已排除，各連接處有無(wú)漏液，排除故障后方能進(jìn)行操作。如壓力升高，甚至自動(dòng)排除故障后方能進(jìn)行操作。如壓力升高，甚至自動(dòng)停泵，應(yīng)檢查柱端有無(wú)污染堵塞。停泵，應(yīng)檢

17、查柱端有無(wú)污染堵塞。By 孫毅孫毅注意事項(xiàng)四.注意事項(xiàng)4.發(fā)現(xiàn)記錄基線波動(dòng)，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，首先應(yīng)檢查檢測(cè)器發(fā)現(xiàn)記錄基線波動(dòng)，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，首先應(yīng)檢查檢測(cè)器流通池是否有氣泡或污染，如不是流通池引起，儀器穩(wěn)定后流通池是否有氣泡或污染，如不是流通池引起，儀器穩(wěn)定后方能進(jìn)行操作。方能進(jìn)行操作。5.進(jìn)樣時(shí)，色譜柱應(yīng)用流動(dòng)相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)進(jìn)樣時(shí)，色譜柱應(yīng)用流動(dòng)相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)適用性并不符合規(guī)定，或填充劑已損壞，則應(yīng)更換適用性并不符合規(guī)定，或填充劑已損壞，則應(yīng)更換新的同類(lèi)色譜柱進(jìn)行分析。如果同類(lèi)色譜柱依法操新的同類(lèi)色譜柱進(jìn)行分析。如果同類(lèi)色譜柱依法操作達(dá)不到預(yù)定的分離時(shí)，可更換另一牌號(hào)的同類(lèi)

18、色作達(dá)不到預(yù)定的分離時(shí)，可更換另一牌號(hào)的同類(lèi)色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。By 孫毅孫毅注意事項(xiàng)四.注意事項(xiàng)6.以硅膠作載體的化學(xué)鍵合相填充劑，其穩(wěn)定性受以硅膠作載體的化學(xué)鍵合相填充劑，其穩(wěn)定性受pH值影響值影響很大。所以流動(dòng)相一般很大。所以流動(dòng)相一般pH應(yīng)為應(yīng)為2.57.5。如果使用高。如果使用高pH值流值流動(dòng)相時(shí)，可在泵與進(jìn)樣器之間連接一硅膠短柱，以飽和流動(dòng)動(dòng)相時(shí)，可在泵與進(jìn)樣器之間連接一硅膠短柱，以飽和流動(dòng)相，保護(hù)分析柱，并盡可能縮短在高相，保護(hù)分析柱，并盡可能縮短在高pH值下的使用時(shí)間，用值下的使用時(shí)間，用后立即沖洗。后立即沖洗。7.色譜儀管路系統(tǒng)，從泵、進(jìn)樣器、色譜柱至檢測(cè)器色譜儀管路系統(tǒng)，從泵、進(jìn)樣器、色譜柱至檢測(cè)器流通池，在分