酶的分離純化

1、武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/51第四章第四章 酶的分離純化及產(chǎn)品成型酶的分離純化及產(chǎn)品成型（1）酶的抽提）酶的抽提（2）酶的分離純化：沉淀分離、離心分離、）酶的分離純化：沉淀分離、離心分離、 膜過濾、層析分離、電泳分離膜過濾、層析分離、電泳分離（3）酶液的濃縮、結(jié)晶、干燥、成型）酶液的濃縮、結(jié)晶、干燥、成型（4 4）酶純化過程）酶純化過程 的純度監(jiān)測的純度監(jiān)測本章知識點：本章知識點：武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/52一、生物下游加工技術(shù)一、生物下游加工技術(shù)u下游加工過程包括目標產(chǎn)物的提取、濃縮、純化及成品化下游加工過程包括目標產(chǎn)物的提取、濃縮、純化

2、及成品化等過程。等過程。u生物產(chǎn)物從原料（培養(yǎng)液或細胞）生產(chǎn)到產(chǎn)品的后處理技生物產(chǎn)物從原料（培養(yǎng)液或細胞）生產(chǎn)到產(chǎn)品的后處理技術(shù)（分離純化技術(shù)）的發(fā)展，使低成本、高收率地純化目標術(shù)（分離純化技術(shù)）的發(fā)展，使低成本、高收率地純化目標產(chǎn)物成為現(xiàn)實。產(chǎn)物成為現(xiàn)實。 大多數(shù)酶的回收純化過程成本約占大多數(shù)酶的回收純化過程成本約占70%70%； 醫(yī)用酶的生產(chǎn)回收過程的成本高達醫(yī)用酶的生產(chǎn)回收過程的成本高達85%85%； 基因工程表達產(chǎn)物的回收純化過程成本一般占基因工程表達產(chǎn)物的回收純化過程成本一般占85-90%85-90%以上；以上； 青霉素回收過程成本約占青霉素回收過程成本約占50%50%； 乙醇的回收

3、過程成本僅占乙醇的回收過程成本僅占14%14%。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/53二、分離純化的一般流程二、分離純化的一般流程原料液原料液細胞分離（離心、過濾）細胞分離（離心、過濾） 細胞細胞（胞內(nèi)產(chǎn)物）（胞內(nèi)產(chǎn)物）清液清液（胞外產(chǎn)物）（胞外產(chǎn)物）細胞破碎細胞破碎碎片分離碎片分離粗分離粗分離純化純化成品化成品化線路2線路1武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/54 人干擾素、是一種重要蛋白類生物藥品，具有抗癌和治療人干擾素、是一種重要蛋白類生物藥品，具有抗癌和治療肝炎等作用。肝炎等作用。Yonehara等人：醋酸鋅鹽析醋酸鋅鹽析離子交換層析離子交換層析硫酸銨

4、鹽析硫酸銨鹽析銅螯合層析銅螯合層析疏水層析疏水層析凝膠電泳凝膠電泳staehelin等人：硫酸銨鹽析硫酸銨鹽析免疫親和層析免疫親和層析陽離子交換層析陽離子交換層析（83.0%）（62.7%）（96.2%）（46.0%）（78.3%）（88.9%）共六步，總收率僅為16%僅三步，總收率達81.0%武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/55在實踐工作中選擇方法時在實踐工作中選擇方法時:首先，應(yīng)對被純化的酶的理化性質(zhì)有個比較全面的了解;其次，判斷采用的方法和條件是否得當(dāng)，始終以測定酶活性為標準。再者，在純化工作中，往往不宜重復(fù)采用相同的步驟和條件。最后，要嚴格控制操作條件。隨著酶的逐步

5、純凈，雜蛋白含量亦逐步降低，蛋白質(zhì)之間的相互作用力隨之下降,酶更不穩(wěn)定，因此,更要防止酶變性。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/56三、酶分離純化的基本原則三、酶分離純化的基本原則 （一）酶分離純化包括三個基本環(huán)節(jié)（一）酶分離純化包括三個基本環(huán)節(jié)抽提抽提純化純化精制精制（二）酶分離純化應(yīng)注意以下問題（二）酶分離純化應(yīng)注意以下問題1 1、防止酶變性失活：、防止酶變性失活：溫度、pH、泡沫、重金屬等。2 2、選擇有效的純化方法。、選擇有效的純化方法。3 3、酶活性測定與總蛋白質(zhì)含量測定應(yīng)貫穿純化過程的、酶活性測定與總蛋白質(zhì)含量測定應(yīng)貫穿純化過程的始終。始終。武漢生物工程學(xué)院生物工

6、程系酶工程教研室2021/8/57武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/58第一節(jié)第一節(jié) 從發(fā)酵液制取酶提取液（酶溶液的制備）從發(fā)酵液制取酶提取液（酶溶液的制備）一、發(fā)酵液的預(yù)處理一、發(fā)酵液的預(yù)處理目的：目的：降低粘度，便于固液分離方法：方法：（1 1）加熱：）加熱： 適用于耐熱的酶，注意常要加適當(dāng)?shù)拿副Ｗo劑。 （2 2）加凝聚劑或絮凝劑）加凝聚劑或絮凝劑 （3 3）調(diào)）調(diào)pHpH值值二、固液分離二、固液分離方法：方法：（1）離心分離；（2）過濾；（3）雙水相萃取武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/59三、細胞破碎三、細胞破碎機械破碎法機械破碎法物理破碎法物理破碎

7、法化學(xué)破碎法化學(xué)破碎法： 甲苯、丙酮、丁醇、氯仿等有機溶劑和Triton、 Tween等表面活性劑酶促破碎法酶促破碎法搗碎法搗碎法：搗碎機研磨法研磨法：研缽、細菌磨、石磨、球磨等勻漿法勻漿法：勻漿器溫度差破碎法溫度差破碎法：凍融交替法凍融交替法壓力差破碎法壓力差破碎法：高壓沖擊法、突然降壓法、滲透壓變化法高壓沖擊法、突然降壓法、滲透壓變化法超聲波破碎法超聲波破碎法自溶法自溶法加酶處理加酶處理G+菌：溶菌酶G-菌：溶菌酶、巰基乙醇等酵母菌：-葡聚糖酶和溶菌酶霉菌：幾丁質(zhì)酶武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/510四、抽提四、抽提（一）抽提方法（一）抽提方法 指在一定的條件下，用適

8、當(dāng)?shù)娜軇┨幚砗冈?，使酶充指在一定的條件下，用適當(dāng)?shù)娜軇┨幚砗冈?，使酶充分溶解到溶劑中的過程，也稱為酶的提取。分溶解到溶劑中的過程，也稱為酶的提取。 四?。合∷?、稀堿、稀鹽、稀有機溶劑四?。合∷?、稀堿、稀鹽、稀有機溶劑（二）抽提過程中的注意事項（二）抽提過程中的注意事項1 1、pHpH值：值：選擇的pH值不超出酶的酸堿穩(wěn)定范圍； 最好遠離待抽提酶的等電點。2 2、溫度：、溫度：通?？刂圃?4左右，尤其是采用有機溶劑提取時。3 3、抽提液體積（用量）、抽提液體積（用量） 抽提液的用量一般為含酶原料體積的25倍。可一次抽提，也可分幾次反復(fù)抽提。4 4、為提高酶的穩(wěn)定性，可以加入適量的保護劑。

9、、為提高酶的穩(wěn)定性，可以加入適量的保護劑。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/511分離依據(jù)的性質(zhì)分離方法根據(jù)分大小、輕重離心分離、凝膠過濾、膜分離根據(jù)溶解度大小鹽析沉淀、有機溶劑沉淀、共沉淀、選擇性沉淀、等電點沉淀根據(jù)電學(xué)性質(zhì)離子交換層析、電泳分離根據(jù)穩(wěn)定性差異選擇性熱變性法、選擇性酸堿變性法、選擇性表面變性法根據(jù)親和作用親和層析、親和電泳酶分離純化方法：酶分離純化方法： 現(xiàn)有的純化方法，都是以酶與雜蛋白在理化性質(zhì)、穩(wěn)定性上的差異以及酶的生物學(xué)特性為依據(jù)而建立起來的。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/512第三節(jié)第三節(jié) 酶的沉淀分離酶的沉淀分離鹽析沉淀法、等

10、電點沉淀法、有機溶劑沉淀法、復(fù)合沉淀法一、鹽析沉淀法一、鹽析沉淀法1 1、原理：、原理：2 2、硫酸銨鹽析的優(yōu)點、硫酸銨鹽析的優(yōu)點 優(yōu)點：優(yōu)點：在水中溶解度大，溶解的溫度系數(shù)?。?價廉，便宜； 可保護酶。 缺點缺點：溶解過程隨濃度增加的體積變化是非線性的變化。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/5133 3、鹽析操作、鹽析操作（1）硫酸銨的飽和度100%（NHNH4 4）2 2SOSO4 4 的飽和度（%）=實際濃度飽和濃度0.4S = 40%（飽和度）（飽和度）武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/514（2）調(diào)整鹽濃度的方法加飽和（加飽和（NH4）2SO4 溶

11、液：溶液：VV0（S2 - S1）1 - S2=V0 原來溶液的體積原來溶液的體積V 所需加入飽和硫酸銨的體積所需加入飽和硫酸銨的體積S1 原來溶液的硫酸銨飽和度原來溶液的硫酸銨飽和度S2 所需達到的硫酸銨飽和度所需達到的硫酸銨飽和度 例：將例：將2升升0.2S的硫酸的硫酸銨溶液提升至銨溶液提升至0.5S，需加飽，需加飽和硫酸銨多少升？溶液體積和硫酸銨多少升？溶液體積增加多少倍？增加多少倍？武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/515加固體（加固體（NH4）2SO4 ：WB（S2 - S1）1 AS2=W 將將1L飽和度為飽和度為S1的溶液提高到的溶液提高到 S2所所要添加的固體

12、硫酸銨要添加的固體硫酸銨克克數(shù)；數(shù)；A、B 與溫度有關(guān)的經(jīng)驗常數(shù)與溫度有關(guān)的經(jīng)驗常數(shù) 例：某酶制劑廠生產(chǎn)例：某酶制劑廠生產(chǎn)15噸蛋噸蛋白酶發(fā)酵液，用硫酸銨進行鹽析白酶發(fā)酵液，用硫酸銨進行鹽析,要求硫酸銨的飽和度達到要求硫酸銨的飽和度達到40%，計算需要加入固體硫酸銨多少計算需要加入固體硫酸銨多少kg?（25）經(jīng)驗常數(shù)010202530A0.2710.2810.2900.2940.298B（g/L）514.72525.05536.34541.24 545.88（mol/L）3.093.974.064.104.133680Kg武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/516(25)(25

13、)武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/517 當(dāng)溶液體積不大，要達到的鹽濃度不高，可以加當(dāng)溶液體積不大，要達到的鹽濃度不高，可以加入飽和硫酸銨溶液；當(dāng)溶液體積較大，要達到的鹽入飽和硫酸銨溶液；當(dāng)溶液體積較大，要達到的鹽濃度又較高，此時加入固體硫酸銨較好。濃度又較高，此時加入固體硫酸銨較好。4 4、為了得到較好的鹽析效果，應(yīng)控制下列因素、為了得到較好的鹽析效果，應(yīng)控制下列因素（1）不同酶，鹽析時所需的鹽濃度各不相同。實際料液中目標酶的鹽析沉淀操作前，所需的硫酸銨濃度或飽和度可通過實驗確定。（2）加鹽操作時，防止局部鹽濃度過高，防止產(chǎn)生泡沫。（3）pH值和溫度：等電點附近，室溫或低

14、溫操作。（5）脫鹽：超濾、透析或?qū)游?。?）蛋白質(zhì)濃度：樣品液的蛋白質(zhì)濃度一般控制在2.53.0% 為宜，太濃時應(yīng)適當(dāng)稀釋，以減少雜蛋白共沉淀。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/518武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/519（二）等電點沉淀（二）等電點沉淀1、原理、原理2、實際操作、實際操作 與其他方法一起使用（鹽析、有機溶劑沉淀、復(fù)合沉淀）。與其他方法一起使用（鹽析、有機溶劑沉淀、復(fù)合沉淀）。 單獨使用時，主要是用于從粗酶中除去某些等電點相距較單獨使用時，主要是用于從粗酶中除去某些等電點相距較大的雜蛋白大的雜蛋白 。3、注意、注意 加酸堿調(diào)節(jié)加酸堿調(diào)節(jié)pH

15、pH值時，防止局部酸堿過高。值時，防止局部酸堿過高。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/520（三）有機溶劑沉淀法（三）有機溶劑沉淀法1、作用原理、作用原理 去水膜；降低介電常數(shù)、破壞氫鍵。去水膜；降低介電常數(shù)、破壞氫鍵。2、注意、注意 低沸點，易燃易爆；低溫操作，沉淀析出后要盡快分離。低沸點，易燃易爆；低溫操作，沉淀析出后要盡快分離。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/521（四）復(fù)合物沉淀法（四）復(fù)合物沉淀法1、原理、原理2、常用的復(fù)合沉淀劑：、常用的復(fù)合沉淀劑： 單寧、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。單寧、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。 PAA +

16、酶酶 PAA-酶酶 PAA-酶酶 PAA + 酶酶 PAA + 酶酶 + Ca 2+ PAA- Ca 2+ + 酶酶 PAA- Ca 2+ + SO4 2- CaSO4 + PAApH6以上武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/522（五）選擇性變性沉淀法（五）選擇性變性沉淀法1、熱變性法：熱變性法：根據(jù)目的酶與雜蛋白熱穩(wěn)定性差異，可以在根據(jù)目的酶與雜蛋白熱穩(wěn)定性差異，可以在較高溫度下，使雜蛋白變性沉淀，而酶則保持可溶狀態(tài)。較高溫度下，使雜蛋白變性沉淀，而酶則保持可溶狀態(tài)。2、酸堿變性法：酸堿變性法：與熱變性原理類似，目的酶與雜蛋白的酸與熱變性原理類似，目的酶與雜蛋白的酸堿穩(wěn)定性

17、不同，可以調(diào)整不同的堿穩(wěn)定性不同，可以調(diào)整不同的pHpH使雜蛋白變性沉淀。使雜蛋白變性沉淀。 選擇一定的條件使酶液中存在的某些蛋白質(zhì)等雜質(zhì)變性選擇一定的條件使酶液中存在的某些蛋白質(zhì)等雜質(zhì)變性沉淀，而不影響所需的酶。沉淀，而不影響所需的酶。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/523 借助于一定孔徑的高分子薄膜，將不同大小、不借助于一定孔徑的高分子薄膜，將不同大小、不同形狀和不同特性的物質(zhì)顆粒或分子進行分離、提同形狀和不同特性的物質(zhì)顆?；蚍肿舆M行分離、提純或濃縮的新型分離技術(shù)。純或濃縮的新型分離技術(shù)。第三節(jié)第三節(jié) 膜過濾技術(shù)在酶分離純化中的應(yīng)用膜過濾技術(shù)在酶分離純化中的應(yīng)用 膜分離

18、技術(shù)已被國際上公認為20世紀末至21世紀中期最有發(fā)展前途，甚至?xí)?dǎo)致一次工業(yè)革命的重大生產(chǎn)技術(shù)，所以可以稱為前沿技術(shù)，是世界各國研究的熱點。 廣泛應(yīng)用于生物工程、化學(xué)、制藥、飲料、電力、冶金、海水淡化、資源再生等領(lǐng)域。滲出液滲出液武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/524一、膜分離的類型一、膜分離的類型1、按推動力不同可分為：、按推動力不同可分為：（1）擴散膜分離：）擴散膜分離：滲透、透析滲透、透析（2）壓力差膜分離：）壓力差膜分離：微濾、超濾、納濾、反滲透微濾、超濾、納濾、反滲透（3）電位差膜分離：）電位差膜分離：電滲析電滲析2 2、按膜孔徑或截留物質(zhì)的大小：、按膜孔徑或截留

19、物質(zhì)的大?。何V微濾 超濾超濾 納濾納濾 、電滲析、電滲析 、透析、透析 反滲透反滲透膜孔徑大小武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/525病毒生物大分子生物小分子鹽類水灰塵細菌病毒生物大分子生物小分子鹽類水灰塵細菌病毒生物大分子生物小分子鹽類水灰塵細菌病毒生物大分子生物小分子鹽類水膜膜微濾（微濾（MFMF）超濾（超濾（UFUF）納濾（納濾（MFMF）反滲透濾（反滲透濾（RORO）灰塵細菌（0.2-2um）（10-200nm）（2nm）（2-10nm）武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/526各種膜分離法的原理和應(yīng)用范圍各種膜分離法的原理和應(yīng)用范圍膜分離法膜分離法

20、截留的顆粒大小截留的顆粒大小截留的主要物質(zhì)截留的主要物質(zhì)過濾介質(zhì)過濾介質(zhì)應(yīng)用舉例應(yīng)用舉例微微 濾（濾（MF） 0.22um灰塵、細菌灰塵、細菌微孔濾膜微孔濾膜除菌，回收除菌，回收菌菌超超 濾濾 （UF） 10nm200nm生物大分子及以上生物大分子及以上超濾膜超濾膜蛋白質(zhì)、多蛋白質(zhì)、多肽和多糖的肽和多糖的回收和濃縮回收和濃縮納納 濾濾（NF）2nm10nm生物小分子及以上生物小分子及以上納濾膜納濾膜脫鹽、濃縮脫鹽、濃縮反滲透反滲透（RO）電荷效應(yīng),可用于測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/5945 5、SDS-PAGESDS-PAGESDS：十二烷基硫

21、酸鈉十二烷基硫酸鈉 CH3（CH2）11SO4Na2 在配制凝膠時加入SDS，同時加巰基乙醇，Pr在電泳時，其中的寡聚體Pr解聚為單體（亞基），SDS分子就將每個單體分子表面覆蓋起來，使其形成短軸為1.8nm，而長軸各異的SDS亞基復(fù)合物，電泳時，他們的表面電荷基本相同，故可因分子長軸大小（即亞基分子大?。┎顒e而分離，換言之，亞基的大小是彼此分離的依據(jù)，所以此法可用于測定單體的相對分子質(zhì)量。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/5956 6、PAGEPAGE的一般操作程序的一般操作程序配制各種制配制各種制膠的貯存液膠的貯存液準備制準備制膠模具膠模具配制鑄膠配制鑄膠混合液混合液灌注

22、膠液并灌注膠液并聚合成凝膠聚合成凝膠上槽上槽點樣點樣通電電泳通電電泳取出凝膠取出凝膠Pr染色染色漂洗顯帶漂洗顯帶記錄計算記錄計算繪制電泳圖譜繪制電泳圖譜武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/596武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/597武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/598 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)（亞基）的相對分子質(zhì)量（Mr）與它們的電泳遷移率（U）之間，存在如下關(guān)系： lglgMrMr = lg = lgK K - - bUbU 用 lgMr 對 U 作圖，只要實驗測得，就可用標準曲線法求得未知蛋白質(zhì)（亞基）的相對分子質(zhì)量。 實際工作中

23、，常用相對遷移率（用 mR 表示）代替 U 作圖。m mR R= =蛋白質(zhì)移動的距離溴酚藍移動的距離武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/599三、等電點聚焦電泳（三、等電點聚焦電泳（IEFIEFisoelectric focusing ）1、等電點聚焦電泳分離、等電點聚焦電泳分離Pr原理原理 等電點聚焦電泳是在電泳介質(zhì)中加入兩性離子載體，電泳時形成由陽極到陰極的連續(xù)遞增的pH梯度，蛋白質(zhì)按其電荷性質(zhì)不同各自向著與其等電點相等的pH處移動聚焦，從而彼此分離的電泳技術(shù)，無論Pr從正極出發(fā)或是從負極出發(fā)，都會聚焦在等電點處。2、兩性離子載體、兩性離子載體 各組分的pI值十分接近，在電

24、泳中可以形成連續(xù)的pH梯度，常用的商品名為Ampholine，規(guī)格有pH3.59.0和精細分級的pH3.55、59、911的多種商品可供不同的要求使用。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/5100第五節(jié)第五節(jié) 酶液的濃縮、結(jié)晶、干燥與成型酶液的濃縮、結(jié)晶、干燥與成型一、稀酶液的濃縮一、稀酶液的濃縮 濃縮是從稀溶液中除去一部分溶劑（水），使其變成濃縮液的工藝。 酶液濃縮的方法很多：如沉淀，低溫真空蒸發(fā)、超濾等。二、結(jié)晶二、結(jié)晶1、結(jié)晶的一般原理、結(jié)晶的一般原理不飽和溶液飽和溶液過飽和溶液析出沉淀（快）析出結(jié)晶（慢）（無排列排隊機會）武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/

25、8/51012、結(jié)晶、結(jié)晶“三步曲三步曲”第一步：第一步：形成過飽和溶液形成過飽和溶液稍微越過飽和狀態(tài)，處于介穩(wěn) 態(tài)， 濃縮、降溫（少有升溫）、調(diào)節(jié)pH至pI，可使溶 液趨于過飽和。第二步：第二步：形成晶核形成晶核過飽和溶液在一定條件下可形成極微小 的有序排列的固相物，成為后續(xù)晶體生長的核心，稱 為晶核。振蕩、攪拌、快速降溫可促使過飽和溶液形 成晶核，有時可投入少量“晶種”微粒。第三步：第三步：晶體生長晶體生長溶質(zhì)在晶核周邊不斷有序排列，晶體逐 步長大，控制條件，如緩慢攪拌、適當(dāng)升溫使細小晶 體溶解，溶質(zhì)到大晶體周圍集結(jié)生長。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/51023、結(jié)晶

26、條件、結(jié)晶條件（1）酶的純度酶的純度一般酶純度應(yīng)達到50%以上。（2）酶蛋白的濃度酶蛋白的濃度對大多數(shù)酶來說，蛋白質(zhì)濃度在 350mg/mL 較好。（3）晶種晶種有些不易結(jié)晶的酶，需加入微量的晶種才能形 成結(jié)晶。（4）溫度溫度 一般控制在04范圍內(nèi)。（5）pH值值一般選擇在被結(jié)晶酶的pI值附近。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/51033、酶結(jié)晶的方法、酶結(jié)晶的方法 從原理上講，有（1）鹽析法；（2）有機溶劑結(jié)晶法；（3）pH值或溫度誘導(dǎo)法等。 由以上方法派生的具體方法，有（1）平衡透析法；（2）氣相擴散法。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/5104三、固體

27、酶制劑的干燥、成型和保存三、固體酶制劑的干燥、成型和保存1、工業(yè)上常用于酶制劑干燥的方法、工業(yè)上常用于酶制劑干燥的方法 噴霧干燥法：噴霧干燥法：酶液在干燥塔中噴成霧滴，在100高溫下，幾秒鐘內(nèi)即可脫水而成干粉，高溫短時，酶活力損失小。熱風(fēng)干燥：熱風(fēng)干燥：5055的熱風(fēng)吹過濕物料表面帶走水分。p真空干燥法：真空干燥法：邊加熱邊抽真空除去水分。真空冷凍干燥法：真空冷凍干燥法：先冷凍結(jié)冰，再抽真空使水升華而被抽走。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/51052、成型添加劑、成型添加劑（1）酶粉粘結(jié)劑（2）顆粒酶成型劑（3）酶穩(wěn)定劑（4）填充劑 主要目的是調(diào)節(jié)酶活力達到出廠標準。3、藥用酶除去熱源、藥用酶除去熱源 除去熱源的方法：超濾、凝膠過濾、陰離子交換劑吸附等。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室2021/8/51064、酶產(chǎn)品的保存、酶產(chǎn)品的保存 盡量低溫（0 4），少量樣品在-20保存；干燥保存（包裝袋不透濕）；避陽光直射。武漢生物工程學(xué)院生物工程系酶工程教研室20