液質(zhì)使用操作規(guī)程

1、液質(zhì)聯(lián)用儀操作規(guī)程CG-YF1358-20101操作前檢查1.1檢查氮?dú)夂吐葰獾某隹趬毫?，壓力分別為 0.50.6MPa和 0.10.2MPa1.2檢查洗針溶液和流動相1.3流動相須現(xiàn)配并超聲，緩沖鹽溶液過0.22 曲散孔濾膜（或者使用色譜純的鹽溶液和酸溶液）1.4如使用溶融石英進(jìn)樣管，操作前應(yīng)檢查石英管是否拉長，確保其未超出ESI探針尖端。1.5檢查系統(tǒng)真空度，電離真空計(jì)讀數(shù)（分析儀區(qū)域）應(yīng)小于 5x 10-6Torr。1.6檢查廢液液位，及時清空廢液。2操作步驟及注意事項(xiàng)2.1開機(jī)2.1.1打開 UPS電源2.1.2打開質(zhì)譜電源，即打開質(zhì)譜主電源開關(guān)（ Main Power Switch

2、）至 On （/）位置；打開 真空開關(guān)（VacuumSwitch）在 Operational 狀態(tài)；用密封墊或者放電針堵上離子傳輸毛細(xì)管； 真空開關(guān)開啟約 10小時后，打開電子開關(guān)Electronics Service Switch ）在 Operational 狀態(tài)；2.1.3打開計(jì)算機(jī)（此時液相和質(zhì)譜內(nèi)置的CPU會通過網(wǎng)線與電腦主機(jī)建立通訊聯(lián)系，這個時間大約要 12分鐘）2.2雙擊 Quantum tune 圖標(biāo)，進(jìn)入質(zhì)譜界面，點(diǎn)擊 Quantum Tune Master 界面上恒 圖 標(biāo)，查看質(zhì)譜狀態(tài)，確認(rèn) ForeFore PumpPump PressurePressure 1.01.

3、51.01.5 mTorr,mTorr, Ion Gauge Pressure 小于 6e-6Torr。2.3打開自動進(jìn)樣管理器和液相泵的電源2.4化合物 ESI/MS/MS 質(zhì)譜條件優(yōu)化建立2.4.1.雙擊桌面圖標(biāo)，打開 Quantum Tune Master 界面；2.4.2.在 Tune Master 中界面上，選擇菜單Workspace，選擇 Compound OptimizationWorkspace 按鈕，顯示 Compound Optimization 工作界面；2.4.3.設(shè)置優(yōu)化參數(shù)：A. 選擇 Optimization Modes （優(yōu)化模式）：MS Only 按鈕；B.

4、在 Optimization Mass 列表中，輸入母離子質(zhì)量數(shù)；C. 在優(yōu)化參數(shù)列表中，選擇（）優(yōu)化的參數(shù)（Spray Voltage, Sheath gas pressure Aux gaspressure, Tube lens offset, Skimmer offset）;D. 單擊 Start按鈕，開始優(yōu)化；優(yōu)化結(jié)束后，選擇 Accept按鈕；E. 選擇 Optimization Modes （優(yōu)化模式）:MS+MS/MS 按鈕；F. 在 Optimization Mass 列表 Num product 列中，輸入子離子個數(shù) （18）;G. 在優(yōu)化參數(shù)列表中，選擇（）優(yōu)化的參數(shù)（Co

5、llision energy）;H.單擊 Start按鈕， 開始優(yōu)化；優(yōu)化結(jié)束后，選擇 Accept 按鈕;I. 參數(shù)優(yōu)化完成，保存質(zhì)譜方法：選擇 Save tune as 按鈕，選擇保存位置，輸入文件名稱，保存質(zhì)譜方法（.TSQTune文件）；J. 單擊定義掃描模式 Define scan 快捷圖標(biāo)，在掃描模式區(qū)單擊鼠標(biāo)右鍵，選擇 Copy scanevento2.5化合物 LC/MS/MS 方法建立2.5.1.雙擊桌面上 LC Quan 快捷圖標(biāo)，點(diǎn)擊 Creat a New Workbook ,輸入相應(yīng) Study Name （研 究課題的名稱等）及 Workbook name （實(shí)驗(yàn)的

6、名稱和日期），繼續(xù)點(diǎn)擊 next,選擇同一文件夾 里已存在的workbook，即導(dǎo)入該項(xiàng)目的方法 （首次編輯方法時不選擇該項(xiàng)）。繼續(xù)點(diǎn)擊 Next, 進(jìn)入 LCquan 主界面2.5.2.在 LCquan 主頁上，點(diǎn)擊 Instrument Setup按鈕， 建立 LC/MS/MS 方法；2.5.2.1.設(shè)置液相色譜部分參數(shù)：A. Surveyor自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)置：1）點(diǎn)擊 Instrument Setup窗口中的 Surveyor AS 圖標(biāo)；2）輸入 Wash Volume （如 400 卬,l） Flush Volume （如 400 卬;l）Injection Volume :進(jìn)樣量

7、，若定量環(huán)為 25 u L, Partial Loop 部分進(jìn)樣一般設(shè)置為 10 u L （即 小于定量環(huán)體積的 1/2）,（建議使用 Partial Loop部分進(jìn)樣）；若需 Full Loop滿環(huán)進(jìn)樣，則設(shè) 置為 25 u LNeedle Height from bottom : 2.0mmSyringe Speed （u L/s）: 8.0Flush Volume :如 400 u LFlush/Wash Source: BottleWash Volume :如 400 u LTray Temperature： 10 C 左右（視樣品性質(zhì)而定）Column Oven Control :

8、35 C左右（視樣品性質(zhì)而定）B. Surveyor液相泵的參數(shù)設(shè)置：1）點(diǎn)擊 Instrument Setup窗 口中 Surveyor pump 圖標(biāo)；2）輸入 A, B , C, D流動相名稱，Column Description（色譜柱標(biāo)注）；3）設(shè)置流動相條件（流動相比例，流速等）；點(diǎn)擊 Pump General,輸入 A、B、C、D 各相代表流動泵中的流動相溶液的名稱，最大柱壓設(shè)定為 400.0Bar;點(diǎn)擊 Gradient Program ,設(shè)定流動相梯度，可以使用等度洗脫或梯度洗脫。2.5.2.2.設(shè)置質(zhì)譜部分（TSQ Quantum）參數(shù)：點(diǎn)擊 Instrument Setu

9、p窗口中的 TSQ Quantum 圖標(biāo)；1）圖中第一欄 Run setting是設(shè)定樣品的運(yùn)行時間 （ MSAcquireTime ） 是否使用分段掃描（Segments）等MS Acquire Time :樣品的運(yùn)行時間Segments：若被測化合物較多時，可設(shè)置此項(xiàng)Scan Events：設(shè)定掃描事件Tune Method :即在 Quantum Tune軟件下優(yōu)化的目標(biāo)化合物的質(zhì)譜條件Scan Events 1:對于定量分析來說我們經(jīng)常使用的是SRM （選擇反應(yīng)監(jiān)測），需要設(shè)定母離子和子離子，掃描時間和各子離子的碰撞能量。2）Same value for all SRMsScan Wi

10、tdth （ m/z）： 0.0025Scan time： 0.5左右（具體值是掃描點(diǎn)數(shù)而定）Peak Width Q1（FWHM） ：0.4或 0.7（一般設(shè)定為 0.7）Polarity :正負(fù)電離模式 Data type: Centroid或 profile，樣品分析時一般設(shè)置為CentroidSkimmer Offset:視化合物情況決定是否需要設(shè)定3）這些設(shè)置的值在進(jìn)行化合物的質(zhì)譜條件優(yōu)化時，可以拷貝到此界面下，即單擊 Paste scan event 按鈕.2.5.2.3 點(diǎn)擊質(zhì)譜界面上的液相色譜控制按鍵AS/LC/GC Direct Control ,進(jìn)入液相控制界面，觀察各管路

11、中是否有氣泡，若有氣泡，打開 purge閥，Accela Pump 界面上的 flow設(shè)定為 1000 u L/min，將需要排氣泡的管路流動相比例設(shè)置為100%，點(diǎn)擊 Apply，完成后，關(guān)閉 purge閥，將與 purge閥連接的注射器中的液體排出。2.5.2.4觀察自動進(jìn)樣管理器掛壁上的注射器內(nèi)是否有氣泡， 若有氣泡， 則點(diǎn)擊下拉菜單中 的flushsyringe ,設(shè)定 flush的體積為合適的值，如 6000ul ,流速為 100 u L/min，點(diǎn)擊 Apply ,完成后，若還有氣泡則重復(fù)一次，直到?jīng)]有氣泡為止。2.5.2.5 設(shè)定進(jìn)樣方法所用流動相的起始比例及對應(yīng)流速，平衡色譜柱

12、至泵壓穩(wěn)定。2.6樣品序列建立及樣品分析2.6.1點(diǎn)擊菜單欄 Acquisition 中的 SetupA. 選擇樣品類型 Sample Type: Unknown, QC, Blank,B. 輸入文件名稱 File Name :可以手動輸入，也可點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵瀏覽，選擇已經(jīng)存在的文 件的文件名；C. Sample Name :樣品名稱，一般設(shè)定為樣品編號D. Level :用于定量計(jì)算時設(shè)置的不同濃度點(diǎn)的代號F. Vial Pos：設(shè)定樣品瓶在進(jìn)樣器中的位置Position: A:1-A:40, B:1-B:40,C:1-C:40, D:1-D:40.E:1-E:40;G. Inj Vol: F

13、rom AS2.6.2樣品分析A. 運(yùn)行單個樣品，在 Sequence 列表中鼠標(biāo)點(diǎn)擊選擇需要運(yùn)行的樣品，單擊按鈕圳，設(shè)定樣品運(yùn)行結(jié)束后儀器狀態(tài)After Sequence Set System （On，儀器仍在掃描狀態(tài)，Standby,儀器處在待機(jī)狀態(tài)，Off,儀器關(guān)機(jī)），單擊 OK,開始進(jìn)樣分析；B. 運(yùn)行多個樣品：單擊按鈕惺 W,在 RunRows 空格中輸入要運(yùn)行的樣品范圍 （在序列表 中的行標(biāo),如 1-6）,設(shè)定樣品運(yùn)行結(jié)束后儀器狀態(tài) After Sequence Set System （On,儀器仍在 掃描狀態(tài)，Standby，儀器處在待機(jī)狀態(tài)， Off,儀器關(guān)機(jī)），單擊 OK,開

14、始進(jìn)樣分析。C. 通常需要將界面切換到在線監(jiān)測界面，即點(diǎn)擊 Status完成界面切換2.7定量數(shù)據(jù)處理方法建立2.7.1.點(diǎn)擊 LC Quan 界面下的 II Quantitate | ,點(diǎn)擊方法編輯圖標(biāo)出現(xiàn) Identification界面；2.7.2設(shè)置定量方法A定義定量方法（內(nèi)標(biāo)法，外標(biāo)法）：單擊 Option 菜單， 單擊 Calibration by,選擇定量 方法（內(nèi)標(biāo)法 ,Internal Standard,或者外標(biāo)法 External Standard）,點(diǎn)擊 OK;B.打開一演示數(shù)據(jù)文件：左下角圖譜中右鍵鼠標(biāo)，open rawfiles，打開一原始數(shù)據(jù)文件（在要作定量處理的數(shù)

15、據(jù)中選擇一個，最好是打開一個標(biāo)樣的數(shù)據(jù)文件）；2.7.3.設(shè)置定量方法（內(nèi)標(biāo)法）參數(shù):A. 定量組分的識別 Identification 參數(shù)：設(shè)定定量組分的名稱 Name （點(diǎn)擊界面右上角組分（Components）,直接輸入該組分名稱），掃描方法 Filter （下拉菜單中選擇該組分對應(yīng)的掃描方 法），點(diǎn)擊 OK,輸入保留時間 Retention time ,點(diǎn)擊 OK （如果是多組分定量，點(diǎn)擊 component欄 內(nèi)菜單，選擇add，輸入第二個組分名稱，其他參數(shù)設(shè)定相同）；B. 內(nèi)標(biāo)物的識別 Identification 參數(shù)：在 component欄內(nèi)菜單，選擇 add,直接輸入內(nèi)標(biāo)

16、物名稱，掃描方法 Filter （下拉菜單中選擇內(nèi)標(biāo)物對應(yīng)的掃描方法），點(diǎn)擊 OK,輸入內(nèi)標(biāo)物保留時間 Retention time，點(diǎn)擊 OK;C. 內(nèi)標(biāo)物積分參數(shù)設(shè)定 Peak Detection Algorithm :積分方法，選擇 ICIS 或者 Genesis,輸 入內(nèi)標(biāo)物各積分參數(shù)，點(diǎn)擊 OK;D. 定量組分積分參數(shù)設(shè)定 Peak Detection Algorithm :積分方法，選擇 ICIS或者 Genesis, 輸入該組分各積分參數(shù)，點(diǎn)擊 OK ;E. 校正曲線 Calibration參數(shù)設(shè)定：單擊 Calibration 缺省菜單；F. 點(diǎn)擊界面右上角組分（Compone

17、nts）列表欄內(nèi)內(nèi)標(biāo)物的名稱，定義其為內(nèi)標(biāo)物：在組 分類型Component type 欄內(nèi)選擇 ISTD，點(diǎn)擊 OK;G. 點(diǎn)擊界面右上角組分 （Components）列表欄內(nèi)定量組分的名稱，在 Target compounds 欄內(nèi)，ISTD的下拉菜單中選中內(nèi)標(biāo)物，點(diǎn)擊 OK ;H. 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度 Levels 設(shè)定：單擊 Level 缺省菜單，在左側(cè)濃度列表內(nèi)，Cal Level 列內(nèi)從上到下依次輸入每個濃度的代號（如 1,2,3 ；或 cal-1, cal-2,cal-3 -， 或者 A， B， C 等） ，Amount列內(nèi)從上到下依次輸入各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度值，單擊 OK ,定量方法（內(nèi)標(biāo)

18、法）建立完成；I.保存方法2.7.4. 設(shè)置定量方法（外標(biāo)法）參數(shù)：A. 定量組分的識別 Identification 參數(shù)：設(shè)定定量組分的名稱Name （點(diǎn)擊界面右上角組分（Components）,直接輸入該組分名稱），掃描方法 Filter（下拉菜單中選擇該組分對應(yīng)的掃描 方法） ，點(diǎn)擊OK ,輸入保留時間Retentiontime ,點(diǎn)擊OK; （如果是多組分定量， 點(diǎn)擊界面右上 角組分 （Components） ,選擇 add,輸入第二個組分名稱，其他參數(shù)設(shè)定相同）；B. 定量組分積分參數(shù)設(shè)定 Detection :點(diǎn)擊界面右上角組分 （Components）列表欄內(nèi)定量組分的名稱，輸入該組分各積分參數(shù)，點(diǎn)擊OK ;C. 校正曲線 Calibrati