人白細胞介素-10IL-10

1、人白細胞介素-10 (IL-10 )酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人白細 胞介素-10 (IL-10),只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。用 途：用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素 -10 (IL-10)的測定。工作原理本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA測定樣品中人白細胞介素-10 (IL-10)的水平。向預(yù)先包被了人白細胞介素-10 (IL-10)單克隆抗體的酶標孔中加入白細 胞介素-10 (IL-10),溫育；洗滌后，加入HRP標記過的白細胞介素-10 (IL-10)抗體。冉經(jīng) 過溫育和洗滌，

2、去除未結(jié)合的酶，然后加入底物 A、B,產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人白細胞介素 -10 (IL-10)的濃度呈正相關(guān)。試劑盒組成1標準品(400ng/L)7顯色劑A液6ml2標準品稀釋液3ml8顯色劑B液6ml3酶標包被板12孔X 8條9終止液6ml4酶標試劑6ml10說明書1份530倍濃縮洗滌液20ml11封板膜2張6樣品稀釋液6ml12密封袋1個需要而未提供的試劑和器材1 . 37 c恒溫箱。2 .標準規(guī)格酶標儀。3 .精密移液器及一次性吸頭4 .蒸儲水，5 . 一次性試管6 .吸水紙注意事項1.從2-8C取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少 30

3、分鐘。酶標包被板開封 后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2,各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差3 .建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋 液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再按說明書操作進行測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(x nX 5)。4 .嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.5 .為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。6 .不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。7 .底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，

4、酶標板朝下用力拍幾 次；將稀釋后的洗滌液至少注入孔內(nèi)，浸泡 1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中標本要求1 .不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。2 .標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融操作程序1.標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支、 用戶請按照說明自行在小試管中倍比 稀釋）：200ng/L（5號標準品）120 pl的原倍標準品加入120 pl的標準品稀釋液100ng/L（4號標準品）120

5、M的5號標準品加入120 M的標準品稀釋液50ng/L（3號標準品）120 M的4號標準品加入120 M的標準品稀釋液25ng/L（2號標準品）120 M的3號標準品加入120 M的標準品稀釋液L（1號標準品）120 M的2號標準品加入120 M的標準品稀釋液2 .分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50 n ;1在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 d,然后再加待測樣品10 U （樣品最終稀釋度為5倍）。 輕輕晃動混勻，37 c溫育30分鐘。3 .棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30

6、秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。4 .每孔加入酶標試劑50人 空白孔除外。輕輕晃動混勻，37c溫育30分鐘。5 .棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。6 .每孔先加入顯色劑 A50U,再加入顯色劑B504，輕輕震蕩混勻，37c避光顯色10分 鐘.7,取出酶標板，每孔加終止液50口 終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。8 .測定：以空白孔調(diào)零，在 450nm波長下測量各孔的吸光度伯：（OD值）。測定應(yīng)在加 終止液后15分鐘以內(nèi)進行。9 .根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程， 再根據(jù)樣品的OD 值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算