豬場病料采集及注意事項(xiàng)

1、豬場病料采集及注意事項(xiàng)豬場病料采集有多種類型，包括鼻拭子，口腔拭子，肛門拭子，血液樣 及各類組織樣，當(dāng)前非瘟熒光PCR檢測使用較多的是鼻拭子、口腔拭子及 環(huán)境樣拭子，豬場常規(guī)監(jiān)測更多的是應(yīng)用ELISA檢測血液中抗體的變化， 如果想做抗原檢測會(huì)取內(nèi)臟組織樣做PCR檢測或分離病毒細(xì)菌。采集不同 類型的樣品有著不同的方法及注意事項(xiàng)，這里重 點(diǎn)介紹血液樣及組織樣的 采集及其注意事項(xiàng)。一、做好人員、物資、運(yùn)輸方面前期的準(zhǔn)備。要求采樣人員采樣技術(shù)熟練，如無相關(guān)經(jīng)驗(yàn)最好做簡單培訓(xùn)再操作;按 計(jì)劃采樣時(shí)保鮮袋、自封袋、真空采血管及EP管數(shù)量要充足，同時(shí)最好備 有一臺(tái)高速離心機(jī);采集好的病料要能及時(shí)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，

2、應(yīng)作好相關(guān)的運(yùn)輸 計(jì)劃安排。采樣器、保定繩套等還要注意消毒、運(yùn)輸容器及冰塊也要提前準(zhǔn) 備好。要求做好各項(xiàng)準(zhǔn)備工作后再進(jìn)行樣品采集。1. 一次性注射器（5mL） ,10毫升抗凝管，酒精棉球若干（采集血樣）2. 2mL離心管，棉簽（2支/頭），500mL生理鹽水（采集唾液拭子）3. 10mL離心管，淋巴取樣器（1支/頭），500mL生理鹽水，酒精棉 球若干（采集淋巴）4. 解剖刀柄（1把），解剖刀片（1包）（采集組織樣品）5. 一次性手套若干雙，乳膠手套若干雙，防護(hù)服若干套、水鞋（1套 /人），保定繩（8根），記號筆3支6. 帶冰袋采樣泡沫箱/車載冰箱（1個(gè)），3%燒堿消毒桶（1個(gè)），1： 200

3、衛(wèi)可消毒桶（1個(gè)），高于70度水溫消毒桶（1個(gè)），75%酒精（500mL），生石灰若干二、血液樣采集1采血前先做好豬只保定。（1）保定繩在水溫超過70攝氏度的消毒桶先浸泡10分鐘；（2）采樣人員穿上工作服和干凈的水鞋，帶上乳膠手套，外套一次 性防護(hù)服；（3）人員腳踏3%燒堿消毒桶，進(jìn)入欄舍；20Kg以下豬只取仰臥保定，20Kg以上豬只以保定繩套保定，讓豬的胸前凹窩充分暴露。2采血。（1）盡量取前腔靜脈采血：豬前腔靜脈，在第一對肋骨間的胸腔入 口處的氣管腹側(cè)面，由左右兩側(cè)頸靜脈和腋靜脈匯合形成。該血管在一周 齡豬直徑約5毫米，成年豬約1厘米以上。采血部位在第一對肋骨與胸骨 柄結(jié)合處直前，但由于左

4、側(cè)靠近隔神經(jīng)，以右側(cè)采血為宜。豬前腔靜脈采血圖（2）選用合適的注射器及針頭公母豬宜選用16號50mm針頭;30kg以上的中大豬 直選用12號38mm 針頭;1030kg小豬，可選用9號25mm(一次性注射器常配的針頭);10kg以 下仔豬，應(yīng)選擇9號20mm針頭。(3)選準(zhǔn)進(jìn)針的部位一般來說，30千克以下的小豬應(yīng)采兩前肢與氣管交匯處，種公母豬和30千克以上的中大豬可選頸部最低凹處。進(jìn)針時(shí)又要掌握好一定 的方向、角度和深度，要及時(shí)調(diào)整。血管被刺穿，會(huì)引起血腫，要立即停 止采血，須換另一頭豬采血。特別要注意的是對仔豬采血時(shí)，不能太猛、 太深，以免傷及心包或心臟。3血液樣保存及運(yùn)輸(1)用真空采血器

5、采集的血樣，直接傾斜放置好。(2)夏天在常溫下放置一段時(shí)間，冬天要放置在2537。(3溫水中一段 時(shí)間，以利于血液中血清的析出。(3) jflL樣送檢時(shí)，在保溫箱加適量的冰塊防止血液變質(zhì)，送檢過 程中盡量防止劇烈振蕩。需要指出的是，血液和血清是完全不同的概念!血清是血液的組成部分， 它必須從血液中分離出來后，才能用于血清學(xué)試驗(yàn)，但這種分離過程需要專 業(yè)人員來操作。因此，采集的血樣，最好在凝固后，直接送到檢測單位，以 保證血清學(xué)試驗(yàn)的正確進(jìn)行。一般采血25毫升就足以滿足實(shí)驗(yàn)室診斷的 用量了?！咎崾荆糜谘鍖W(xué)試驗(yàn)的血樣，不能加任何抗凝血?jiǎng)?！?、血液樣采集注意事項(xiàng):(1)擦拭采血部位的灑精未干，

6、不要立即采血。血液混進(jìn)酒精后易造 成溶血(使檢測結(jié)果不準(zhǔn))；(2)血液在運(yùn)輸過程中，防止劇烈展蕩，使血細(xì)胞破裂引起溶血(要注 意血液防震)(3)血液存放的容器要確保干燥。三、組織樣采集：(-)疑似豬瘟的病料采集：1放血。先把豬腋下動(dòng)脈放血處死。2解剖摘取扁桃體。從胸部中線偏右處，切斷肋骨，打開胸腔，在氣管 與肺臟連接處向前510厘米位置，割斷氣管，并順著氣管向前割開，直至 咽喉部，從后向前將氣管割斷一半，這時(shí)就可以在舌跟靠近上腭的左右兩邊 看到兩個(gè)淋巴結(jié)，即扁桃體。小心取下扁桃體放置于干凈的保鮮袋中，并做 標(biāo)記。3解剖摘取肺門淋巴結(jié)。一只手握住氣管切斷處，使勁向外拉出肺臟， 另一只手幫忙扯斷肺

7、臟與身體的連接，并將整個(gè)肺臟翻轉(zhuǎn)過來，使背而向上， 此時(shí)可在支氣管與肺臟連接處，找到分別位于左右兩側(cè)的兩個(gè)肺門淋巴結(jié)， 小心摘取，放置于另一個(gè)干凈的保鮮袋中，并做標(biāo)記。4肺臟樣品的采集。如有必要，可割取部分肺臟樣品，一般只要割取介 于病變和正常組織之間的部分，放置于一個(gè)干凈的保鮮袋中，并做標(biāo)記，當(dāng) 然也可以將整個(gè)肺臟保存。5解剖摘取腹股溝淋巴結(jié)。將兩條后腿，向下向外壓，就可以在兩側(cè)凹 陷的腹股溝處中間部位，看到微微或明顯的隆起，即腹股溝淋巴結(jié)，小心割 開皮膚和淋巴結(jié)表面的被膜，小心摘取，放置于一個(gè)干凈的保鮮袋中，并做 標(biāo)記。6解剖摘取脾臟。沿腹中線將腹部皮膚、肌肉和腹膜，小心切開并打開 腹腔，

8、在腹腔的左側(cè)位于胃和回腸下面，找到脾臟，小心摘取，放置于一個(gè) 干凈的保鮮袋中，并做標(biāo)記。7解剖摘取腸系膜淋巴結(jié)。從腹腔的右側(cè)位于肝臟和胃下面，找到腸系 膜，在腸系膜靠近腸道的末端，可以看到很多結(jié)節(jié)，即腸系膜淋巴結(jié)，小心 摘取，放置于一個(gè)干凈的保鮮袋中，并做標(biāo)記。8流產(chǎn)胎兒。對于新鮮流產(chǎn)的胎兒，可作為檢測樣品。對于流產(chǎn)日齡較 早的胎兒，可取整個(gè)胎兒保存;如果是晚期流產(chǎn)的胎兒最好根據(jù)上述步驟， 摘取相應(yīng)組織，保存送檢。（-）、疑似藍(lán)耳病病例的病料采集：具體病料采集程序與豬瘟病料的采集基木一致（包括步驟1、3至6、8），需要強(qiáng)調(diào)的是，在藍(lán)耳病的檢測中，必須包括淋巴結(jié)和肺臟樣木！ 如果檢測流產(chǎn)胎兒，那

9、么，最好能剪取部分胎衣液或剪取胎衣樣木，保存 方法同上。（三）、疑似圓環(huán)病毒感染病例的病料采集：對于疑似圓環(huán)病毒感染的病例，病料采集包括步驟1、3至7。記住，在圓環(huán)病毒的檢測中，必須包括淋巴結(jié)樣品。（四）、疑似偽狂犬病病例的病料采集:因偽狂犬病病毒可危害呼吸系統(tǒng)、繁殖系統(tǒng)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此， 病料采集包括步驟1至8。同時(shí)，還要采集神經(jīng)系統(tǒng)的樣品。具 體步驟為 用手術(shù)刀片將豬的頭皮剝?nèi)ィ冻鲱^蓋骨，然后用鑿子（也可用一字螺絲 刀），輕輕鑿開頭蓋骨，并清理骨頭碎片，等整個(gè)大腦露出后，小心用手 摘取，放置于一個(gè)干凈的保鮮袋中，并做標(biāo)記。（五）、疑似流行性腹瀉病例的病料采集：本病的病料采集，包括步驟1、5、7o同時(shí)需要采集腸道樣品。從腹 腔中剪取病變的小腸1015厘米，從一側(cè)將腸道剪開，輕輕刮去腸道內(nèi) 容物，然后放置于一個(gè)干凈的保鮮袋中，并做標(biāo)記。（六）疑似流感病例的病料采集：按照上述方法采集肺臟和淋巴結(jié)即可。（七）檢測病料的運(yùn)輸注意事項(xiàng)：（1）死亡的豬應(yīng)盡快采集，夏天不應(yīng)超過2小時(shí)，冬天不超過6小 時(shí)。（2）采集豬的病料必須新鮮，要采集有病變部位的材料，盡可能 減少污染。（3）用于檢驗(yàn)的內(nèi)臟組織塊不必太大。但取樣要有代表性