實驗七蛙類離體心臟灌流實驗

1、實驗七蛙類離體心臟灌流目的要求:1. 學(xué)習(xí)掌握離體蛙心灌流法；2. 觀察Na+、K+、Ca+及腎上腺素、乙酰膽堿等對離體心臟活動的影響?；驹?心肌具有自動節(jié)律性收縮活動的特性，可用人工灌流的方法研究心臟活動的規(guī)律及其特點，還可通過改變灌流液的成分或加入某些藥物來觀察其對心臟活動的影響。三. 動物、器材和試劑:1.動物：蟾蜍2.器材:常有手術(shù)器械、蛙心夾、蛙心插管、張力換能器、滑輪、蚌盤、滴管、燒杯。3.試劑：任氏液、5% NaCl溶液、2% CaCI2 溶液、1% KCl溶液、1:100000腎上腺素溶液、1:100000乙酰膽堿溶液、300u/ml肝素溶液。四. 方法與步驟:1. 雙毀髓

2、，將蟾蜍固定于蠟盤；2. 暴露心臟，分離心臟周圍的大血管。在左主動脈下方穿一線，距動脈圓錐23mm 處結(jié)扎。再從左、右兩主動脈下方穿一線，打一活結(jié)備用。在前、后腔靜脈下穿一線，結(jié)扎，保留靜脈竇。用眼科剪在動脈圓錐前端，沿向心方向剪一斜口，然后將 盛有少量任氏液-肝素溶液的蛙心插管由此開口處插入動脈圓錐。當(dāng)插管尖端到達(dá)動脈圓錐基部時，應(yīng)稍稍后退，使尖端向動脈圓錐的背部后方及心尖方向推進(jìn)，經(jīng) 主動脈瓣插入心室腔內(nèi)（可用另一只手輕輕捏住心室，感覺插入位置，不可插得過 深，以免心壁堵住插管尖端）。3. 用滴管吸去套管中的血液，更換新的任氏液。提起打活結(jié)的備用線，將左右主動脈連同插入的插管扎緊，再將連線

3、固定于插管的小鉤上。剪斷結(jié)扎線以外的血管及所有牽連的組織，將心臟離體。用任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，使灌流液不再有血液，至心室發(fā)白。加入一定高度的任氏液，標(biāo)記。4. 用蛙心夾夾住心室尖，接滑輪，固定于張力感受器。5. 連接儀器，調(diào)整初長度，開始實驗。在任氏液中加入幾滴5%NaCl溶液，觀察曲線 變化，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即吸去灌洗液，用任氏液反復(fù)沖洗，至曲線恢復(fù)正常。加任氏液至標(biāo)記高度。同法做CaCl2、KCl、腎上腺素、乙酰膽堿，記錄。五. 注意事項：1. 插入時應(yīng)注意方向，不能用力過大，也不可強(qiáng)硬插入；2. 插管時要防止凝血，需互相配合；3. 扎插管時應(yīng)扎緊，防止實驗時滑出；4. 液面咼

4、度應(yīng)保持一致；5. 加藥時應(yīng)有刖后對照；6. KCI、乙酰膽堿的影響較劇烈，應(yīng)注意快速清除。六. 結(jié)果與分析:1 .表格:實驗項目心率（PPM）振幅（mV）基線其它Na+開始331.25給藥330.91上移0.05mVCa2+開始330.95給藥301.40上移0.15mV心率變化不明顯K+開始331.05給藥280.40上移0.05mV腎上 腺素開始330.95給藥481.40下沉0.15mV藥品可能過量乙酰 膽堿開始401.30給藥200.30不明顯用藥后不久停跳2.波形圖3m15:18:11.9101.5ennccirhlini n0.0iiiiiiiimiiniiq刪I! M恤州惻曬艸

5、刪呷刖呷醐刪i卿UkHNfflWHil皿佃冊冊刪11|船卩涮川川pi I曲mu iTilivriTiTiPriiTiTiri'iii-0.5-1.01 1 1 !1 3:203:4014:004:204:405:005:20Na+增加不影響心率，但使振幅下降，收縮減弱3m)v nv1le nncucc04-10-26 15:18:11.910Ca2+增加不影響心率，但使振幅增大，收縮加強(qiáng)x)v nV dr3m04-10-26 15:18:11.9101.51.0ennanc5 o a a12:0012:20|12:4013:00K+增大時心率減慢，振幅下降13:2013:403m04-

6、10-26 15:18:11.9101_enncuccmilIIINII川lllll皿|皿叭II腳16:4017:3018:2019:10腎上腺素增加使頻率加快，振幅變大)v Mle nn an c3m0.000.5川川 Illi IIIU1 lill llllllllliiiiiiiii一04-10-26 15:18:11.910 仁廠22:3023:2024:10乙酰膽堿增加使心率下降，振幅急劇下降七. 思考題：1. 此實驗說明心肌有哪些生理特性？答：興奮性、傳導(dǎo)性、自律性、收縮性。2. 以本實驗為例說明內(nèi)環(huán)境相對恒定的重要意義。答：細(xì)胞外液是機(jī)體中細(xì)胞所處的內(nèi)環(huán)境，細(xì)胞外液內(nèi)含較多的Na

7、+、CI+、O2、C6H12O6等，供細(xì)胞物質(zhì)交換。內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)是細(xì)胞維持正常生理功能的必要條件，也是機(jī)體維持正常生理功能的必要條件，也是機(jī)體維持正常生命活動的必要條件。 以本實驗為例，當(dāng) C2+增加時，心肌動作電位平臺期Ca2+內(nèi)流增加，導(dǎo)致心肌收縮能力增加，每搏做功增加。也注意到，離子濃度變化會導(dǎo)致滲透壓的變化，影響 細(xì)胞的生理功能。3. 各種離子和藥物對心搏有何影響，為什么？ 答：Na+ : Na+的主要作用是維持細(xì)胞內(nèi)外液的滲透壓平衡。只有當(dāng)細(xì)胞外Na+濃度發(fā)生非常明顯的變化時，才會影響心肌活動。細(xì)胞外Na+增加時，通過Na+Ca+ 交換作用，促使心臟細(xì)胞內(nèi)的Ca2+外流，從而減弱興奮

8、耦聯(lián)作用，使心肌收縮減弱；另外，細(xì)胞外液 Na+增加時，心肌細(xì)胞去極化速度和幅度增高，傳導(dǎo)性升高。Ca2+： Ca2+直接參與心肌興奮收縮耦聯(lián)作用，血 Ca2+升高時，Ca2+內(nèi)流增 多，興奮收縮耦聯(lián)作用增強(qiáng)，心肌收縮性增強(qiáng)；另外，細(xì)胞外Ca2+升高時，使心肌細(xì)胞的閾電位水平上移，因而心率減慢。K+ : K+升高，因為K+和Ca2+存在競爭性抑制關(guān)系，可使Ca2+內(nèi)流減少，因而心肌興奮收縮耦聯(lián)作用減弱，心肌收縮性減弱；另外，細(xì)胞外K+升高時，心肌細(xì)胞的靜息電位變小，解決閾電位，因此興奮性升高，心率加快，但傳導(dǎo)減慢， 甚至阻滯。但當(dāng)靜息電位過小時，Na+通道失活，則興奮性反而降低或喪失，心率減慢。腎上腺素：能與心肌細(xì)胞膜上B受體結(jié)合，產(chǎn)生正性變力、變時和變傳導(dǎo)效 應(yīng)。a. 加強(qiáng)自律細(xì)胞4期的跨膜內(nèi)向電流If,使自律性增高；b. 加強(qiáng)和加速慢反應(yīng)細(xì)胞 0期Ca2+內(nèi)流，使動作電位上升幅度和速度增加，房室交界興奮傳導(dǎo)速度加速；c. 使復(fù)極相K+外流增加，復(fù)極相縮短，不應(yīng)期縮短。提高肌膜和肌漿網(wǎng)對 Ca2+ 的通透性，增強(qiáng)心