最新熒光測試

1、實(shí)驗(yàn)六、熒光測定實(shí)驗(yàn)一、基本概念1-發(fā)射光譜是指發(fā)光的能量按波長或頻率的分布。通常實(shí)驗(yàn)測量的是發(fā)光的相對能量。發(fā)射光 譜中，橫坐標(biāo)為波長（或頻率），縱坐標(biāo)為發(fā)光相對強(qiáng)度。發(fā)射光譜常分為帶譜和線譜，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)既有帶譜、又有線譜的情況。2激發(fā)光譜是指發(fā)光的某一譜線或譜帶的強(qiáng)度隨激發(fā)光波長（或頻率）變化的曲線。橫坐標(biāo)為 激發(fā)光波長，縱坐標(biāo)為發(fā)光相對強(qiáng)度。激發(fā)光譜反映不同波長的光激發(fā)材料產(chǎn)生發(fā)光的效果。即表示發(fā)光的某一譜線或譜 帶可以被什么波長的光激發(fā)、激發(fā)的本領(lǐng)是高還是低；也表示用不同波長的光 激發(fā) 材料時(shí)，使材料發(fā)出某一波長光的效率。3.余輝衰減曲線是指激發(fā)停止后發(fā)光強(qiáng)度隨時(shí)間變化的曲線。橫坐標(biāo)

2、為時(shí)間，縱坐標(biāo)為發(fā)光強(qiáng)度（或相對發(fā)光強(qiáng)度）。二、測試儀器激發(fā)光譜、發(fā)射光譜及余輝衰減曲線的測試采用日本島津RF-5301PC 型熒光分光光度計(jì)。從150WM燈光源發(fā)出的紫外和可見光經(jīng)過激發(fā)單色器分光后，再經(jīng)分束器照到樣 品表面，樣品受到該激發(fā)光照射后發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā)射單色器分光，再經(jīng)熒光 端光電 倍增管倍增后由探測器接收。另有一個(gè)光電倍增管位于監(jiān)測端，用以倍增激發(fā)單色 器分出的經(jīng)分束后的激發(fā)光。注意：選做鴇燈光源激發(fā)光譜、發(fā)射光譜測試的同學(xué)應(yīng)采用天津港東WGY-10型熒光 分光光度計(jì)。光源發(fā)出的紫外可見光或者紅外光經(jīng)過激發(fā)單色器分光后，照到熒光池中的被 測樣 品上，樣品受到該激發(fā)光照射后發(fā)出的熒

3、光經(jīng)發(fā)射單色器分光，由光電倍增管轉(zhuǎn)換 成相應(yīng)電信號，再經(jīng)放大器放大反饋進(jìn)入A/D轉(zhuǎn)換單元，將模擬電信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng) 數(shù)字信號，并通過顯示器或打印機(jī)顯示和記錄被測樣品譜圖。三、樣品制備1. 粉末試樣粉末試樣可適當(dāng)添加不影響光譜特性的粘結(jié)劑(也可不添加粘結(jié)劑)，置 于樣品臺(tái)凹槽中，壓實(shí)、用載玻片碾平，固定到樣品座中。2. 塊狀試樣塊狀試樣可以直接用雙面膠粘結(jié)在樣品臺(tái)上，固定到樣品座中。3 液體試樣液體試樣應(yīng)放入專用的液體樣品槽中，固定到樣品座中。四、測試過程RF-5301PC熒光分光光度計(jì)測試發(fā)射、激發(fā)光譜及余輝衰減曲線先開機(jī)：打開Xe燈幵尖和主機(jī)開尖。開電腦。雙擊電腦桌面的 “RFPCg序 快捷鍵

4、進(jìn)入測試程序，會(huì)出現(xiàn)初始化界面，儀器依次檢測ROM、RAM、 EEPROM激發(fā)狹縫、發(fā)射狹縫、激發(fā)單色器、發(fā)射單色器和基線，初始化完成后， 進(jìn)入到測試界面。1-發(fā)射光譜的測試第一步：參數(shù)設(shè)置。點(diǎn)擊Configure設(shè)置/ Parameter參數(shù)，進(jìn)行測試參數(shù)設(shè)置：(1) 第一行為光譜類型。選擇“ Emission發(fā)射光譜(2) 第二行為激發(fā)波長。輸入激發(fā)波長(可以查找數(shù)據(jù))(3) 第三行為發(fā)光波長范圍。輸入掃描的起始波長和終止波長(對于未知樣，也可選擇 可見光全波段400760nm,般范圍：激發(fā)波長加二倍狹縫寬一一二倍激發(fā)波長減 去二倍狹縫寬)(4) 第四行為記錄范圍。輸入縱坐標(biāo)的最小和最大顯

5、示值(5) 第五行為掃描速度。由快至慢有6種速度選擇(6) 第七行為狹縫寬度?？煞謩e選擇激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度，(對于發(fā)光較弱的樣品，測 試時(shí)可以適當(dāng)增大狹縫寬度。)(7) 第八行為測試靈敏度選框。(8) 第九行為響應(yīng)時(shí)間選框，由快至慢有9種速度選擇(9) 參數(shù)設(shè)置完成后，點(diǎn)擊“ OK”。第二步：光譜測試。點(diǎn)擊屏幕右下角“ Star按&，開始發(fā)射光譜測試。測試完成后，屏幕會(huì)自動(dòng)彈出一個(gè)保存界面：上欄可輸入文件名稱，下欄可輸入注解，若輸入注解，則該注解將會(huì) 在打印出的報(bào)告中顯示出來。輸入文件名后，點(diǎn)擊“ Save*存。注意：這種保存只是臨時(shí)保存，尖機(jī)后將消失。永久保存需使用 File / S

6、ave as， 選擇存儲(chǔ)路徑和文件夾，點(diǎn)擊“ Save AS保存。保存后的文件，擴(kuò)展名是“SPC只能用“RF5301PC程序打開。若想將測試結(jié)果轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)，以利于使用其他軟 件作 圖和編輯，需進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換。第三步：自動(dòng)尋峰。對于測試所得的發(fā)射光譜，程序能夠進(jìn)行自動(dòng)尋峰。步驟是：點(diǎn)擊Manipulate操作/選擇Peak pick /鼠標(biāo)左鍵點(diǎn)住屏幕下方彈出的窗 口，上拉，調(diào)整窗口大小，即可讀出峰值。第四步：數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換。點(diǎn)擊File / Data translation / Ascii Export /則詢問轉(zhuǎn)換哪個(gè)通道?選擇通道后，點(diǎn) 擊0K，則數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換過程完成。轉(zhuǎn)換后的擴(kuò)展名為“ASC的文件自

7、動(dòng)保存在了 C盤/RFPC文件夾/Data子夾中。 第五步：數(shù)據(jù)處理。打開Origin軟件，點(diǎn)擊工具菜單中的導(dǎo)入ASC碼文件”快捷鍵，按照路徑尋找我們剛剛轉(zhuǎn)換的擴(kuò)展名為“.ASC，的文件，點(diǎn)擊打幵”則數(shù)據(jù)被導(dǎo)入。點(diǎn)擊屏幕 下方的“直線”工具，即可完成作圖。調(diào)整橫、縱坐標(biāo)的字號。輸入橫、縱坐標(biāo)名稱 和單位。數(shù)據(jù)處理完成后，可直接復(fù)制到Word文件中。2 激發(fā)光譜的測試第一步：參數(shù)設(shè)置。點(diǎn)擊Configure設(shè)置/ Parameter參數(shù)，進(jìn)行測試參數(shù)設(shè)置：在光譜類型選框中，選擇“ Excitation®發(fā)光譜，選擇后，下面幾行選項(xiàng)隨之變 化。（2）第二行為監(jiān)測的發(fā)光波長。（通常，選擇發(fā)

8、射光譜的峰值位置作為監(jiān)測波長。）（3）第三行為激發(fā)波長范圍。輸入掃描的起始波長和終止波長（通常終止波長應(yīng)小于發(fā)射光譜的短波邊，但允許有適量交叉）（4）以下“記錄范圍”、“掃描速度”、“狹縫寬度”、“靈敏度”及“響應(yīng)時(shí) 間”的設(shè)置，與發(fā)射光譜測試時(shí)的設(shè)置相類似。（5）參數(shù)設(shè)置完成后，點(diǎn)擊“ OK'。第二步：光譜測試。點(diǎn)擊屏幕右下角“ Star按鈕，開始激發(fā)光譜測試。測試完成后，自動(dòng)尋峰、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn) 換、數(shù)據(jù)處理的操作與發(fā)射光譜相類似。3. 余輝衰減曲線的測試第一步：參數(shù)設(shè)置。點(diǎn)擊“Acquire Mode,”在下拉菜單中選擇“Time Course模式，進(jìn)行測試參數(shù)設(shè)置。其中，參數(shù)設(shè)置對話框上半部分：激發(fā)波長（最大激發(fā)）、監(jiān)測發(fā)光波長（最大發(fā) 射）、狹縫寬度、靈敏度、響應(yīng)時(shí)間及記錄范圍的設(shè)置與發(fā)射光譜、激發(fā)光譜測試時(shí) 的設(shè)置相類似。參數(shù)設(shè)置對話框下半部分：反應(yīng)時(shí)間是指余輝衰減曲線