槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1

1、槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握比色法測(cè)定槐花藥材中總黃酮含量的方法與原理。2 、熟悉槐花藥材的含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)原理槐花為豆科植物槐SophoaponicaL的枯燥花與花蕾。夏季花開(kāi)放或花蕾系 形成時(shí)采收，與時(shí)枯燥，除去枝、梗與雜質(zhì)。前者習(xí)稱(chēng)“槐花，后者習(xí)稱(chēng)“槐米?；被ㄋ幉牡闹饕行С煞菔屈S酮類(lèi)化合物，其中蘆丁的含量最高，所以槐花藥材 的鑒別與含量測(cè)定均以蘆丁為指標(biāo)成分。黃酮類(lèi)化合物在堿性條件下與鋁鹽發(fā)生配位反響，生成紅色的配位化合物，使得最 大吸收波長(zhǎng)紅移至可見(jiàn)光區(qū)，且具有較高的吸收系數(shù)。黃酮類(lèi)與鋁鹽的配位反響是 定量完成的，因此可采用比色法測(cè)定槐花藥材中總黃酮的含量，防

2、止其他非黃酮成 分對(duì)測(cè)定準(zhǔn)確度的影響。儀器與試藥 儀器：紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)、100ml容量瓶、25ml容量瓶、10ml移液管，超聲 波清洗器、漏斗、玻璃棒、燒杯、膠頭滴管、洗耳球等。試劑：槐花藥材、蘆丁對(duì)照品、 5%亞硝酸鈉溶液、 10%硝酸鋁溶液，氫氧化鈉試 液、甲醇、乙醇等。 實(shí)驗(yàn)步驟 1 線性圍考察1.1 供試品溶液的制備將槐花研碎，取粗粉約1g，精密稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中，加 60% (V/V)乙 醇100ml，稱(chēng)定重量，超聲30分鐘，用60% (V/V)乙醇補(bǔ)足失重，搖勻，過(guò)濾， 取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。(?中國(guó)藥典?2021版：

3、將槐花研碎，取粗粉約1g，精密稱(chēng)定，置索氏提取 器中，加乙醚適量，加熱回流至提取液無(wú)色，放冷，棄去乙醚液。再加甲醇 90ml，加熱回流至提取液無(wú)色，轉(zhuǎn)移至 100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液 并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。)1.2 線性關(guān)系的考察分別取供試品溶液 1ml、 2ml、 3ml、 4ml、 5ml 與 6ml 于 25ml 容量瓶中，各加 水使成6.0ml，精密加5%亞硝酸鈉溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，再加10%硝酸 鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml，加水稀釋至刻度，搖 勻，放

4、置 15分鐘，不加對(duì)照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見(jiàn)分光光度 法，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液的吸光度。根據(jù)響應(yīng)信號(hào)選擇最正確的供試品溶 度。2 總黃酮含量測(cè)定2.1 對(duì)照品溶液的制備取蘆丁對(duì)照品50mg精密稱(chēng)定，置于25ml量瓶中，加60%L醇適量，置水浴 上微熱使溶解，放冷，加60°/乙醇至刻度，搖勻。精密量取10ml,置于100ml量瓶 中，加水至刻度，搖勻，即得濃度為 0.2mg/ml的蘆丁對(duì)照品溶液。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液1ml,2ml,3ml,4ml,5ml 與6ml，分別置于6個(gè)25ml量瓶 中，各加水使成6.0ml，精密加5/亞硝酸鈉溶液1.0

5、ml，搖勻，放置6分鐘，再加 10%肖酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml，加水稀釋至 刻度，搖勻，放置15分鐘，不加對(duì)照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見(jiàn)分 光光度法，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液的吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度 C (mg/ml)0.000 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048吸光度A2.3 測(cè)定法精密量取供試品溶液3ml，置25ml量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“加水使成6.0ml 起同法測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含蘆丁的 重量。槐花按枯燥品計(jì)算，含總黃酮以蘆

6、丁( G7foO6)計(jì)，槐花不得少于8.0%,槐米不得少于20.0%。樣品濃度C (mg/ml)123平均值吸光度A濃度 C (mg/ml)百分含量(%3方法學(xué)驗(yàn)證考察3.1精密度試驗(yàn)指用相同方法對(duì)同一樣品溶液進(jìn)行屢次測(cè)定，考察各測(cè)定值彼此接近的程度。具體 如下：取同一樣品，連續(xù)測(cè)定五次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RS%不得大于2.0 %。具體如下：精密度試驗(yàn)操作方法：取同一槐把戲品溶液 5 ml ,在500 nm處測(cè)吸光度， 重復(fù)測(cè)定5次，算出RSD測(cè)試次數(shù)12345吸光度A3.2 重復(fù)性試驗(yàn)每份供試品液再分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算其含 量的平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%。具體如下：

7、同一批號(hào)樣品，分別取低、中、 高三個(gè)樣品量，每個(gè)樣品量3份，按樣品測(cè)定方法操作?；蛟谝?guī)定圍，取同一濃度 的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RS%不得大于2.0 %。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)操作方法：精密稱(chēng)取藥材樣品1g，精密稱(chēng)定，共6份，按供試品制備方法制成供試品溶液按測(cè)定法分別在 500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液的吸光度。由 標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出供試品溶液中含蘆丁的重量ug并求RSDfio樣品 123456吸光度A含量ug3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察不同時(shí)間點(diǎn)是否對(duì)測(cè)定方法和測(cè)定結(jié)果有影響，用同一被測(cè)樣品的供試液在不同間隔時(shí)間用同一測(cè)定方法所得到的測(cè)定結(jié)果。一般考察36小時(shí)，這里考察60min計(jì)算RSD不得大

8、于3.0 %。對(duì)照和樣品均要做。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)操作方法：取蘆丁對(duì)照品和樣品溶液5ml,于0, 15, 30, 45, 60 min，測(cè)定吸光值，計(jì)算吸光度平均值，求出RSD判斷樣品的穩(wěn)定性。""時(shí)間min015304560平均值吸光度A3.4 加樣回收試驗(yàn)一般回收率要求在 95.0105.0 %。詳解：加樣回收試驗(yàn)即于被測(cè)成分含量的成藥中再精密參加一定量的被測(cè) 成分純品，依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與原樣品中含測(cè)成分之差，除以參加純品量計(jì)算回 收率。此法不用制備空白對(duì)照，模擬真實(shí)性好。加樣回收試驗(yàn)操作方法：取樣品6份精密稱(chēng)定每份0.5g，精密參加蘆丁對(duì)照品 適，同按照供試品溶液的制備法和測(cè)定法步驟在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定各濃度的吸光度，計(jì)算含量?；厥章?實(shí)驗(yàn)測(cè)得量實(shí)驗(yàn)前樣品含量參加對(duì)照品含量100%須知: 純品的加人量與取樣量中被測(cè)成分之和必須在標(biāo)淮曲線線性關(guān)系圍之； 外加純品的量要適當(dāng)，過(guò)小那么引起較大的相對(duì)誤差，過(guò)大那么干擾成分相對(duì)減 少，真實(shí)性差。 一般參加量與所取樣品含量之比控制在1: 1左右 做加樣試驗(yàn)時(shí)，有人將