水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)

1、水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握水的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法2、了解水質(zhì)狀況與細(xì)菌數(shù)量在飲用水檢測(cè)中的重要性.2 . 菌落總數(shù) standard plate-count bacteria水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上、有氧條件下37.C培養(yǎng)48 h后,所得1 mL水樣所含菌落的總數(shù).細(xì)菌總數(shù)是評(píng)價(jià)水質(zhì)污染程度的主要衛(wèi)生指標(biāo),所測(cè)定的細(xì)菌總數(shù)增多說(shuō)明水被生活廢棄物 污染.由于結(jié)果不能說(shuō)明污染的來(lái)源,因此必須結(jié)合總大腸菌群數(shù)來(lái)判斷污染源和平安程 度.3 .培養(yǎng)基與試劑3.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂成分3.2 制法：根據(jù)實(shí)際需要量,根據(jù)上述配方稱(chēng)取各成分混合后,加熱溶解,調(diào)整 pH 為7.47.6 ,分裝于玻璃容器中如用含有

2、較多雜質(zhì)的瓊脂,應(yīng)先過(guò)濾.,經(jīng)103.43 kPa121° C,15 lb濕熱滅菌20 min,儲(chǔ)存于冷暗處備用.4 .儀器和材料儀器：高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、水熱恒溫培養(yǎng)箱、電爐、天平、冰箱.材料：滅菌平皿直徑9 cm、滅菌試管、刻度吸管、三角燒瓶、采樣瓶、酒精燈、消毒水、鑲 子、試管架等.放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器、pH計(jì)或精密pH試紙、火柴或打火機(jī).5 .樣品采集自來(lái)水的取樣：先將自來(lái)水龍頭用酒精棉擦拭,再用酒精燈火焰滅菌,翻開(kāi)龍頭放水3-5 min,用無(wú)菌空三角瓶接取水樣200 ml純潔水取樣：用消毒酒精棉擦拭純水機(jī)出口后,先放走局部水,再用無(wú)菌空三角瓶接取水樣200毫升.地表水

3、的取樣：應(yīng)取距水面 10-15 cm的深層水樣,先將滅菌的帶玻璃塞瓶,瓶口向下 浸入水中,然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái),除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛滿(mǎn)后,將瓶塞蓋好,再?gòu)乃?取出,最好立即檢查,否那么需放入冰箱中保存.6 .檢驗(yàn)步驟生活飲用水自來(lái)水、純潔水：以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1 mL充分混勻的水樣,注入滅菌培養(yǎng)皿中,傾注約 15 ml已融化并冷卻到45.C左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并 立即旋搖平皿,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻.每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種,同時(shí)另用一個(gè)平 皿只傾注培養(yǎng)基作為空白對(duì)照.待冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿, 使底面向上,置于36° C土 1° C條件下連續(xù)培養(yǎng)48 h,進(jìn)行

4、菌 落計(jì)數(shù),即為1 ml水樣中的菌落總數(shù).水源水：以無(wú)菌操作方法吸取 1 ml充分混勻的水樣,注入盛有 9 ml滅菌生理鹽水的 試管中,混勻呈1:10稀釋液.吸取1:10稀釋液1 ml,注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中,混勻呈 1:100稀釋液. 按同法依次稀釋成1:1000、1:10000稀釋液備用.如此遞增稀釋一次,必須更換一支刻度 吸管.用滅菌吸管吸取1 ml未稀釋的水樣和23個(gè)適宜稀釋度的水樣,分別注入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi), 其余操作同6.1 生活飲用水的檢驗(yàn)步驟.7 .菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí),可用眼睛直接觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查以防遺漏.在記下各平皿 的菌落數(shù)后,應(yīng)求出同稀釋

5、度的平均菌落數(shù),供下一步計(jì)算時(shí)應(yīng)用.在求同稀釋度的平均數(shù)時(shí),假設(shè)其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落產(chǎn)生時(shí),那么不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落產(chǎn)生的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù).假設(shè)片狀菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻,那么可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù).然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù).不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間者進(jìn)行計(jì)算,假設(shè)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí),那么將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見(jiàn)表 1中實(shí)例1 o假設(shè)有兩個(gè)稀釋度,其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在 30300之間,那么視二者之比值來(lái)決定：假設(shè)其比值 小于2,應(yīng)報(bào)告兩者的平均數(shù)如表 1實(shí)例2;假設(shè)

6、比值大于2,那么報(bào)告其中稀釋度較小的 菌落數(shù)如表1實(shí)例3 o假設(shè)等于2亦報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù)見(jiàn)表 1實(shí)例4 o假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,那么應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見(jiàn)表1中實(shí)例5 o假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30,那么應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見(jiàn)表1中實(shí)例6 o3假設(shè)所有稀釋度的平均菌落數(shù)不在 30300之間,那么應(yīng)以最接近 30或300的平均菌落數(shù)乘 以稀釋倍數(shù)報(bào)告之見(jiàn)表1中實(shí)例7 o假設(shè)所有稀釋度的平板上均無(wú)菌落生長(zhǎng),那么以“未檢出報(bào)告之.如果所有平板上都菌落密布,不要用“多不可計(jì)報(bào)告,而應(yīng)在稀釋度最大的平板上,任意數(shù)其中2個(gè)平板1 cm2中的菌落數(shù),除2求出每平方厘米內(nèi)平均菌落總數(shù),乘以皿底面積63.6 cm2,再乘以其稀釋倍數(shù)報(bào)告之菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在 100以?xún)?nèi)時(shí),按實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí),采用兩位有效數(shù)字,在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入法計(jì)算；為了縮短后面的零數(shù),也