免疫考點知識點學(xué)習(xí)

1、十一章1固相膜免疫分析技術(shù)的概念：以微孔膜為固相載體，包被已知抗原或抗體，加入待測樣本后，經(jīng)微孔膜滲濾作用或毛細(xì)管虹吸作用使樣本中的抗體或抗原與膜上包被的抗原或抗體結(jié)合，再通過膠體金標(biāo)記物或酶標(biāo)記物與之反應(yīng)形成肉眼可見的顯色結(jié)果2膠體金的概念：是由金鹽被還原成原子金后形成的金顆粒懸液。膠體金顆粒由一個基礎(chǔ)金核和包圍在外雙離子構(gòu)成。由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。 膠體金的特性：（1）膠體特性（2）呈色性和光吸收性（3）穩(wěn)定性3免疫層析實驗原理：以硝酸纖維素膜為固相載體，樣品溶液借助毛細(xì)作用在層析條上泳動，同時樣品中的待測物與層析材料上待測物的受

2、體（抗原或抗體）發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng)，層析過程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域（檢測帶），通過檢測標(biāo)記物膠體金顆?；驘晒馑氐?，在短時間內(nèi)（20min)聚集而得到直觀的試驗結(jié)果（顯色） 。包括雙抗體夾心法、競爭法、間接法4免疫滲濾實驗原理：是將抗原或抗體點加在固相載體硝酸纖維素薄膜上，制成抗原或抗體包被的微孔濾膜并貼置于吸水材料上，依次在膜上滴加樣品、免疫膠體金及洗滌液等試劑并與硝酸纖維素膜上的相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)，起到親和層析的濃縮作用，達(dá)到快速檢測的目的?？乖贵w反應(yīng)后，形成大分子膠體金復(fù)合物，從而使陽性結(jié)果在膜上呈現(xiàn)紅色斑點。包括雙抗體夾心法、間接法5斑點酶聯(lián)免疫

3、吸附實驗：樣品中的抗體或抗原與預(yù)先包被在nc膜上的抗原或抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，然后再加入相應(yīng)的酶標(biāo)二抗進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，通過酶催化底物，形成有色的沉淀物，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，根據(jù)染色條帶或斑點的有無或深淺，對抗體或抗原進(jìn)行檢測。6免疫印記原理：是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的技術(shù)，具有分析容量大、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點，是檢測蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布的一種最常用的方法。十二章1免疫組化的概念：是指用標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。 方法：酶免疫組織化學(xué)技術(shù)、熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)、免疫金（

4、銀）組織化學(xué)技術(shù)、親和組織化學(xué)技術(shù)、免疫標(biāo)記電鏡組織化學(xué)技術(shù)2酶免疫組織化學(xué)技術(shù)：直接法、間接法、酶橋法、PAP（過氧化物酶抗過氧化物酶）法、雙橋PAP、APAAP（堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶）3親和素的種類：植物凝集素、生物素、葡萄球菌蛋白A（SPA）等4免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)：酶免疫電鏡技術(shù)、免疫膠體鐵化學(xué)染色法、免疫膠體金染色法5抗原的修復(fù)法：酶消化法、鹽酸水解法、微波法、高壓鍋法、煮沸法十三章1流式細(xì)胞術(shù)的概念：是基于流式細(xì)胞儀的一項快速、精確、高通量針對微粒（細(xì)胞）的特征或功能進(jìn)行多參數(shù)定性、定量分析和分選的新型技術(shù)。 特點：（1）速度快（2）精度高（3）準(zhǔn)確性好（4）多參數(shù)量，可以同時對一個

5、微粒作物理、化學(xué)和生物特性的多參數(shù)測量。2經(jīng)典流式細(xì)胞儀和分選儀的基本結(jié)構(gòu)書：（1）液流系統(tǒng)（2）光學(xué)系統(tǒng)（3）信號檢測及光電轉(zhuǎn)換系統(tǒng)（4)分選系統(tǒng)（5)計算機系統(tǒng)PPt:液流系統(tǒng)、信號檢測、轉(zhuǎn)換及放大系統(tǒng)、計算機分析系統(tǒng)分選儀多了一個：分選系統(tǒng)：熒光激活細(xì)胞分選系統(tǒng)（FACS）3數(shù)據(jù)的顯示與分析： 流式細(xì)胞檢測結(jié)果的縮寫：散射光信號：前向散射光FSC、側(cè)向散射光（垂直散射光）SSC熒光信號：平均熒光強度（MFI）或相對熒光強度（RFI） 異硫氰酸熒光素（FITC）藻紅蛋白（PE） 前向散射光意義：是與細(xì)胞切線方向小角度散射光，其能反映細(xì)胞形狀和體大小。其強度與細(xì)胞體積大小成正比。 側(cè)向散射光

6、意義：激光照射到細(xì)胞內(nèi)容物時，可以產(chǎn)生方向不同和強弱不等的散射光，垂直方向散射光對細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，可反映被檢測細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒信息。細(xì)胞越不規(guī)則，細(xì)胞表面的突起越多，細(xì)胞內(nèi)能夠引起激光散射的細(xì)胞器或者顆粒性物質(zhì)越多，其SSC值就越大。4熒光補償?shù)母拍睿菏侵覆煌臒晒馑赜捎诎l(fā)射光譜重疊，因此在檢測的時候有串色現(xiàn)象，通過減去重疊部分的光，使檢測器檢測到的光能量是真正的某一熒光素產(chǎn)生的光能量。5結(jié)果顯示方法：？單參數(shù)：（單參數(shù)直方圖）橫軸：熒光或散射光，縱軸：細(xì)胞數(shù)量構(gòu)成，用于FSC、SSC和熒光（FL1FLn）等單參數(shù)的數(shù)據(jù)顯示。 雙參數(shù)：（二維點圖、二維登高）兩個獨立參數(shù)

7、與細(xì)胞相對數(shù)之間的關(guān)系，橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)分別代表與細(xì)胞有關(guān)的兩個獨立參數(shù)，平面上每一個點表示具有相應(yīng)坐標(biāo)值的細(xì)胞。雙熒光：CD分子：分區(qū)分為：雙陽、雙陰、x陽y陰、x陰y陽。雙散射光：小細(xì)胞、小顆粒度的細(xì)胞群是淋巴細(xì)胞群，T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞都位于此中細(xì)胞、中顆粒度的細(xì)胞群是單核細(xì)胞群，大細(xì)胞、大顆粒度的細(xì)胞群是中性粒細(xì)胞群。 設(shè)門分析技術(shù)：在某一張選定參數(shù)的直方圖或散點圖上，根據(jù)圖中細(xì)胞群分布特征，選定其中想要分析的細(xì)胞群，從而對該群細(xì)胞進(jìn)行單參數(shù)或多參數(shù)分析。6常用熒光燃料和熒光蛋白：不同通道選不同燃料的搭配原則：流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光素的最大吸收光譜確定該熒光素在流式細(xì)胞儀上由哪種激光器激

8、發(fā)，并根據(jù)最大發(fā)射波長確定其接收通道。？十五章1免疫細(xì)胞的分離方法和功能檢測：(看一下） 怎么標(biāo)記特定細(xì)胞：T細(xì)胞：CD3+CD4+CD8-輔助性細(xì)胞ThCD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞Tc or CTLCD4+CD25+ Foxp3+調(diào)節(jié)性細(xì)胞Tr or Treg B細(xì)胞：CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-) NK細(xì)胞：至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多種抗原。目前多以CD3-、CD16+、CD56+ 作為NK細(xì)胞的典型標(biāo)志。 十六章1

9、細(xì)胞因子測定方法：4種：酶聯(lián)免疫吸附試驗、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗、流式細(xì)胞術(shù)酶聯(lián)免疫斑點實驗特性1 ：免疫學(xué)測定法檢測的是細(xì)胞因子或黏附分子的蛋白含量，具有特異性高、 操作簡便、重復(fù)性好，實驗結(jié)果穩(wěn)定，測定影響因素較少等特點。 特性2：細(xì)胞因子作用特點：低分子量的多肽或糖蛋白，大部分為單體，半衰期短。具有高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡(luò)性、協(xié)同性和拮抗性。十七章1冷球蛋白的概念：又稱冷免疫球蛋白，是血清中一種病理性蛋白質(zhì)。該蛋白在04°發(fā)生沉淀，420°凍膠狀或沉淀，37°溶解。今天講的？二十二章1超敏反應(yīng)檢測方法：1型：體內(nèi)：皮膚實驗、激發(fā)試驗 體外：血清總IgE檢測、

10、特異性IgE檢測、IgG4檢測、細(xì)胞脫顆粒測定 2型：抗血細(xì)胞抗體檢測、自身抗體檢測、抗球蛋白試驗即Coombs試驗。 3型：免疫復(fù)合物 4型：皮膚實驗二十四章1免疫增殖病的損傷機制：（1） 漿細(xì)胞異常增殖（2） 正常體液免疫抑制（3） 異常免疫球蛋白增殖所造成的病理損傷（4） 溶骨性病變2常見免疫球蛋白增多?。?、 多發(fā)性骨髓瘤2、 原發(fā)性巨球蛋白血癥3、 重鏈病4、 輕鏈?。貉宓鞍纂娪編缀鯚oM帶，但尿蛋白電泳顯示M帶，位于區(qū)間5、 良性單克隆免疫球蛋白病6、 淀粉樣變性3：M蛋白的概念：一類免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（輕鏈或重鏈）的異常增多，但多無免疫活性。形式：完整Ig (IgG, I

11、gA, IgM) 輕鏈（鏈, 鏈) 重鏈（鏈，鏈，鏈）書上：是漿細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞單克隆大量增殖產(chǎn)生的一種異常免疫球蛋白，其氨基酸組成及排列順序十分均一，空間構(gòu)象、電泳特征也完全相同，本質(zhì)為免疫球蛋白或其片段（重鏈、輕鏈等）。它產(chǎn)生于單一克隆，又常出現(xiàn)于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤病人的血或尿中，故稱M蛋白。4：本周蛋白概念： 當(dāng)輕鏈合成超過重鏈時，輕鏈游離于血清中，由于分子量較小，容易通過腎小球從尿中排出，而在尿中檢出。（輕鏈?。?檢測方法：1血清區(qū)帶電泳 2免疫電泳3免疫固定電泳4血清免疫球蛋白定量6異常免疫球蛋白檢測的應(yīng)用原則： 一般采用兩種以上的方法互相驗證。初篩試驗：血清區(qū)帶

12、電泳分析、免疫球蛋白定量檢測或尿本-周蛋白定性檢測；對于陽性者要作定量分析及免疫球蛋白分類鑒定：免疫電泳或免疫固定電泳、免疫球蛋白亞型定量和血清及尿中輕鏈定量及比值計算；鑒別良性還是惡性增生：良性者輕鏈與重鏈增高比為1：1,惡性者輕鏈與重鏈比值明顯增高改變；臨床診斷還要結(jié)合相關(guān)實驗室資料：骨髓檢查、影像學(xué)及病理學(xué)結(jié)果等綜合考慮做出正確診斷。1抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理：（1） 抗原抗體結(jié)合力：靜電引力、范德華引力、氫鍵、疏水作用力。（2） 抗原抗體結(jié)合力的親和力：抗體單價Fab片段與單價抗原表位的結(jié)合能力（3） 親和力：多價抗體與抗原分子之間的結(jié)合能力背：2抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點：（1） 特異性：

13、交叉反應(yīng)：若兩種不同抗原分子表面的部分抗原表位相同或類似，則可與 與彼此相應(yīng)的多克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。（2） 可逆性：抗原抗體是分子表面的非共價鍵結(jié)合，形成的復(fù)合物不穩(wěn)定，在一定條件下可以解離為游離抗原和抗體。這種結(jié)合特性稱為可逆性。（3） 比例性：前帶：抗體過剩、等價帶：比例合適的范圍、后代：抗原過剩（4） 階段性：特異結(jié)合階段（肉眼不可見，數(shù)秒數(shù)分鐘內(nèi)完成）反應(yīng)可見階段（凝集和沉淀現(xiàn)象）3影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素（1） 本身因素：抗原：理化特性、表位數(shù)目 抗體：來源、特異性和親和力 抗原抗體的比例：影響最大（二）反應(yīng)基質(zhì)因素：干擾反應(yīng)但與分析物本身無關(guān)的非特異性2因素：蛋白、鹽、補體、抗

14、免疫球蛋白抗體、藥物等（三）實驗環(huán)境因素：電解質(zhì)：抗原等電點：PH35，抗體等電點：PH56 酸堿度：反應(yīng)一般在PH68進(jìn)行 溫度：最常用室溫，其次43°和28°一定溫度范圍，速度隨升溫加快，但過高反應(yīng)物失活。4抗血清保存：短期4°保存、冰凍5年，-80°，避免反復(fù)凍融，真空保存更久。5McAb單克隆抗體制備：雜交瘤技術(shù)：在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞（有HGPRT但無組織培養(yǎng)的增值能力）與具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞(缺乏HGPRT)融合為B細(xì)胞雜交瘤。 運用HAT培養(yǎng)基：H黃嘌呤、A氨基喋呤、T胸腺嘧啶核苷 細(xì)胞DNA合

15、成途徑：主要途徑：糖和氨基酸作為原料，葉酸作為要輔酶。 應(yīng)急（彌補）途徑：在H和T存在的情況下，HGPRT、TK 催化合成 過程：融合、選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)、抗原特異性雜交瘤細(xì)胞篩選抗體雜交瘤細(xì)胞陽性保存：液氮：慢凍-70°，快融：34-40°，定期檢查染色體數(shù)和抗體產(chǎn)生能力背6基因工程抗體：又稱重組抗體，是指利用重組DNA及蛋白質(zhì)工程技術(shù)對編碼抗體按不同需要進(jìn)行加工改造和重新裝配，經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)受體細(xì)胞表達(dá)的抗體分子。7免疫凝集實驗抗原稱為：凝集原，抗體稱為：凝集素8玻片凝集試驗：定性：1菌種診斷或分型鑒定2檢測病人血清中的抗體3血型ABO血型鑒定9試管凝集試驗：（半定量）定量抗原

16、與倍比稀釋受檢血清混合反應(yīng)。 效價：產(chǎn)生明顯凝集顯現(xiàn)的血清最高稀釋度 肥達(dá)實驗、外-斐實驗、交叉配血實驗10間接免疫凝集抑制實驗：檢測標(biāo)本中是否存在與和致敏抗原相同的抗原， 先將標(biāo)本和抗體試劑結(jié)合，再加入致敏載體抗原，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表示無相同抗原（陰性）11間接Coombs實驗：用于檢測游離在血清中的不完全抗體。將受檢者與正常人O型紅細(xì)胞混合，如受檢者血清中有不完全抗體，則可吸附于紅細(xì)胞上，形成致敏紅細(xì)胞，再加入抗人球蛋白抗體，與致敏紅細(xì)胞表面的不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集。12自身紅細(xì)胞凝集試驗：用于檢測全血中的抗體或抗原，運用抗人O型紅細(xì)胞單克隆抗體與另一種特異性抗體或抗原連接形成雙功能抗

17、體，該抗體能和任意血型紅細(xì)胞結(jié)合，不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，可以利用全血的紅細(xì)胞檢測相應(yīng)抗原或抗體。13透射免疫比濁實驗：指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在一定緩沖液中結(jié)合形成免疫復(fù)合物，使反應(yīng)濁度發(fā)生改變，在一定波長的光線通過反應(yīng)液時，被其中免疫復(fù)合物反射、吸收而引起透射光減少，可用吸光度表示，吸光度與免疫復(fù)合物含量成正比，在保持抗體過量條件下，吸光度與抗原量成正比。14散射免疫比濁實驗：抗原抗體在液相中特異性結(jié)合后產(chǎn)生一定大小的免疫復(fù)合物，一定波長的光通過通過反應(yīng)液遇到免疫復(fù)合物發(fā)生散射現(xiàn)象，光的強度與免疫復(fù)合物含量和散射夾角成正比，與入射光波長成反比。保持散射角度和波長一定，光強與免疫復(fù)合物含量成正比，保持

18、抗體過量，免疫復(fù)合物與抗原含量成正比。15單向免疫擴散實驗：是先將一定量的抗體混于瓊脂凝膠中，使待測的抗原溶液在瓊脂內(nèi)從局部向周圍自由擴散，在一定區(qū)域內(nèi)形成可見的沉淀環(huán)。16雙向免疫擴散實驗：是將抗原和抗體加在同意瓊脂板對應(yīng)孔中，各自向?qū)Ψ綌U散，在濃度比例恰當(dāng)處形成沉淀線，觀察沉淀線的位置、形狀及對比關(guān)系，可對抗原或抗體進(jìn)行定性分析。（測定抗體的效價：出現(xiàn)沉淀線最高的抗體稀釋度）17免疫電泳技術(shù)：是電泳分析與免疫沉淀實驗相結(jié)合的產(chǎn)物，是直流電場作用下的凝膠擴散實驗，是將抗原-抗體反應(yīng)的高特異性與電泳技術(shù)的高分辨率及快速、微量等特性相結(jié)合的一種免疫化學(xué)技術(shù)。1加快沉淀反應(yīng)速度2抗原抗體擴散方向固定集中，提高靈敏度3可以分離不同蛋白后再與抗體反應(yīng)。 對流免疫電泳：將雙向免疫擴散和電泳相結(jié)合在直流電場中定向加速的免疫擴散技術(shù)。抗原等電點較低，帶負(fù)電向正極移動，抗體等電點偏高，向負(fù)極移動。（濃度最適比出形成沉淀線）對流只是對部分抗體而言18免疫電泳：亦稱免疫區(qū)帶電泳-免疫雙擴散實驗，是區(qū)帶電泳與雙向免