產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素分離和鑒定方法

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素分離和鑒定方法 產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素的分離和鑒定方法 1 毒素檢查 羊只死亡后，盡快取小腸內(nèi)容物（最好是回腸內(nèi)容物），加1%的氯仿防腐，在冷藏條件下送檢。實(shí)驗(yàn)室在收到送檢材料后，用生理鹽水稀釋24倍（若內(nèi)容物稀薄，不必稀釋），充分混合后經(jīng)離心沉淀 （3000 r/min）15 min，取上清液，用賽氏濾器過濾后，1份直接注射動(dòng)物（兩只），另1份加1%的胰蛋白酶粉，在室溫處理1 h以致活和1毒素，破壞毒素，然后注射另一組動(dòng)物（兩只）。若無離心機(jī)和賽氏濾器，可用濾紙反復(fù)過濾，直到濾液清朗即可。動(dòng)物可用小鼠（靜脈注射0.2 ml0.4ml）或家兔（靜脈注射2ml4ml）。注射后至少觀

2、察24h，根據(jù)兩組動(dòng)物的反應(yīng)情況作出判斷。如腸毒素含量低，動(dòng)物也可能于注射后一定時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)輕度昏迷，呼吸加快，經(jīng)1h左右可能恢復(fù)。.正常綿羊腸內(nèi)容物注射后不引起反應(yīng)。 也可用豚鼠進(jìn)行毒素檢查。方法為皮內(nèi)注射上述檢濾液0.2 ml0.4 ml，觀察48 h，如果有毒素存在，注射部可見壞死變化。 2 中和試驗(yàn) 2.1 取滅菌試管5支，編為1、2、3、4、5號(hào)，然后按表1所列，分別加入含毒素濾液、抗毒素和生理鹽水，每管總量為1.2 ml?；旌虾髮?個(gè)管同時(shí)放置37c溫箱中，中和40 min。 表1 中和試驗(yàn)方法加樣表 管號(hào) 腸內(nèi)容物濾液（ml） 抗毒素（ml） 生理鹽水（ml） 中和 靜脈注射小鼠

3、b 型 c 型 d 型 e 型 數(shù)量（只） 劑量（ml/只） 1 0.9 0.3 - - - - 37，40min 2 0.4 2 0.9 - 0.3 - - - 2 0.4 3 0.9 - - 0.3 - - 2 0.4 4 0.9 - - - 0.3 - 2 0.4 5 0.9 - - - - 0.3 2 0.4 2.1.1 小鼠10只，分為5組，每組2只，各組依次靜脈注射上述5個(gè)管中一個(gè)管中的混合液，注射劑量為每鼠0.4 ml，觀察72 h，按表2判斷結(jié)果。 表2 試驗(yàn)結(jié)果判定 第一種 結(jié)果 第二種 結(jié)果 第三種 結(jié)果 第四種 結(jié)果 第五種 結(jié)果 第六種 結(jié)果 b型血清+腸內(nèi)容物濾液 活 腸 毒 素 是 a 型 活 腸 毒 素 是 b 型 活 腸 毒 素 是 c 型 活 腸 毒 素 是 d 型 死 腸 毒 素 是 e 型 死 1.不是魏氏梭菌毒素，考慮其它毒素或毒物 c型血清+腸內(nèi)容物濾液 活 死 活 死 死 死 d型血清+腸內(nèi)容物濾液 活