實驗一實驗室環(huán)境和人體表面微生物檢查常用器皿的包扎

1、微生物學實驗微生物學實驗Lab work on Microbiology 實驗室規(guī)章制度及實驗基本要求1.遵守實驗室規(guī)則，愛護實驗儀器設備。2.實驗前要寫預習報告，了解目的、原理和基本方法，做到心中有數(shù)、思路清晰。3.進入實驗室要簽名，指導老師檢查預習報告。4.實驗操作要細心謹慎，嚴格遵守操作規(guī)則，認真進行觀察，做好實驗記錄。5.以實事求是的態(tài)度認真完成實驗報告，并交給指導教師批閱。6.隨時注意實驗臺面的清潔，做完實驗要清理好實驗臺面，衛(wèi)生值日生要做好當日的清潔衛(wèi)生。7. 指導老師檢查實驗記錄和實驗任務，檢查通過簽字后方可離開實驗室，走時注意關閉燈、電、火、窗。實驗考核1. 微生物學實驗成績包

2、括實驗過程表現(xiàn)成績、實驗報告成績2. 實驗過程表現(xiàn)成績包括：實驗操作是否正確規(guī)范、學習態(tài)度是否認真、實驗結果如何是否符合邏輯、清掃值日等方面。成績分為 ：良好、一般、差三級，相當于百分制 85、75、55。3. 實驗報告成績包括：實驗報告的格式是否正確、原理是否論述清楚，實驗結果分析討論是否正確，報告字跡是否清楚等方面，實驗報告給定成績分為：A+、 A、 A-、 B+、B、B-、C+、C、C- 九級，相當于百份制的 95、90、85、80、75、70、65、60、55。微生物實驗進程表實驗一 實驗室環(huán)境、人體表面微生物檢查及常用器皿包扎實驗二 普通光學顯微鏡的使用及細菌形態(tài)觀察實驗三 培養(yǎng)基的

3、制備、消毒與滅菌實驗四 細菌簡單染色和革蘭氏染色法實驗五 神農(nóng)架土壤微生物分離純化實驗六 放線菌、霉菌形態(tài)觀察實驗七 平板菌落計數(shù)與接種實驗八 酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞鑒別、微生物大小測定 和顯微鏡直接計數(shù)實驗九 環(huán)境因素對微生物生長的影響實驗十 微生物生理生化實驗實驗十一產(chǎn)堿性蛋白酶菌株的篩選 （綜合實驗）v 微生物實驗室常用器具和儀器v 空玻璃器皿的包裝v 玻璃器皿的清洗v 證明實驗室環(huán)境與人體表面存在微生物v 實驗任務v 思考題微生物實驗一試管（test tube）一、常用器具和儀器1. Control ： Negative 2. S. aureus ： Acid 3. P. vulga

4、ris ： Acid, Gas 4. P. aeruginosa ：Negative 5. E. coli ： Acid, Gas Control Acid + + + + Gas - - + +德漢氏小管（Durham tube）玻璃吸管（glass pipette）吸器微量加樣器（micropipette）吸嘴（tip）培養(yǎng)皿（petri dish）三角瓶（erlenmeyer flask）接種鏟（inoculating shovel）玻璃涂布器（glass spreader）接種環(huán)（inoculating loop）接種鉤（ inoculating hook）接種針（ inoculati

5、ng needle）小塑料離心管（Eppendorf tube）滴瓶（dropper bottle）雙層瓶（double bottle）酒精燈(alcohol burner）煤氣噴頭（coal gas sprinkler head）試劑瓶量筒燒杯溫度計漏斗石棉網(wǎng)烘箱臥式滅菌鍋手提式滅菌鍋無菌操作臺/室過濾除菌設備厭氧操作設備小型發(fā)酵罐離心機培養(yǎng)箱/搖床冷凍干燥機蒸餾水器超聲波清洗儀磁力攪拌器方法一：用舊報紙密密包緊，一般以5-8套培養(yǎng)皿作一包。包好后用干熱或濕熱滅菌（見無菌操作技術）。方法二：將培養(yǎng)皿放入金屬（不銹鋼）筒內，干熱滅菌。金屬筒配有蓋子，內部還有一個可以放培養(yǎng)皿的帶底框架?？蚣芸梢?/p>

6、從筒內提出，以便裝取培養(yǎng)皿。1、培養(yǎng)皿的包裝二、玻璃器皿的包裝包好的培養(yǎng)皿塑料培養(yǎng)皿架金屬筒和內部的框架2、吸管的包裝 準備好干燥的吸管，在粗頭端塞入一小段棉花，以免使用時將雜菌吹入或不慎將微生物吸出。 將吸管尖端斜放在舊報紙的近左端，與報紙成45角，左端多余的一段覆折在尖頭上，再將整根吸管卷入報紙，右端多余的報紙打個小結。 包好的吸管再用一張大報紙包好，干熱滅菌。或一起裝入專用吸管筒進行滅菌。 如果一次可以用完，也可以將吸管直接裝入筒內。尖端向內，使用時將筒平放在桌面上，手持粗端抽出。3、試管和三角瓶的包裝 試管管口和三角瓶瓶口塞以棉花塞或泡膜塑料塞，然后在外面用兩層報紙包好，并用細線扎緊。

7、若用鋁箔更好，可以不用線扎。進行干熱或濕熱滅菌。4、棉塞的制作： 棉塞的作用主要是防止雜菌污染和保證通氣良好，所以好的棉塞應該形狀、大小和松緊與試管口或三角瓶口完全適合。 加塞時，棉塞長度的1/3在管口（瓶口）外，2/3在內。 一般用纖維長的棉花做塞子，不用脫脂棉，因為脫脂棉易吸水變濕，造成污染。 此外，液體培養(yǎng)中還經(jīng)常用到通氣塞，即8層紗布重疊而成，或在兩層紗布間均勻鋪一層棉花作成。制做棉塞三、玻璃器皿的清洗新玻璃器皿：用 2 %鹽酸浸泡數(shù)小時后用自來水沖洗干凈；使用過的玻璃器皿：試管、培養(yǎng)皿、三角瓶等：用瓶刷沾去污粉等洗滌劑刷洗，再用自來水沖洗干凈；裝有固體培養(yǎng)基的器皿應先將其刮去，然后洗

8、滌；玻璃吸管：使用后投入有自來水的大量筒或標本缸內，以免干燥后不易清洗，再集中用自來水沖洗。載玻片和蓋玻片：滴加過香柏油的玻片要先用軟紙沾二甲苯擦去油，在肥皂水中煮沸5-10 min，用軟布或脫脂棉擦拭后用自來水沖洗。然后在稀洗液中浸泡2 h，再用自來水和蒸餾水沖洗晾干后浸于95 %乙醇中備用。注意： 帶菌的器皿在洗滌前用 2 %煤酚皂溶液或 0.25 %新潔爾滅溶液等消毒液內浸泡 24 h或煮沸 30 min，再洗滌； 帶病原菌的培養(yǎng)物先進行高壓蒸滅菌，然后倒去培養(yǎng)物，再洗滌。四、證明實驗室環(huán)境與人體表面存在微生物 基本原理： 平板培養(yǎng)基含有微生物生長所需要的營養(yǎng)成分，當取自不同來源的樣品接

9、種于培養(yǎng)基上，在 2837 溫度下培養(yǎng)，13 天內每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細胞群體的集落，稱為菌落。每一種微生物所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)基來檢查環(huán)境中微生物的數(shù)量和類型。1、培養(yǎng)皿做記號 任何一個實驗，在動手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號，培養(yǎng)皿的記號一般在皿底上。用記號筆寫上班級、姓名、日期，本次實驗還要寫上樣品來源，字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當中，以免影響觀察。2、接種 （每人接種2只平皿） 用棉簽接種實驗室空氣、臺面及手指（洗手前和洗手后）、頭發(fā)、咳嗽、鼻腔等。五、實驗任務 每人： 包扎4個平皿、1只吸管； 做2個試管塞、做1個三角瓶