核酸是遺傳物質

1、第六章核酸核酸是遺傳物質1868年瑞士 Mieshe從膿細胞的細胞核中分離出可溶于堿而不溶于稀酸的酸性物質。 間接證據(jù)：同一種生物的不同種類的不同生長期的細胞，DNA含量基本恒定。直接證據(jù)：T2噬菌體DNA感染E.coli用35S標記噬菌體蛋白質，感染E.coli,又用32P標記噬菌體核酸，感染E.coliDNA、RNA的分布（DNA在核內(nèi)，RNA在核外）。第一節(jié)核酸的化學組成核酸是一種線形多聚核苷酸，基本組成單位是核苷酸。 結構層次：核酸核苷酸磷酸核苷戊糖 堿基組成核酸的戊糖有兩種:：D-核糖和D-2-脫氧核糖，據(jù)此，可以將核酸分為兩種：核糖核酸（RNA） 和脫氧核糖核酸（DNA）P330表

2、5-1兩類核酸的基本化學組成堿基1. 嘌呤堿:2. 嘧啶堿:腺嘌呤鳥嘌呤胞嘧啶 尿嘧啶胸腺嘧啶P331結構式3.修飾堿基植物中有大量5-甲基胞嘧啶E.coli噬菌體中，5羌甲基胞嘧啶代替C。 稀有堿基：100余種，多數(shù)是甲基化的產(chǎn)物DNA由A、G、C、T堿基構成。RNA由A、G、C、U堿基構成。核苷核苷由戊糖和堿基縮合而成，糖環(huán)上Ci與嘧啶堿的N1或與嘌呤堿的N9連接 核酸中的核苷均為&型核苷P332結構式腺嘌呤核苷胞嘧啶脫氧核苷DNA的戊糖是：脫氧核糖RNA的戊糖是：核糖三、核苷酸核苷中戊糖C3、C5羥基被磷酸酯化，生成核苷酸。1、構成DNA、RNA的核苷酸P333表 5-32、細胞內(nèi)游離核

3、苷酸及其衍生物 核苷5多磷酸化合物ATP、GTP、CTP、ppppA PPPPG在能量代謝和物質代謝及調(diào)控中起重要作用。 環(huán)核苷酸cAMP (3, 5-cAMP) cGMP(3 5-cGMP)它們作為質膜的激素的第二信使起作用，cAMP調(diào)節(jié)細胞的糖代謝、脂代謝 核苷5多磷酸3多磷酸化合物ppGpp pppGpp ppApp 核苷酸衍生物HSCoA NAD+、NADP+、FAD 等輔助因子。GDP半乳糖、GDP-葡萄糖等是糖蛋白生物合成的活性糖基供體。第二節(jié)DNA的結構一級：脫氧核苷酸分子間連接方式及排列順序。二級：DNA的兩條多聚核苷酸鏈間通過氫鍵形成的雙螺旋結構。 三級：DNA雙鏈進一步折疊

4、卷曲形成的構象。DNA的一級結構DNA的一級結構是4種脫氧核苷酸（dAMP、dGMP、dCMP、dTMP）通過3/、5A磷酸二酯鍵連接起 來的線形多聚體。3/、5/-磷酸二酯鍵是DNA、RNA的主鏈結構。P334 圖 5-1書寫方法：5/ 3/:5-pApCpTpG3,或 5ACTG3（在 DNA 中，3/-OH一般是游離的）在DNA分子中，不變的骨架成分磷酸二酯鍵被逐漸省略，真正代表DNA生物學意義的是堿基的排列 順序。遺傳信息貯存在DNA的堿基排列順序中,生物界生物的多樣性即寓于DNA分子4種核苷酸千變?nèi)f化 的精確的排列順序中。二、DNA的二級結構1953年,Watson和Crick根據(jù)C

5、hargaff規(guī)律和DNA Na鹽纖維的X光衍射數(shù)據(jù)提出了 DNA的雙螺旋 結構模型。1、Watson-Crick雙螺旋結構建立的根據(jù) Chargaff規(guī)律 1950年a. 所有 DNA 中，A=T, G=C 且 A+G=C+T。P334表 5 4。b. DNA的堿基組成具有種的特異性，即不同生物的DNA皆有自己獨特的堿基組成。c. DNA堿基組成沒有組織和器官的特異性。d. 年齡、營養(yǎng)狀況、環(huán)境等因素不影響DNA的堿基組成。 DNA的Na鹽纖維和DNA晶體的X光衍射分析。相對濕度92%, DNA鈉鹽結晶，BDNA。相對濕度75%, DNA鈉鹽結晶，ADNA。ZDNA。生物體內(nèi)DNA均為BDN

6、A。Fran kli n的工作2、Watson-Crick雙螺旋結構模型P335 圖 52a兩條反平行的多核苷酸鏈繞同一中心軸相纏繞，形成右手雙股螺旋，一條53另一條35 b嘌呤與嘧啶堿位于雙螺旋的內(nèi)側，磷酸與脫氧核糖在外側。磷酸與脫氧核糖彼此通過3/、5A磷酸二 酯鍵相連接，構成DNA分子的骨架寬 1.2 nm寬 0.6nm小溝V深 0.85 nm深 0.75 nmc螺旋平均直徑2nm每圈螺旋含10個核苷酸堿基堆積距離：0.34nm螺距：3.4nmd兩條核苷酸鏈，依靠彼此堿基間形成的氫鏈結合在一起。堿基平面垂直于螺旋軸A=T、G=CP336圖 54堿基互補原則具有極重要的生物學意義，DNA的

7、復制、轉錄、反轉錄等的分子基礎都是堿基互補3、穩(wěn)定雙螺旋結構的因素 堿基堆積力（主要因素）形成疏水環(huán)境。 堿基配對的氫鍵。GC含量越多，越穩(wěn)定。 磷酸基上的負電荷與介質中的陽離子或組蛋白的正離子之間形成離子鍵，中和了磷酸基上的負電荷 間的斥力，有助于DNA穩(wěn)定。 堿基處于雙螺旋內(nèi)部的疏水環(huán)境中，可免受水溶性活性小分子的攻擊。三、DNA二級結構的不均一性和多型性（一）DNA二級結構的不均一性1、反向重復序列（回文序列）DNA序列中，以某一中心區(qū)域為對稱軸，其兩側的堿基對順序正讀和反讀都相同，即對稱軸一側的片 段旋轉180后，與另一側片段對稱重復。較長的回文結構，在某些因素作用下，可形成莖環(huán)式的十

8、字結構和發(fā)夾結構。功能還不完全清楚，但 轉錄的終止作用與回文結構有關。較短的回文序列，可作為一種特別信號，如限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點。2、富含A T的序列高等生物中，A+T與C+G的含量差不多相等，但在它們的染色體的某一區(qū)域，A T含量可能很高。在很多有重要調(diào)節(jié)功能（不是蛋白質編碼區(qū)）的DNA區(qū)段都富含A T堿基對。特別是在復制起點和 啟動的Pribnow框的DNA區(qū)中，富含A T對。這對于復制和轉錄的起始十分重要，因為G C對有三個氫 鍵，而AT對只有兩個氫鍵，此處雙鍵易解開。（二）DNA二級結構的多型性P339 表 5-6 A- B-、Z-DNA 的比較1、 B DNA:典型的 Wats

9、on-Crick雙螺旋 DNA右手雙股螺旋每圈螺旋10.4個堿基對每對螺旋扭角36螺距：3.32nm堿基傾角：12、A-DNA在相對濕度75%以下所獲得的DNA纖維。A-DNA也是右手雙螺旋，外形粗短。RNA-RNA、RNA-DNA雜交分子具有這種結構。3、Z-DNA左手螺旋的DNA。天然B-DNA的局部區(qū)域可以形成Z0-DNA。4、DNA三股螺旋在多聚嘧啶和多聚嘌呤組成的DNA螺旋區(qū)段，序列中有較長的鏡像重復時，可形成局部三股螺旋， 稱 H-DNA。鏡像重復：TAT配對C+GC酸對DNA的三鏈結構常出現(xiàn)在DNA復制、重組、轉錄的起始或調(diào)節(jié)位點，第三股鏈的存在可能使一些調(diào) 控蛋白或RNA聚合酶

10、等難以與該區(qū)段結合，從而阻遏有關遺傳信息的表達。四、環(huán)狀DNA生物體內(nèi)有些DNA是以雙鏈環(huán)狀DNA的形式存在，包括：某些病毒DNA 某些噬菌體DNA某些細菌染色體DNA細菌質粒DNA真核細胞中的線粒體DNA、葉綠體DNA1、環(huán)形DNA的不同構象P340圖5-8松馳環(huán)、解鏈環(huán)、負超螺旋(1) 、松弛環(huán)形DNA線形DNA直接環(huán)化(2) 、解鏈環(huán)形DNA線形DNA擰松后再環(huán)化(3) 、正超螺旋與負超螺旋DNA線形DNA擰緊或擰松后再環(huán)化，成為超螺旋結構。繩子的兩股以右旋方向纏繞，如果在一端使繩子向纏緊的方向旋轉，再將繩子兩端連接起來，會產(chǎn)生 一個左旋的超螺旋，以解除外加的旋轉造成的脅變，這樣的超螺旋

11、叫正超螺旋。如果在繩子一端向松纏方向旋轉，再將繩子兩端連接起來，會產(chǎn)生一個右旋的超螺旋，以解除外加的 旋轉所造成的脅變，這樣的超螺旋稱負超螺旋。對于右手螺旋的DNA分子，如果每圈初級螺旋的堿基對數(shù)小于10.4,則其二級結構處于緊纏狀態(tài)， 是正超螺旋。如果每圈初級螺旋的堿基對數(shù)大于10.4,則其二級結構處于松纏狀態(tài)，是負超螺旋。2、環(huán)形DNA的拓撲學特性以260bp組成的線形B-DNA為例，螺旋周數(shù)260/10.4=25P340圖25-8松馳環(huán)、解鏈環(huán)、負超螺旋 連環(huán)數(shù)(L)DNA雙螺旋中，一條鏈以右手螺旋繞另一條鏈纏繞的次數(shù)，以L表示。松馳環(huán)：L=25解鏈環(huán)：L=23超螺旋：L=23 纏繞數(shù)(

12、T)DNA分子中的Watson-Cric螺旋數(shù)目，以T表示松馳環(huán)T=25解鏈環(huán)T=23超螺旋T=25 超螺旋周數(shù)(扭曲數(shù)W)松馳環(huán)W=0解鏈環(huán)W=0超螺旋W= -2L=T+W 比連環(huán)差（為表示DNA的超螺旋程度入=（LLo） /LoLo是指松馳環(huán)形DNA的L值天然DNA的超螺旋密度一般為-0.03-0.09平均每100bp上有3-9個負超螺旋。負超螺旋DNA是由于兩條鏈的纏繞不足引起，很易解鏈，易于參加DNA的復制、重組和轉錄等需要 將兩條鏈分開才能進行的反應。3、拓撲異構酶此酶能改變DNA拓撲異構體的L值。 拓撲異構酶酶I （擰緊）能使雙鏈負超螺旋DNA轉變成松馳形環(huán)狀DNA，每一次作用可使

13、L值增加1,同時，使松馳環(huán)狀 DNA轉變成正超螺旋。 拓撲異構酶酶II （擰松）能使松馳環(huán)狀DNA轉變成負超螺旋形DNA，每次催化使L減少2,同時能使正超螺旋轉變成松馳 DNA。五、染色體的結構1、大腸桿菌染色體大腸桿菌染色體是由4.2X106bp組成的雙鏈環(huán)狀DNA分子，約3000個基因大腸桿菌DNA結合蛋白：每個細胞H兩個28KD的相同亞基30000個二聚體HU兩個各9KD的不同亞基40000個二體聚體HLP117KD的亞基20000個單體P3KD的亞基未知這些DNA結合蛋白，使4.2Xl06bp的E.coli染色體DNA壓縮成為一個手腳架形結構，結構中心是多 種DNA結合蛋白，DNA雙螺

14、旋分子有許多位點與這些蛋白結合，形成約100個小區(qū)，每個小區(qū)的DNA 都是負超螺旋，一個小區(qū)的DNA有兩個端點被蛋白質固定，每個小區(qū)相對獨立。圖用極微量的DNA酶I處理時，只能使少量小區(qū)的DNA成為松馳狀態(tài)，而其它小區(qū)仍然保持超螺旋狀2、真核生物染色體主要由組蛋白和DNA組成組蛋白是富含堿性a.a（Lys Arg）的堿性蛋白質，根據(jù)Lys/Arg比值不同，可分為Hi、H2A、H2B、H3、 H4五種，均為單鏈蛋白質，分子量11000-21000H2A、H2B、H3、H4各兩分子對稱聚集成組蛋白八聚體。146bp長度的DNA雙螺旋盤繞在八聚體上形成核小體。核小體間DNA長度15-100bp （般

15、60bp其上結合有H1圖2HA、2H2B、2H3、2H4組蛋白八聚體 146bpDNA *核小體串聯(lián)染色質折疊一染色體DNA （直徑 2nm）1盤繞組蛋白八聚體上，結合H1,壓縮比1/7核小體（一級結構）螺旋化，壓縮比1/6螺線管（二級結構）再螺旋化，壓縮比1/40超螺線管（三級結構）折疊，壓縮比1/5染色單體（四級結構）總壓縮比：1/84001/10000六、DNA的生物學功能首次直接證明DNA的遺傳功能的是Avery的肺炎雙球菌轉化實驗。P342 14 Avery的肺炎雙球菌轉化實驗第三節(jié) RNA的結構RNA的一級結構RNA是AMP、GMP、CMP、UMP通過3/、5麟酸二酯鍵形成的線形多

16、聚體。P343圖5-10 RNA基本結構組成RNA的戊糖是核糖 堿基中RNA的U替代DNA中的T,此外，RNA中還有一些稀有堿基。 天然RNA分子都是單鏈線形分子，只有部分區(qū)域是A-型雙螺旋結構。雙螺旋區(qū)一般占RNA分子 的50%左右。二、RNA的類型細胞中的RNA，按其在蛋白質合成中所起的作用，主要可分為三種類型。核糖體RNA rRNA轉運 RNA tRNA信使 RNA mRNA此外，真核生物細胞中有少量核內(nèi)小RNA (small nuclear RNA snRN)P344表5-7 大腸桿菌中的RNA沉降系數(shù)：單位離心場中的沉降速度，以S為單位，即1013秒。如23S rRNA，單位離心場中

17、沉降23X10-13秒5S rRNA，單位離心場中沉降 5X1013秒三、tRNA的結構tRNA約占全部RNA的15%主要功能：在蛋白質生物合成過程中轉運氨基酸。已知一級結構的tRNA有160種，每種tRNA可運載一種特定的a.a, 一種a.a可由一種或多種tRNA結構特點 分子量在25kd左右，70-90b沉降系數(shù)4S左右 堿基組成中有較多稀有堿基圖 3末端為CpCpA-OH,用來接受活化的氨基酸，此末端稱接受末端。 5末端大多為pG或pC 二級結構是三葉草形P345圖5-12 tRNA的二級結構(三葉草模型)1966年Crick對于tRNA能識別幾種密碼子的現(xiàn)象，提出堿基配對的“擺動學說”

18、認為除A-U、G-C配對外，還有非標準配對，l-A、l-C、I-U，并強調(diào)密碼子的5端第1、2個堿基嚴 格遵循標準配對，而第3個堿基可以非標準配對，具有一定程度的擺動靈活性。四、mRNA的結構mRNA是從DNA上轉錄而來的，其功能是依據(jù)DNA的遺傳信息，指導各種蛋白質的生物合成，每 一種蛋白質都由一種相應的mRNA編碼，細胞內(nèi)mRNA種類很多，大小不一，每種含量極低。從功能上講，一個基因就是一個順反子，原核生物的mRNA是多順反子，真核mRNA是單順反子。 順反子：是由順反試驗所規(guī)定的遺傳單位，相當于一種蛋白質的基因。1、真核mRNA(1) 、3-端有一段約30-300核苷酸的polyAPol

19、yA是轉錄后，經(jīng)polyA聚合酶添加上，polyA聚合酶對mRNA專一。原核mRNA 般無polyAo polyA與mRNA半壽期有關，新合成的mRNA，其polyA較長；而衰老 的mRNA，其polyA較短。polyA功能：PolyA是mRNA由核進入胞質所必需的形式。PolyA大大提高mRNA在胞質中的穩(wěn)定性。(2) 、5-帽子帽子5末端的鳥嘌呤N7被甲基化，鳥嘌呤核苷酸經(jīng)焦磷酸與相鄰的一個核苷酸相連，形成5-5-磷酸二酯 鍵。P346 帽子結構帽子的功能：可抵抗5核酸外切酶降解mRNA?？蔀楹颂求w提供識別位點，使mRNA很快與核糖體結合，促進蛋白質合成起始復合物的形成。2、原核mRNA

20、(多順反子)原核mRNA由先導區(qū)、插入序列、翻譯區(qū)和末端序列組成。沒有5/帽子和3/polyAo舉列：MS2病毒mRNA, 3569 b有三個順反子，分別編碼A蛋白、外殼蛋白和復制酶三種蛋白質。圖 MS2 病 mRNA5端先導區(qū)中，有一段富含嘌呤的堿基序列，典型的為5-AGGAGGU-3；位于起始密碼子AUG前約 10核苷酸處，此序列由Shine和Dalgarnc發(fā)現(xiàn)，稱SD序列。SD序列和核糖體16S的rRNA的3末端富含嘧啶堿基的序列互補，這種互補序列與mRNA對核糖體 的識別有關。原核mRNA代謝很快，半壽期幾秒至十幾分鐘。五、rRNA的結構rRNA占總RNA的80%左右。功能：rRNA

21、是構成核糖體的骨架，與核糖體結合蛋白一起構成核糖體，為蛋白質的合成提供場所。 大腸桿菌中有三類rRNA （原核）5S rRNA16S rRNA23S rRNA真核細胞有四類rRNA5S rRNA5.8S rRNA18S rRNA28S rRNA圖 原核核糖體（rRNA部分）圖 真核核糖體（rRNA部分）P346圖5-14 大腸桿菌 5S rRNA 結構第四節(jié) 核酸的性質解離性質多聚核苷酸有兩類可解離的基團：磷酸和堿基能發(fā)生兩性解離。 磷酸是中等強度的酸，堿基的堿性較弱，因此，核酸等電點在較低的pH范圍內(nèi)。DNA等電點44.5RNA等電點22.5RNA鏈中，核糖COH的氫能與磷酸酯中的羥基氧形成

22、氫鏈，促進磷酸酯羥基氫原子的解離水解性質1、堿水解室溫，0.1mol/LNaOH可將RNA完全水解，得到2或3-磷酸核苷的混合物。圖在相同條件下，DNA不被水解。這是因為RNA中C2-OH的存在，促進了磷酸酯鍵的水解。DNA、RNA水解難易程度的不同具有極為重要的生理意義。DNA穩(wěn)定，遺傳信息。RNA是DNA的信使，完成任務后降解。2、酶水解生物體內(nèi)存在多種核酸水解酶RNA水解酶RNaseDNA水解酶 DNase核酸外一切酶核酸內(nèi)切酶 最重要的：限制性核酸內(nèi)切酶三、光吸收性堿基具有共軛雙鍵，使堿基、核苷、核苷酸和核酸在24029 Onm的紫外波段有強烈的光吸收,入 max=260nm1、鑒定純

23、度純 DNA 的 A260/A280應為 1.8 （1.65-1.85,若大于 1.8,表示污染了 RNA 純 RNA 的 A260/A28o應為 2.0。若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則A260A280比值明顯降低。2、含量計算1 ABS值相當于：50ug/mL雙螺旋DNA或：40ug/mL單螺旋 DNA （或 RNA）或：20ug/mL核苷酸3、增色效應與減色效應P347圖5-15 DNA的紫外吸收光譜增色效應：在DNA的變性過程中，摩爾吸光系數(shù)增大 減色效應：在DNA的復性過程中，摩爾吸光系數(shù)減小。四、沉降特性（DNA）不同構象的核酸（線形、環(huán)形、超螺旋），起密度和沉降速率不同，用Cs-Cl

24、密度梯度離心就可以將它 們區(qū)分開來，這一方法常用于質粒DNA的純化P348圖516 Cs-CI密度梯度離心純化質粒DNA相對沉降常數(shù)線型雙螺旋分子1.00松馳雙鏈閉環(huán)1.14切刻雙鏈環(huán)1.14單鏈環(huán)1.14線型單鏈1.30正超或負超螺旋雙鏈環(huán)狀1.41坍縮3.0五、變性、復性及雜交變性、復性是核酸的重要的物化性質，相對蛋白質來說，核酸可以耐受反反復復的變性、復性。這也 是核酸研究技術的基礎。1、變性（1）、變性：核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈，不涉及共價鍵斷裂。多核苷酸骨架上共價鍵的斷裂稱核酸的降 解。DNA的變性是爆發(fā)式的，變性作用發(fā)生在一個很窄的溫度范圍內(nèi)。P350圖5-18變性過程熱變

25、性因素*酸堿變性（pH小于4或大于11,堿基間氫鍵全部斷裂）變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛）r 260nm吸收值升高。變性后彳粘度降低，浮力密度升高。 、二級結構改變，部分失活。（2）、熔解溫度（Tm或稱熔點：DNA的雙螺旋結構失去一半時對應的溫度。DNA的Tm一般在70-85C之間。濃度50ug/mL時，雙鏈DNA A260=1.00,完全變性（單鏈）A26（= 1.37當A260增加到最大增大值一半 時，即1.185時，對應的溫度即為Tm。（3）、影響DNA的Tm值的因素 DNA均一性均一性高，熔解過程發(fā)生在很小的溫度范圍內(nèi)。 G-C含量與Tm值成正比，G-C含量高，則Tm越高，測定Tm,可推

26、知G-C含量。G-C%=（Tm-69.3 X2.44P351圖5-19 圖5-20 Tm值與GC含量的關系 介質中離子強度其它條件不變，離子強度高，Tm高。P351 圖 5-212、復性變性DNA在適當（一般低于Tm20-25C）條件下，兩條鏈重新締合成雙螺旋結構。變性DNA在緩慢冷卻時（快速冷卻可防止復性），可以復性。DNA片段越大，復性越慢；DNA濃度 越大，復性越快。復性速度可用Co t衡量。Co為變性DNA原始濃度molL-1, t為時間，以秒表示。P352圖5-22,不同DNA的復性時間。A. 1個核苷酸對（A.U）圖上查出 Cot1/2=4X 10“mol.s/L若濃度為Co=1.

27、0m mol/L則復性50%所需時間t=0.004秒若要全部復性，Cot=104 t=0.1秒B. E.coli 4.2X 106堿基對圖上查出 Cot1/2=10 mol.s/L若濃度 Co=1.0 umol/L則復性 50%所需時間 t=107秒，約 115天。復性 100%Ct=500 mol.s/Lt=5X 108 秒，5758天。對于E.coli，4.2X 106bp,濃度達到umol/L級時，濃度已很高。復性機制：10-20bp成、拉鏈3、雜交（DNADNA、DNARNA）將不同來源的DNA混合加熱，變性后，慢慢冷卻使它復性。若這些異源DNA之間，在某些區(qū)域有相 同的序列，則復性時

28、會形成雜交分子。第五節(jié)核酸研究技術一、核酸的分離純化要求：盡可能保持其天然狀態(tài)。條件溫和，防止過酸、過堿。 避免劇烈攪拌，抑制核酸酶。1、DNA分離純化真核DNA以核蛋白（DNP）形式存在，DNP溶于水或鹽（1mol/L）,但不溶于0.14mol/L Nac中，利 用此性質，可將DNP與RNA核蛋白分開，提取出DNP。DNA核蛋白可用水飽和的酚抽提，去除蛋白質。還可用氯仿異戊醇去除蛋白質。2、RNA的制備（重點介紹mRNA的分離、純化）用0.14mol/L Nac使 DNP沉淀，上清中即為RNA核蛋白（RNP）。去蛋白：鹽酸胍、苯酚等必須防止RNA酶對RNA的破壞。二、核酸的凝膠電泳1、瓊脂糖

29、電泳 核酸分子的大小，遷移率與分子量的對數(shù)成反比 凝膠濃度 DNA的構象，超螺旋最快，線形其次，環(huán)形最慢。 電流，不大于5V/cm2、PAGE電泳三、限制性核酸內(nèi)切酶（1979年發(fā)現(xiàn)）1、限制修飾系統(tǒng)2、II型核酸內(nèi)切酶核酸內(nèi)切酶有I、II、III三種類型，其中II型酶在DNA克隆中十分有用。II型酶的特點：限制和修飾活性分開，蛋白質結構是單一成分，輔助因子Mg2+,位點序列旋轉對稱（反 向重復）。II型酶的切割頻率識別位點444=2564 =4096Not I GCGGCCGC限制酶的命名：第一位：第二、三位：第四位：第五位：48=65536E.coRI（大寫）屬名E種名的頭兩個字母小寫co

30、菌株R羅馬字，從該細菌中分離出來的這一類酶的編號。同裂酶：來源不同的限制酶（名稱自然不同），識別同樣的核苷酸靶序列，產(chǎn)生同樣的切割，形成同樣 的末端。|BamH:GGATCC同裂酶 BstIBamHI：同裂酶:識別位點相同，切割位點相同，產(chǎn)生同樣的粘性末端。 同尾酶：來源各異，識別的靶序列不同，但都產(chǎn)生相同的粘性末端。GGATCCBstI GGATCC同尾酶:BclI TGATCA BglII AGATCTMbol GATC Sau3A GATC星號活力：在一定條件下（低離子強度，堿性pH,或50%甘油），限制酶的特異性降低。結果，它的 識別與切割所需的典型的核苷酸序列的數(shù)量和種類會發(fā)生變化。

31、例女口 Hi ndHI AAGCTT四、DNA物理圖譜及構建（限制酶切圖譜、DNA酶切位點圖譜）在研究某一種DNA時，弄清該DNA分子有哪些限制酶切位點是很重要的。建立物理圖譜是進一步分 析此DNA的基礎，末端標記法構建DNA物理圖譜：（1）單酶完全降解和部分降解雙酶降解圖五、分子雜交1、 Southern BlottingP353 圖 5-23DNA樣酶切電泳* 變性轉膜定雜交洗滌放射自顯影變性（NaOH 0.5mol/L轉膜（NC膜）固定（80C, 4-6h雜交（高鹽濃度，68C，幾小時）Southern Blottin可用于DNA之間同源性分析，確定特異性DNA序列的大小和定位?？捎肈NA或RNA探針。2、 Northern Blotting研究對象是mRNA檢測可與探針DNA同源雜交的mRNA分子的存在，因而可以研